銀杏葉總黃酮對(duì)糖尿病大鼠的降糖作用研究

摘 要：目的：考察銀杏葉總黃酮對(duì)鏈脲佐菌素(STZ)致糖尿病大鼠的治療作用。方法：采用注射高劑量鏈脲佐菌素建立大鼠1型糖尿病模型，給予銀杏葉總黃酮治療，觀察總黃酮對(duì)糖尿病大鼠血糖和血脂的改善作用及對(duì)與葡萄糖吸收相關(guān)酶Akt活性的影響。結(jié)果：銀杏葉總黃酮可降低糖尿病大鼠的血糖，對(duì)糖尿病大鼠的血脂代謝有顯著的改善作用，與模型組比較，HDL明顯升高(p<0.01)，而甘油三酯、膽固醇、LDL顯著降低(p<0.01)，增加Akt的酶活性。結(jié)論：銀杏葉總黃酮有改善糖尿病大鼠血糖和血脂的作用。

關(guān)鍵詞：銀杏葉總黃酮；糖尿?。谎?；血脂

中圖分類號(hào)：R587.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1673-2197(2008)07-000-00

糖尿病是一種常見的代謝內(nèi)分泌病，高血糖是其重要特性。隨著世界人口的老齡化，糖尿病已成為一種常見病、多發(fā)病，并且發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。由于高血糖引起糖代謝紊亂，繼發(fā)引起脂肪、蛋白質(zhì)代謝障礙，并由此導(dǎo)致心血管病變、腎功能衰竭、視網(wǎng)膜病變以及神經(jīng)系統(tǒng)障礙性病變，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量^[1]。因此研究和開發(fā)防治糖尿病及其并發(fā)癥的藥物日益受到人們的重視。近年來，中草藥的開發(fā)在治療糖尿病及其并發(fā)癥的研究中已取得了非常大的進(jìn)展，分離出許多藥效效果良好的活性成分^[2]。

銀杏為銀杏科植物，銀杏葉中富含黃酮類化合物與銀杏內(nèi)酯，其提取物是一類作用廣泛、不良反應(yīng)較少的天然藥物來源。大量研究證實(shí)黃酮類化合物具有調(diào)節(jié)血脂、清除自由基及保護(hù)心肌和血管內(nèi)皮細(xì)胞等功能^[3，4]；有研究表明銀杏葉提取物對(duì)小鼠胰島β細(xì)胞有保護(hù)功能^[5，6]。本研究旨在探討銀杏葉總黃酮對(duì)STZ致糖尿病大鼠的治療作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(南京青龍山動(dòng)物中心)，體重200±20g；銀杏葉總黃酮、二甲雙胍(南京市青澤醫(yī)藥科技有限公司)；STZ(Sigma)；血糖試、甘油、膽固醇三酯劑盒(長(zhǎng)春迪瑞實(shí)業(yè)有限公司)；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 糖尿病大鼠模型的建立

取健康雄性SD80只，隨機(jī)分出10只為正常組，其余大鼠在禁食6h后，尾靜脈注射新配制的STZ(60mg/Kg)，正常組在禁食6h后，于尾靜脈注射等體積生理鹽水，自由飲食3d后，再禁食8h，尾靜脈取血測(cè)定血糖值。

1.3 銀杏葉總黃酮對(duì)糖尿病大鼠的治療

取空腹血糖值(fasting blood glucose，F(xiàn)BG)大于11.5mmol/L的大鼠為實(shí)驗(yàn)組，隨機(jī)分為五組，即模型組，陽性藥(二甲雙胍，500mg/Kg)對(duì)照組，按銀杏葉總黃酮低(125mg/Kg)、中(250mg/Kg)、高劑量(500mg)分成3組，每組8只。給藥組和陽性藥對(duì)照組分別通過灌胃給予銀杏葉總黃酮及二甲雙胍，每天1次，連續(xù)給藥15d，正常組和模型組灌胃給予等體積的生理鹽水。實(shí)驗(yàn)結(jié)束，禁食12h，各組動(dòng)脈插管取血測(cè)定血糖、血脂。

1.4 血糖和血脂的測(cè)定

按試劑盒說明書要求分別測(cè)定大鼠血糖及血清血脂含量。

1.5 Akt活性檢測(cè)

取0.5g肝臟組織，加入5mL預(yù)冷的裂解緩沖液(20mmol/L Tris-HCl pH7.5，150mmol/L NaCl，1mmol/L EDTA，1mmol/L EGDA，1mmol/L 原礬酸鈉，1mmol/L PMSF，1% Triton X-100，2.5mmol/L 焦磷酸鈉，10μg/mL亮肽素、抑肽酶和大豆胰蛋白酶抑制劑，40mmol/L β-甘油磷酸)，于冰水上勻漿裂解，吸取裂解液，4℃，12000g離心20min。上清液以免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Akt活性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 總黃酮對(duì)STZ所致糖尿病大鼠血糖的影響

與正常組比較，STZ致糖尿病大鼠(模型組及灌胃前的陽性藥和給藥組)的血糖值顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，表1)，表明STZ誘導(dǎo)大鼠致糖尿病模型成功；糖尿病大鼠經(jīng)不同銀杏葉總黃酮及二甲雙胍治療后，各劑量組及陽性藥組大鼠的的血糖水平較模型組明顯降低(p<0.01)，提示銀杏葉總黃酮對(duì)STZ致糖尿病大鼠有明顯的降血糖作用(表1所示)。

2.2 總黃酮對(duì)STZ所致糖尿病大鼠血脂的影響

與正常組比較，STZ致糖尿病大鼠血清甘油三酯(TG)、膽固醇(CHO)、LDL顯著提高，而HDL顯著降低(p<0.01)，表明銀杏葉總黃酮對(duì)STZ糖尿病大鼠血脂代謝有較好的改善作用(表2所示)。

2.3 總黃酮對(duì)Akt酶活性的影響

絲氨酸/蘇氨酸激酶Akt是糖轉(zhuǎn)運(yùn)過程中重要的酶，被激活后，進(jìn)一步調(diào)節(jié)下游酶的活性，促進(jìn)葡萄糖吸收、GLUT4的移位及糖原的合成。因此蛇毒蛋白能否激活A(yù)kt的酶活性對(duì)糖吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)及糖原的合成都具有非常重要的作用。

Control MET TF

圖1 銀杏葉總黃酮對(duì)Akt活性的影響與對(duì)照組比較，黃酮組及二甲雙胍組磷酸化的Akt均明顯提高，即Akt的酶活性有顯著的提高(圖1所示)。

3 討論

黃酮類物質(zhì)作為銀杏葉活性成分中的重要組分，具有調(diào)節(jié)血脂、消除自由基、抗氧化、抗病毒等廣譜的生理活性。研究表明自由基代謝參與了糖尿病的發(fā)生和發(fā)展過程，自由基的代謝調(diào)節(jié)，有助于對(duì)糖尿病血糖的改善^[7，8]，因而推測(cè)銀杏葉總黃酮可能具有降血糖的功效，并對(duì)糖尿病血脂具有調(diào)節(jié)作用。本研究對(duì)銀杏葉總黃酮對(duì)STZ致糖尿病大鼠的血糖及血脂的作用進(jìn)行了初步的研究。

本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果表明，銀杏葉總黃酮可提高Akt的磷酸化程度，Akt是調(diào)節(jié)葡萄糖吸收過程中的重要的酶，Akt經(jīng)磷酸化而被激活，激活的Akt增加細(xì)胞內(nèi)GLUT1的表達(dá)水平，并可促進(jìn)GLUT4從細(xì)胞質(zhì)移位到細(xì)胞膜上，進(jìn)而促進(jìn)葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)和吸收，與本研究中銀杏葉總黃酮可降低STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠的血糖相一致，并對(duì)糖尿病大鼠的血脂具有一定的改善作用。

糖尿病是全世界發(fā)病率最高的疾病之一，嚴(yán)重危害著人類的健康，因此糖尿病治療藥物的研究與開發(fā)具有重要的意義。本研究表明，銀杏葉總黃酮對(duì)血糖和血脂具有較好的調(diào)節(jié)作用，其詳細(xì)的作用機(jī)制，尚待進(jìn)一步研究。

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(責(zé)任編輯：陳涌濤)