ＨＰＬＣ法測定口炎清片中綠原酸的含量

宋海浪

【摘要】 目的 建立口炎清片綠原酸含量測定的方法。方法 用C18柱，乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）為流動相，檢測波長327 nm。結果 在0.018~0.090 mg/ml范圍內呈良好的線性關系（r=0.998 6）。平均回收率為99.61%，RSD為1.16%（n=6）。結論 方法重復性好，測定結果準確可靠。

【關鍵詞】 口炎清片；綠原酸；高效液相色譜法

Assay of chlorogenic acid in kouyanqing tablets by HPLC

SONG Hai-lang.Guangzhou Yongfutan pharmaceutical Co.Ltd.，Guangzhou 510978，China

【Abstract】 Objective A method was established for the assay of Chlorogenic acid in Kouyanqing tablets.Methods The C18 column was used and acetonitrile-0.4%phosphoric acid solution (13:87) as mobile phase，detected at 327 nm.Results The linear range was 0.018~0.090 mg/ml (r=0.9986).The average recovery rate was 99.61%,RSD1.16%(n=6).Conclusion The method is accurate,reliable and with good repeatability.

【Key words】 Kouyanqing tablets；Chlorogenic acid；HPLC

1 儀器與試藥

1.1 儀器 ESJ182-4電子天平（沈陽龍騰電子有限公司），LC-10AT液相色譜儀（島津儀器有限公司），超聲波發生器（天津奧特賽斯儀器有限公司），DimensionsC18色譜柱 。

1.2 試劑與試藥 綠原酸對照品（批號為：110753-200212由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用，乙腈為色譜純，水為重蒸水（自制），其他試劑為分析純。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱 C₁₈硅烷鍵合硅膠（5 μm，4.6×250 mm）；流動相：乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）；流速1.0 ml/min；進樣量10 μl；檢測波長327 nm。

在此條件下，出峰時間適當，色譜峰峰形理想，分離度好，既可以保證樣品的測定，也可以排除其他組分的干擾。理論

板數按綠原酸峰計算應不低于1000。

2.2 對照品溶液的制備 取綠原酸對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1 ml含綠原酸43.2 mg 的溶液（10℃以下保存），即得。色譜圖如圖1。

2.3 供試品溶液的制備 取本品裝量差異項下樣品10片，研細，取0.5 g，精密稱定，精密加入50%甲醇40 ml，放置15 min后，振搖，超聲處理5 min，使完全溶解，用50%甲醇定容至50 ml量瓶中，作為供試品溶液。色譜圖如圖2。

2.4 陰性對照溶液的制備 取按處方比例及制備工藝制備的不含金銀花（綠原酸）的陰性對照樣品，照2.3項下操作，同法制成陰性對照溶液。

2.5 空白干擾試驗 吸取陰性樣品10 μl進樣，觀察在樣品峰的保留時間處是否有雜質峰。測得結果表明：在樣品保留時間處無明顯雜質峰干擾。色譜圖見圖3。

2.6 線性關系考察 分別配制對照品溶液 0.018、0.036、0.054、0.072、0.090 mg/ml進樣10 μl，測定，以峰面積積分值為縱坐標，標準品濃度為橫坐標繪制標準曲線，計算得到回歸方程。見表1。

結果表明綠原酸在0.018~0.090 mg/ml之間有良好的線性關系。

2.7 穩定性試驗 分別取同一份供試品溶液10 μl，按上述色譜條件每隔一定時間測定其含量，考察樣品溶液的穩定性，計算相對標準偏差，見表2。

2.8 精密度試驗 取同一供試品溶液，進樣10 μl,重復進樣6次測定峰面積計算相對標準偏差。見表3。

2.9 重復性試驗 精密稱取樣品6份，制成供試品溶液，按已擬定的色譜條件測定峰面積，計算相對標準偏差。見表4。

1.10 回收率試驗 采用加樣回收法，取已知含量的口炎清片(050301) 10片，研細，取六份該粉末，每份0.26 g，精密稱定，分別加入綠原酸對照品（0.36 mg/ml）4 ml。加入50%甲醇40 ml，放置15 min后，振搖，超聲處理5 min，使完全溶解，用50%甲醇定容至50 ml量瓶中，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，濾液作為供試品溶液。按上述色譜條件測定，以下式計算回收率，結果列于表5。

回收率%=（實測綠原酸量-樣品中含量）/加入量×100%

2.11 樣品中含量測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μl依上述色譜條件測定,計算含量。樣品測定結果見表6。

經對5批同一生產工藝生產的樣品進行含量測定，結果表明，不同批次樣品中綠原酸含量為2.41~2.55 mg/片，平均含量為2.48 mg/片，含量波動不大。

3 討論

具文獻資料報道，口炎清片中綠原酸的含量測定方法較為成熟，大都采用HPLC法。流動相多為乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87），檢測波長327 nm。根據口炎清片處方組成的特點，有目的篩選了乙腈-0.4%磷酸溶液（15∶85）和乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87），經實驗確證采用乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）為流動相，綠原酸的分離效果好，且出峰時間較適當。選擇綠原酸的最大吸收波長317 nm為檢測波長，檢測靈敏度高。

本論文的研究結果證明，綠原酸的含量測定方法操作簡便，測定結果準確，重復性好，回收率高，是檢測含金銀花或山銀花的制劑中綠原酸含量較為理想的方法。

參 考 文 獻

［1］ 國家藥典委員會.中國藥典一部.化學工業出版社，2005：152.

［2］ 王寶琴.中成藥質量標準與標準物質研究.中國醫藥科技出版社，1994：69.