大鼠骨骼肌挫傷后骨骼肌肌鈣蛋白Ｉ ｍＲＮＡ的表達變化

[摘要] 目的 應用實時熒光定量PCR技術檢測大鼠骨骼肌挫傷后肌鈣蛋白I mRNA（sTnI mRNA）表達情況，分析其與挫傷的關系。方法 建立大鼠骨骼肌挫傷模型，分別在挫傷后0.5h，1h，6h，12h，18h取材。提取挫傷肌肉中的總RNA，逆轉錄合成cDNA第一條鏈，以cDNA作為模板，通過特異性上下游引物熒光定量PCR檢測cDNA的拷貝數，選取管家基因核糖體蛋白L32為參比基因，對擴增結果進行相對定量分析。結果 大鼠骨骼肌挫傷后0.5h、1h、6h、12h、18h 的sTnI mRNA表達量分別為正常組的66.7%、46.6%、31.9%、18.5%和15.3%，呈時序性表達下調趨勢。結論 大鼠骨骼肌挫傷后0.5h內sTnI mRNA的表達即開始下調，18h內sTnI mRNA的表達有一定的時間規律性，可望作為臨床診斷骨骼肌損傷的指標之一。

[關鍵詞] 骨骼肌損傷； 骨骼肌肌鈣蛋白I； 實時熒光定量PCR

[中圖分類號] R642 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2009）13-40-03

Expression of sTnI mRNA in Rat Skeletal Muscle after Contusion

ZHANG Lei SUN Junhong LU Jian WANG Yafang WANG Yingyuan

Department of Forensic Pathology，Shanxi Medical University School of Forensic Medicine，Taiyuan 030001

[Abstract] ObjectiveTo investigate the expression of skeletal troponin I mRNA（sTnI mRNA）changes induced by contusion in rat skeletal muscle using Real Time PCR，aimed to provide some help for forensic estimation of wound age. MethodsThe 36 rats were divided into two groups randomly：contusion group（5 subgroups） and control group，the contusion was performed on the right posterior limb of rat. The samples were extractd respectively at 0.5h，1h，6h，12h，18h after contusion. Total RNA were isolated from skeletal muscle of two groups，and reverse transcription polymerase chain reaction was conducted to synthesize the 1-st strand cDNA. With the use of sequence-specific primers，the expression level of sTnI mRNA was studied by Real Time PCR. ResultsOur results normalized by Ribosomal Protein L32（rpL32） showed that mRNA levels of sTnI were 66.7%，46.6%，31.9%，18.5% and 15.3% in contusion groups compared to control group respectively at 0.5h，1h， 6h，12h，18h，which present down-regulated after contusion within 18hs time-orderly. ConclusionThe time-order expression of sTnI mRNA after contusion was potentially indicative for diagnosis of early muscle injury.

[Key Words]Muscle injury； sTnI mRNA； Real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction

骨骼肌損傷以及骨骼肌疾病在臨床上頗為常見，進行快速準確的診斷十分重要。傳統酶學指標如CK、CK-MB等并非骨骼肌所特有，且缺乏敏感性和特異性，加之劇烈運動后也可導致血中CK、CK-MB的輕微升高，給骨骼肌損傷，特別是輕微損傷、多發性損傷的早期診斷帶來了不小的困難。sTnI與cTnI相似的特性，給骨骼肌損傷以及疾病的診斷提供了新的思路。

本實驗擬通過建立大鼠骨骼肌挫傷模型，采用實時熒光定量PCR（Real Time PCR）檢測大鼠骨骼肌挫傷后不同時間點骨骼肌肌鈣蛋白I mRNA（Skeletal troponin-I mRNA，sTnI mRNA）的表達量，探尋其時序性變化規律，旨在為骨骼肌損傷以及疾病的診斷提供客觀依據。

1 材料與方法

1.1 試劑與主要儀器

總RNA提取試劑盒（SV Total RNA Isolation System）購自美國Promega公司；反轉錄試劑盒（PrimeScript RT-PCR Kit）及實時熒光定量試劑盒（SYBR Premix Ex Taq）購自大連寶生物工程有限公司；……