乙醇浸提法提取黑穗醋栗果實中黃酮類物質的研究

邊嘯林 李 政 王廣正 徐雅琴

摘要以黑穗醋栗果實為試材,以蘆丁為標準品,利用分光光度法研究乙醇提取法提取黃酮類物質的最佳工藝條件。在單因素試驗結果的基礎上設計了L9(34)(4因素3水平)正交試驗。結果表明,乙醇提取法提取黃酮的最佳工藝條件為:以95%乙醇為提取劑,提取溫度90℃,提取料液比1∶12,提取時間180min。黃酮的最大提取量可達0.723mg/g。

關鍵詞黑穗醋栗;黃酮;乙醇浸提;提取

中圖分類號S664.2;TS255.36文獻標識碼A文章編號 1007-5739(2009)11-0024-02

黑穗醋栗俗稱黑加侖、黑豆果,屬虎耳草科茶藨子屬多年生小灌木。在我國主要分布在北方,黑龍江省資源尤其豐富。果實為紫黑色,圓形,多汁,味酸甜。其果實富含糖、有機酸、維生素、黃酮、礦物質等多種營養成分[1]。

黃酮類化合物在植物中分布范圍廣、種類多,多數具有顯著生理藥理活性[2]。近年來,其在抗腫瘤、抗過敏、降血糖等方面的顯著作用受到廣泛關注。本試驗以黑穗醋栗果實為試材,研究了乙醇提取法提取的最佳工藝條件,為黑穗醋栗果實的開發利用提供理論依據。

1材料與方法

1.1材料與儀器

黑穗醋栗采于東北農業大學園藝站,采樣后快速冷凍,裝保鮮盒中備用;蘆丁,中國藥品生物制品檢定所;其他試劑均為分析純。

T6新悅-可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);R-205旋轉蒸發器(上海申勝生物技術有限公司);電子天平(賽多利斯科學儀器(北京)有限公司)。

1.2提取工藝流程

試材→打碎→乙醇提取→減壓過濾→旋轉蒸發→乙酸乙酯萃取→旋轉蒸發萃取液→黃酮粗提物→95%乙醇溶解定容→測定含量。

1.3最佳提取條件的確定

1.3.1單因素試驗。將黑穗醋栗果實打碎為勻漿,用電子天平精確秤取5g左右,以95%乙醇為提取溶劑,分別考察不同乙醇濃度(35%、50%、65%、80%、95%)、不同提取溫度(50℃、60℃、70℃、80℃、90℃)、不同料液比(1∶4、1∶6、1∶8、1∶10、1∶12)、不同提取時間(60min、100min、140min、180min、220min)對黃酮類物質含量的影響。每項試驗重復3次。

1.3.2正交試驗。在單因素試驗基礎上,以總黃酮含量為考察指標,采用4因素(乙醇濃度、提取溫度、料液比、提取時間)3個水平的正交試驗表L9(34)安排試驗,并對結果進行極差分析,確定黑穗醋栗果實中黃酮類物質的最佳提取條件。

1.4黃酮含量的測定

采用NaNO2-Al(NO3)3比色法[3]測定黃酮含量。

蘆丁柱準曲的線形回歸方程為:C=75.944 A-0.349 4,相關系數R2=0.999 7。

黃酮提取量(mg/g)=5CV/W

其中,W-精確稱取黑穗醋栗的質量(g);V-提取出黃酮定容的體積(V)。

2結果與分析

2.1乙醇濃度對黃酮提取效果的影響

在提取料液比1∶10、提取溫度80℃、提取時間180min條件下,以不同乙醇濃度進行提取,結果如圖1。

由圖1可知,黃酮提取量隨乙醇濃度的增加而增加,增至95%時達到最高,所以選用65%、80%、95%等3個濃度進行正交試驗。

2.2提取溫度對黃酮提取效果的影響

在提取料液比1∶10、提取時間180min、乙醇濃度95%條件下,以不同提取溫度進行提取,結果如圖2。由圖2可知,黃酮提取量隨溫度升高而增大,增至80℃時趨于平緩,所以選用70℃、80℃、90℃等3個溫度進行正交試驗。

2.3提取時間對黃酮提取效果的影響

在提取料液比1∶10、提取溫度80℃、乙醇濃度95%條件下,以不同提取時間進行提取,結果如圖3。

由圖3可知,黃酮提取量隨時間延長而增大,增至180min時趨于平緩,所以選用140min、180min、220min等3個時間進行正交試驗。

2.4提取料液比對黃酮提取效果的影響

在提取溫度80℃、提取時間180min、乙醇濃度95%條件下,以不同提取料液比進行提取,結果如圖4。

由圖4可知,黃酮提取量隨料液比的增大而增大,增至1∶10時達到最大,然后略有下降,所以選用1∶8、1∶10、1∶12等3個條件進行正交試驗。

2.5正交試驗結果

由表1極差分析可知,本試驗討論的4個因素對提取量影響的顯著順序為:A>C>B>D,即提取液料比>提取溫度>乙醇濃度>提取時間。最佳條件組合為:A3B2C3D2,即提取料液比1∶12、乙醇濃度95%、提取溫度90℃、提取時間180min,提取量為0.723mg/g。

3結論

試驗結果表明,采用乙醇提取法提取黑穗醋栗黃酮的最佳條件為:以95%乙醇為提取溶劑,提取溫度90℃,提取時間180min,提取料液比1∶12,此時的提取量可達到0.723mg/g。

4參考文獻

[1] 賈妉萍.黑龍江省特色小漿果開發及利用[J].中國林副特產,2008,31(4):600-602.

[2] 徐雅琴,付紅,于澤源.黑穗醋栗(亮葉)葉片黃酮提取物抗氧化性研究[J].食品科技,2002(7):38-39.

[3] 徐雅琴,孫艷梅,付紅,等.穗醋栗葉片中黃酮類物質的研究[J].天然產物的研究與開發,2001(2):221-231.