冬蟲夏草二級接種步驟的初步研究

唐彥彥

摘 要：冬蟲夏草（Cordyceps sinensis sacc）具有很大的經濟價值，但目前天然冬蟲夏草逐漸減少?，F在人們開始了人工培養冬蟲夏草。在實驗中冬蟲夏草二級接種是人工培養冬蟲夏草的關鍵。冬蟲夏草二級接種是指由一級種接到接種瓶內。二級種更有利于冬蟲夏草子實體的長出。接種前需要配制培養基和滅菌。接種時動作要快且準降低污染率。接種后，放在黑暗室溫下培養，觀察結果，分析原因，探索更好的方法，從而更利于冬蟲夏草子實體的長出。

關鍵詞：冬蟲夏草；二級接種；人工培養；接種瓶

冬蟲夏草，冬天是蟲，夏天是草，冬蟲夏草簡稱蟲草，是冬季真菌寄生于蟲草蛾幼蟲體內，到了夏季發育而成。冬蟲夏草主要分布在青海，西藏，四川，云南，貴州，甘肅海拔4000米左右的高海拔地區，而且含量非常少。冬蟲夏草蟲體呈金黃色，淡黃色或黃棕色，藥用價值高功效好。在國內外被視為珍品，市場需求量大，但因其天然資源量稀少，故價格十分貴。

冬蟲夏草可以降低血液中的膽固醇和甘油三酯，提高對人體有利的高密度脂蛋白，減輕動脈粥樣硬化。

除次之外，冬蟲夏草還具有直接抗病毒、調節中樞神經系統功能、調節性功能等作用。冬蟲夏草能對人體起到如此全面的保健作用，可謂神奇之極，也無愧自古以來“仙草”的美稱。在現代社會，服用冬蟲夏草已不僅僅是本身身體健康的保證，更重要的是由此帶來的極致健康生活品質。

1 材料和方法

1.1 材料

在做二級接種實驗時所用的材料：冬蟲夏草(Cordyceps sinensis sacc)一級種是由2005年5月從西藏采來的冬蟲夏草子實體經無菌分離培養所得。根據多次試驗培養基成分結論如下：葡萄糖10g、磷酸氫二鉀1g、蛋白胨7g、維生素B2兩片、七水硫酸鎂0.3g、水1000ml、650ml大米。

1.2 方法

藥品的稱量：對于一克以下的用精確的天平稱量。在稱量過程中，先調節天平所在的平面平衡以及天平平衡，并在左盤中放張濾紙后也要平衡。然后，制定規格，用藥匙向左盤中放入所要稱取得藥品直到平衡。但要注意先把天平放下來，再取盤中的藥品。

大于等于一克的物品用托盤天平量取即可。首先調節托盤天平平衡，在這一過程中，要注意先把游碼調到零點，調平后按左物右碼的規則。移動游碼直到所需的規格，然后，用藥匙向左盤中放藥品直到平衡，則左盤中的藥品即為所稱量的。

用量筒量取1000ml的水和650ml的大米。

在進行二級種培養基制作過程中，我們運用了一個方案

將量好的葡萄糖、磷酸氫二鉀、蛋白胨，維生素B2、七水硫酸鎂，同時溶解在1000ml水中，用玻璃棒攪拌使溶質完全溶解。設總體積為v，稱取0.65v大米約650ml的大米，并用自來水沖洗一遍。把沖洗干凈的大米和所配制的溶液放入蒸壓鍋內，蒸成熟米飯，然后冷直室溫，再平均裝到十個接種瓶（本試驗用的是白色耐高溫高壓的罐頭瓶）內。在裝的過程中必須使米飯疏松平齊，然后用細繩和單層塑料袋扎上瓶口。完成后再滅菌。

滅菌過程如下：把接種瓶放到滅菌筐中，在滅菌筐放進高壓滅菌鍋前先檢查高壓滅菌鍋內是否有足夠的水，檢查標準是看鍋底部中央有一個圓孔，當水面高于或等于圓孔面時就可以。再打開電源，然后按設置按鈕，通過上下鍵來調節溫度、時間，即125攝氏度、30分鐘。最后按液相按鈕。此時也可以設定一個保溫溫度。滅菌后切斷電源，通過紅外感應打開蓋[開蓋時身體側向一旁，因為開蓋會有大量熱氣冒出以免燙傷]小心地把接種瓶擺放在桌面上冷直二十四小時。

二級接種是指將試管[一級]內的冬蟲夏草菌絲接到空間相對較大的接種瓶內，從而有利于冬蟲夏草子實體的長出。

接種步驟：

接種前，需將凈化工作臺提前打開二十分鐘，一便工作臺內的空氣是純凈的，同時也節省時間，提高工作效率。在凈化工作臺上做實驗時，需將凈化工作臺的每一個面都要有用酒精棉徹底擦干凈，臺上的任何物品也要徹底擦干凈。接種時，手也要用酒精棉擦干凈，還要帶口罩。接種所用的任何儀器如接種鏟也要擦干凈。接種時，把接種瓶打開試管口不能碰到接種瓶口，而且不能在接種瓶口的上方，用接種鏟把試管內的三分之一或四分之一的菌絲快速地放到接種瓶內，并且要使菌絲與大米接觸（生長菌絲的面與大米接觸]提高菌絲擴展速度。接種時要快速低污染地工作，接種過程中接種鏟不要碰到任何面。接種完畢后，在凈化工作臺上把接種瓶封閉好，然后關掉凈化工作臺，在寫標簽[內容：實驗名冬蟲夏草二級種、作者、日期）。整理凈化工作臺，打掃地面，刷洗試管，把洗凈的試管口向下放在斜面上涼干。把接種瓶放在黑暗室溫下培養。 培養兩個月時，把接種瓶平均分成三組，編號為a、b、c。在實驗臺上向a組加細沙子，向b組加大沙子，向c組不加任何東西。

a、b、c組的接種瓶放在黑暗室溫下培養。

2 實驗結果

這種方法取得實驗結果如下：

培養三天時，接種瓶內有少量的白色菌絲長出，但有些接種瓶內出現青色被青霉菌污染，還有的變黑、紅等，出現這種現象說明此接種瓶已經被污染，需要及時清洗干凈，一防止其他接種瓶的污染。（清洗污染接種瓶，帶上口罩用小鏟把里面的大米全部挖出來放到垃圾袋內，把接種瓶放到水盆里加些洗調劑，用刷子刷，然后再沖洗一遍，倒立在桌面涼干。）

幾天后有大量白色菌絲長出，同時也有的變紅色、黑色、青色等被青霉菌等所污染，同樣也要把污染的接種瓶清洗干凈，被污染的接種瓶清洗方法如上。

十五天，有大量白色菌絲往下延伸，逐漸長滿整個接種瓶。此時也有少量接種瓶被污染，也同樣的把污染的接種瓶清洗掉。

一個月，白色菌絲長滿接種瓶，有時也會發現接種瓶內有水珠，則為菌絲呼吸作用的結果。菌絲也延伸到接種瓶的底部。菌落成各種形態，高低不平，出現高峰和低谷。這時有污染的接種瓶則不用清洗掉，因為此時接種瓶內的冬蟲夏草菌絲占優勢對其他菌的抵抗力增強。

兩個月，白色菌絲長滿接種瓶，發現接種瓶內有水珠。

3 討論

由實驗結果可知，造成污染的主要原因是由主觀造成的。由于自身的操作能力不夠或者是在操作中忽視了會造成二級種污染的外來物質。因此在以后要多動手，提高操作能力。同時也要避免外來物質的侵入。通過查找文獻，我們了解到了溫度、濕度、光照、空氣對冬蟲夏草子實體長出的影響。過高或過低的溫度造成冬蟲夏草菌絲的死亡；培養基的營養物質不要太干燥否則不利于子實體的長出；培養冬蟲夏草時應避光置于黑暗下培養；在培養后期應該向接種瓶內充氧氣，這樣有利于冬蟲夏草子實體的長出。

人工培養冬蟲夏草成功后，要擴大培養，供給人們的需求。同時降低了冬蟲夏草的價格，使貧困的人也能買冬蟲夏草。人工培養出冬蟲夏草避免了冬蟲夏草的滅絕，有利于資源的多樣性。人工培養出冬蟲夏草會推動醫學的發展，會生產出各種各樣的藥品和保健品，給社會帶來了財富，給人們帶來了健康。

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