乳腺癌組織中Ｋｉ－６７與ＥＲ、ＰＲ、Ｃ－ｅｒｂＢ－２相關關系研究

[摘要] 目的 檢測Ki-67、ER、PR和C-erbB-2在乳腺癌組織中的表達并探討其相關關系。方法 應用免疫組化法，檢測乳腺癌組織中ER、PR和C-erbB-2的表達，分析前者與后三者間的相關關系。結果 Ki-67、ER、PR和C-erbB-2陽性表達率分別為79.52%、63.25%、60.24%、66.26%，Ki-67表達強度與C-erbB-2 呈正相關性，與ER、PR 呈負相關性。結論 乳腺癌組織中Ki-67與ER、PR和C-erbB-2有明確的相關關系，聯合檢測具有實際的臨床意義，可作為臨床病理因素之外早期識別具有高浸潤和轉移潛能的乳腺癌及判斷其預后的有用指標。

[關鍵詞] 乳腺癌； 免疫組化； Ki-67； ER； PR； C-erbB-2

[中圖分類號] R737.9 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2009）13-03-03

Study of the Relationship between Ki-67，ER，PR and C-erbB-2 in Breast Cancer Tissues

GUO Yanwei

Department of Oncology，The First Affiliated Hospital of Nanyang Medical College，Henan 473058

[Abstract] ObjectiveTo detect the expression ofKi-67，ER，PR and C-erbB-2 in breast cancer tissues and discuss the relationship between Ki-67，ER，PR，C-erbB-2 and clinical pathological factors. MethodsImmunohistochemical method was used to detect the expression ofKi-67，ER，PR and C-erbB-2 in breast cancer tissue. ResultsThe positivity rate of the expression ofKi-67，ER，PR and C-erbB-2 were 79.52%，63.25%，60.24%，66.26% respectively. The expression of Ki-67 had positive correlation with C-erbB-2（x²＝109.79，P＜0.01），but had negative correlation with ER and PR（x²＝30.14，P＜0.01；x²＝36.71，P＜0.01）. ConclusionThe expression of Ki-67，ER，PR and C-erbB-2 are all higher in breast tumor tissues，which indicates to be useful for the prognosis judgement. Co-detection ofKi-67，ER，PR and C-erbB-2 can elevate the sensitivity of prognosis evaluation. So，they can be used to detect high infiltrating and high metastasizing tumor，and evaluate their prognosis.

[Key Words]Breast cancer； Immunohistochemistry； Ki-67； ER； PR； C-erbB-2

目前國內外對Ki-67與ER、PR和C-erbB-2相關關系方面的研究還存在較多的不同觀點。我們應用免疫組化實驗方法聯合檢測166例乳腺癌組織中Ki-67、ER、PR和C-erbB-2的表達，并探討其相關關系，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源

乳腺癌腫瘤組織均來自2004年12月～2007年2月南陽醫學高等專科學校附屬醫院，有完整原癌病灶、淋巴結和癌旁組織的乳腺癌標本。均為女性，年齡27~79歲，平均（53.2±11.2）歲。組織學類型：浸潤性導管癌150例，浸潤性小葉癌8例，髓樣癌6例，小管癌2例。有區域淋巴結轉移者68例。

1.2 方法

免疫組化S-P染色，步驟如下：（1）烤片，68℃，20min；（2）常規二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水；（3）阻斷：滅活內源性過氧化物酶：3%H₂o₂ 37℃孵育10min，PBS沖洗3×5min；（4）抗原修復：置0.01M枸櫞酸緩沖液（pH 6.0）中用煮沸（95℃，15~20min），自然冷卻20min 以上，再用冷水沖洗缸子，加快冷卻至室溫，PBS沖洗3×5min。（5）正常羊血清工作液封閉，37℃10 min，傾去勿洗；（6）滴加一抗4℃ 冰箱孵育過夜，PBS沖洗3×5min（用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照）；滴加生物素標記二抗，37℃孵育30min，PBS沖洗3×5min；（7）滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素工作液，37℃孵育30min，PBS沖洗3×5min；（8）DAB/ H₂o₂反應染色，自來水充分沖洗后，蘇木素復染，常規脫水，透明，干燥，封片。

1.3 Ki-67、ER、PR和C-erbB-2在乳腺癌組織中的表達及判斷標準

1.3.1 ER（PR）陽性判斷標準 腫瘤細胞細胞核呈棕黃色為陽性結果。0級：無細胞核棕黃染色或少于5%的腫瘤細胞細胞核較弱棕黃染色；1級：5%～30%的腫瘤細胞細胞核弱棕黃染色，個別可中到強著色；2級：30%～60%的腫瘤細胞細胞核弱到中度棕黃著色，個別可強著色；3級：多于60%的腫瘤細胞細胞核中到強棕黃著色，個別可弱著色。見封三圖1，2。

1.3.2 Ki-67陽性判斷標準 腫瘤細胞核棕黃染色為陽性結果。陽性率判斷標準：以任意5個高倍鏡視野中陽性細胞所占的細胞比例的平均值定義為陽性細胞百分比并作為評定依據。①陽性細胞數＜5%，不著色者為陰性（-）；②陽性細胞數在5%～25%為（+），-顯色：淺棕色為弱陽性（+）；③陽性細胞數在26%～50%為（++），-顯色：棕黃色為陽性（++）；④陽性細胞數大于50%為（+++）。-顯色：深棕色為強陽性（+++）。以（-）和（+）為低表達組，（++）和（+++）為過表達組進行分析。見封三圖3。

1.3.3 C-erbB-2陽性標準 腫瘤細胞細胞膜棕黃染色為陽性結果。0級：無細胞染色或少于10%的腫瘤細胞細胞膜較弱染色；1級：大于10%的腫瘤細胞細胞膜部分較弱染色；2級：大于10%的腫瘤細胞細胞膜完全較弱到中等染色；3級：大于10%的腫瘤細胞細胞膜完全強染色。見封三圖4。

1.4 統計學處理

應用SPSS10.0統計學軟件，采用x²檢驗。

2 結果

2.1 各項指標陽性表達率

Ki-67為79.52%（132/166），ER為63.25%（105/166），PR為60.24%（100/166），C-erbB-2為66.26%（110/166）。各項指標過表達率（表達呈++和+++的和占總例數的比例，+++為過表達）：Ki-67為47.59%（79/166），ER為44.58%（74/166），PR為45.18%（75/166），C-erbB-2為24.10%（40/166）。

2.2 Ki-67與ER，PR，C-erbB-2的關系

乳腺癌組織的Ki-67表達強度與C-erbB-2強度的表達呈正相關性（x²＝109.79，P＜0.01）；與ER的表達強度呈負相關性（x²＝30.14，P＜0.01）；與PR的表達強度呈負相關性（x²＝36.71，P＜0.01）。見表1，圖1 ~ 3。

3 討論

目前，ER、PR和C-erbB-2的檢測之所以被廣為接受的主要原因是它們與乳腺癌對內分泌治療的反應有關，可以作為臨床選擇內分泌治療的依據。ER和PR均陰性的腫瘤對內分泌治療有反應的可能性小，而ER和PR均陽性的腫瘤大多數對內分泌治療有效。C-erbB-2過表達的患者對CMF方案和三苯氧胺治療不敏感，而對蒽環類藥物和紫杉醇治療敏感，對單克隆抗體Herceptin的治療反應良好[1]。據文獻報道，免疫組化方法測定過度表達的C-erbB-2的陽性率在20%～30%[2]，ER陽性表達占原發性乳腺癌的77%，PR表達為65%[3]。本研究結果顯示，以上這些指標過度表達的標本占總數的比例分別為ER為63.25%（105/166）、PR為60.24%（100/166）、C-erbB-2為24.10%

（40/166），與國外文獻統計相同[4，5]。Schippinger等[6]研究表明，C-erbB-2過表達的乳腺癌患者轉移率高，5年與10年生存率較低，同時還發現，C-erbB-2的表達與雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）的表達呈負相關。本研究利用免疫組化法對166例乳腺癌組織進行檢測并進行相關分析發現，C-erbB-2表達越強，Ki-67表達也越強；ER、PR表達越強，則Ki-67表達越弱，這提示在乳腺癌的發生、發展中Ki-67與C-erbB-2、ER、PR之間可能存在著特殊關系，即Ki-67的表達強度與C-erbB-2的表達強度呈正相關性，與ER、PR的表達強度呈負相關，同時也意味著Ki-67過表達可能是一個不良預后因素，其與乳腺癌發生、發展具有內在聯系。本研究因隨訪時間有限，關于乳腺癌組織中Ki-67表達對于乳腺癌預后的判斷以及指導治療的價值有待進一步研究，但近年來有文獻報道Ki-67可作為乳腺癌化療的敏感性指標，腫瘤細胞增殖率降低，比腫瘤的腫塊縮小更能反映腫瘤對化療敏感的程度。本研究發現Ki-67在乳腺癌組織過表達，提示癌細胞增殖活性的改變在癌前病變階段開始，并且與癌變的過程是相關的。

總之，Ki-67表達與乳腺癌發生、發展有關，與ER、PR和C-erbB-2有明確的相關關系，能促進乳腺癌細胞的增殖、浸潤和轉移，是一不良預后因子，可作為早期識別具有高浸潤和轉移潛能的乳腺癌及判斷其預后的有用指標。

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（收稿日期：2008-12-10）