結核培養中有關污染的幾點看法

改良羅氏培養基制作過程中的幾個細節

培養基所用器皿都應清洗干凈，高壓消毒。盡量避免使用結構復雜的儀器進行操作，例如灌注培養液不適合用可調定量加液器，因其拐角處易滋生細菌。

雞蛋要一個一個清洗，特別是農家喂養的土雞蛋。洗凈雞蛋面上的污垢后用75%酒精浸泡20～30分鐘，取出，擦干，開口，收集雞卵液，攪勻。通過消毒的紗布過濾。

培養液中添加孔雀綠溶液要足量，1000ml培養液加2%孔雀綠溶液20ml，它能很好地抑制雜菌生長。另一方面，孔雀綠溶液不能長期保存，如出現沉淀或顏色變淺，應立即停止使用，重新配置新鮮溶液。

制作的培養基要有一個30°斜面，并且培養液不能離管口太近，要保持一定的距離。

房間內提前用紫外線照射數小時滅菌。操作者要著口罩、帽子、工作服、手套嚴格進行無菌操作。

倒好的培養基放入蒸汽凝固滅菌器內，經85℃凝固滅菌50分鐘。

從滅菌凝固器內取出制作好的培養基時，要在滅菌凝固器內再一次塞好每只培養管口(因為凝固過程中大部分培養管中橡皮塞因溫度高會脫出管口)。不要把沒有塞好的培養管取出待塞。

冷卻后的整批培養基或抽取其中一部分，至于37℃孵育24小時進行無菌試驗，對質量不合格地培養基，如氣泡、干涸、量不足及發生污染等，必須廢棄。

培養基放冰箱4℃保存，1次培養的培養基僅供1個月內使用。

培養操作過程中的幾個細節

吸取2ml痰標本至無菌試管中，視樣本性狀，加入1～3倍體積2%H₂SO4前處理液，膿性標本處理液一定不能少于3倍。膿性標本前處理不當很容易在今后培養過程中發生污染，造成培養失敗。

處理過的標本置渦旋振蕩器上振蕩1分鐘，標本充分混勻，室溫放置。整個標本處理時間不得超過20分鐘。

之后，取混勻的上液接種(不取管底粘稠大雜菌未完全清除掉的部分)。每只培養管接種量在0.1ml左右，大約1.5滴，不能太多，過多也會造成培養失敗。

每周看1次結果都要重復檢查培養管口塞是否塞緊，一旦發現管口松動，要立即塞好，以免在培養箱中發生污染。

小 結

早期發現和及時治療結核病感染患者以及切斷傳染源是結核病防治工作中的重要環節，結核分枝桿菌培養是結核實驗室診斷中最具決定作用的手段。日常工作當中，經常有些污染菌生長會影響其結果的分析，進一步的鑒定及藥敏試驗，這對于培養時間長的分枝桿菌培養來說會嚴重影響了患者的及時診斷及治療。因此，對其導致污染的諸多相關因素必須要有十分清楚的認識，確立有效防范對策確保獲得最高的陽性率，以防漏診。

結核菌的繁殖期比其他細菌長，生長緩慢(一般需2～4周長出肉眼可見的菌落，8周無細菌生長才可以發出無分枝桿菌生長的報告)，在其過程里如果培養中途出現污染，勢必造成整個過程失敗。

檢驗工作在方法正確的前提下，更要認真仔細。培養物染率應在2%～5%范圍內，污染率過高，提示培養基滅菌不佳，標本前處理、接種等環節有誤，應當分析原因，采取相應措施。盡可能的減少污染，及時發出培養報告。