兩種大孔樹脂對舒胸片中6種有效成分動態吸附性能的研究

鐘露苗， 夏新華

(1.湖南省藥品審評認證與不良反應監測中心，湖南 長沙 410013;2.湖南中醫藥大學，湖南 長沙410013)

舒胸片為《中國藥典》2005版一部收載的品種［1］，由三七、紅花和川芎三味藥組成。具有活血化瘀，通絡止痛之功效。用于瘀血阻滯所致的胸痹，癥見胸悶、心前區刺痛及冠心病心絞痛見上述證候者。其制法為紅花、川芎水提干膏、三七粉碎細粉制成的糖衣片，日服劑量達15片。為探討該復方有效成分富集純化的方法，作者采用大孔樹脂吸附技術，選擇LSA-30、HPD-100二種樹脂，在靜態吸附-脫吸附實驗研究的基礎上，對方中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、羥基紅花黃色素A、阿魏酸和川芎嗪六種有效成分進行了動態吸附性能的系統研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 shimadzu LC-10Atvp型高效液相色譜儀;shimadzu SPD-10Avp型紫外檢測器;N3000色譜工作站;AY120 SHIMADZU分析天平。玻璃層析柱(內徑1.5 cm)。

1.2 試藥與材料 人參皂苷Rg1(批號:110703-200322，供含測用)、人參皂苷Rb1(批號:110704-200318，供含測用)、三七皂苷R1(批號:110745-200312)、川芎嗪(批號:110817-200305，供含量測定用)、阿魏酸(批號:07733-9910，供含量測定用)、羥基紅花黃色素A對照品(批號:111637-200502，供含量測定用)，均由中國藥品生物制品檢定所提供。

乙腈為色譜純(Caledon Laboratories LTD.)，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

三七經鑒定為五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根及根莖;川芎經鑒定為為傘形科植物川芎Ligugsticum chuanxiong Hort.的干燥根莖;紅花經鑒定為菊科植物紅花Carthamus tinctorius L.的干燥花。均由湖南三湘中藥飲片有限公司提供。

LSA-30型大孔吸附樹脂，由西安藍深交換吸附材料有限責任公司提供;HPD-100型大孔吸附樹脂由滄州寶恩化工有限公司提供。

2 實驗方法與結果

2.1 舒胸片提取液的制備 按2005版《中國藥典》舒胸片處方各藥味比例，取三七細粉，加50%乙醇浸泡2.5 h，回流提取2次，加醇量分別為藥材的8倍、6倍量，提取時間分別為2.5 h、2.0 h，收集醇提液，回收乙醇，備用;取川芎，加10倍量水煎煮2 h，濾過，濾液另存，藥渣與紅花加8倍量水煎煮二次，每次1 h，合并三次煎液，60℃減壓濃縮至每1 mL含1 g生藥，在攪拌下緩緩加入乙醇使含醇量達70%，靜置24 h，濾過，濾液回收乙醇，與上述醇提濃縮液合并，視實驗需要于60℃減壓濃縮至適當濃度，濾過，即得。

2.2 上柱藥液濃度對動態吸附的影響

2.2.1 不同濃度藥液動態吸附實驗 分別精密量取生藥濃度為0.3 g/mL的藥液200mL、0.4 g/mL的藥液150 mL、0.5 g/mL的藥液120 mL、0.6 g/mL的藥液100 mL，調 pH為5.0，以2 BV/h的流速分別通過裝有4 g LSA-30、HPD-100濕樹脂的玻璃柱，并用水洗去附著的藥液，收集各濃度下的全部流出液，分別用HPLC法測定三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、川芎嗪、阿魏酸及羥基紅花黃色素A的含量［2-4］，同時測定原液(未經吸附的舒胸片提取液)中上述各有效成分的含量，按下式計算各成分在LSA-30、HPD-100兩種樹上的比吸附量(A)。

式中:A為樹脂比吸附量(mg/g)，M1為起始濃度(mg/mL)，M2為流出液與水洗液混合后的剩余濃度(mg/mL)，V1為上柱藥液總體積(mL)，V2為流出液與水洗液的體積之和(mL)，W為干樹脂重量(g)。

2.2.2 實驗結果與分析

2.2.2.1 濃度對三七皂苷R1的動態吸附的影響 結果見表1。

表1 不同濃度藥液中三七皂苷R1在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表1可見，在生藥濃度為0.3～0.6 g/mL范圍內，LSA-30樹脂對三七皂苷R1的比吸附量隨濃度增加總體呈增加趨勢，其中濃度為0.4 g/mL時有最大比吸附量;HPD-100樹脂對三七皂苷R1的比吸附量隨濃度增加未見明顯的變化。另外，LSA-30樹脂對三七皂苷R1的動態比吸附量明顯大于HPD-100樹脂，配對t-檢驗表明二者的比吸附量存在顯著性差異(t=5.770 3，P＜0.05)。

2.2.2.2 濃度對人參皂苷Rg1的動態吸附的影響 結果見表2。

表2 不同濃度藥液中人參皂苷Rg1在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表2可見，在生藥濃度為0.3～0.6 g/mL范圍內，LSA-30樹脂對人參皂苷Rg1的比吸附量隨濃度的變化情況與上述三七皂苷R1相似;HPD-100樹脂對三七皂苷R1的比吸附量隨濃度增加呈增加的趨勢，濃度為0.4 g/mL時，吸附已接近飽和。另外，LSA-30樹脂對人參皂苷Rg1的動態比吸附量也明顯大于HPD-100樹脂，配對t-檢驗表明二者的比吸附量存在顯著性差異(t=13.831 8，P＜0.01)。

2.2.2.3 濃度對人參皂苷Rb1的動態吸附的影響 結果見表3。

由表3可見，在生藥濃度為0.3～0.6 g/mL范圍內，LSA-30樹脂對人參皂苷Rb1的比吸附量隨濃度的增加呈先增加后下降的趨勢，與上述二種皂苷一樣，濃度為0.4 g/mL時有最大比吸附量;HPD-100樹脂對人參皂苷Rb1的比吸附量隨濃度增加未見明顯變化。另外，與上述二種皂苷不同，除濃度為0.4 g/mL外，LSA-30樹脂在其它濃度下對人參皂苷Rb1的動態比吸附量低于HPD-100樹脂，配對t-檢驗表明二者的比吸附量存在顯著性差異(t=-5.117 0，P＜0.05)。

表3 不同濃度藥液中人參皂苷Rb1在樹脂上的吸附情況(n=2)

2.2.2.4 濃度對羥基紅花黃色素A動態吸附的影響 結果見表4。

表4 不同濃度藥液中羥基紅花黃色素A在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表4可見，在生藥濃度為0.3～0.6 g/mL范圍內，LSA-30與HPD-100二種樹脂對羥基紅花黃色素A的比吸附量隨濃度的變化趨勢相似，均呈波浪形變化，濃度為0.4 g/mL時有最大比吸附量，濃度為0.5 g/mL時有最小比吸附量。另外，LSA-30樹脂對羥基紅花黃色素A的動態比吸附量高于HPD-100樹脂，配對t-檢驗表明二者的比吸附量存在顯著性差異(t=4.310 1，P ＜0.05)。

2.2.2.5 濃度對阿魏酸動態吸附的影響 結果見表5。

表5 不同濃度藥液中阿魏酸在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表5可見，在生藥濃度為0.3～0.6 g/mL范圍內，LSA-30、HPD-100樹脂對阿魏酸的比吸附量隨濃度的變化情況與上述人參皂苷Rg1相似。LSA-30樹脂對阿魏酸的動態比吸附量也明顯大于HPD-100樹脂，配對t-檢驗表明二者的比吸附量存在顯著性差異(t=4.244 4，P＜0.05)。

2.2.2.6 濃度對川芎嗪動態吸附的影響 結果見表6。

由表6可見，在生藥濃度為0.3～0.6 g/mL范圍內，LSA-30、HPD-100樹脂對川芎嗪的比吸附量隨濃度的變化情況亦與上述人參皂苷Rg1相似。LSA-30樹脂對阿魏酸的動態比吸附量也明顯大于HPD-100樹脂，配對t-檢驗表明二者的比吸附量存在顯著性差異(t=11.918 6，P＜0.01)。

表6 不同濃度藥液中川芎嗪在樹脂上的吸附情況(n=2)

2.3 上柱藥液pH值對動態吸附的影響

2.3.1 不同pH藥液動態吸附實驗 量取生藥濃度為0.4 g/mL的藥液150 mL和生藥濃度為0.6 g/mL的藥液100 mL，各4 份，分別調 pH 為4.0，5.0，6.0，7.0，以2 BV/h 的流速分別通過裝有4 g LSA-30和4 g HPD-100濕樹脂的玻璃柱，以下操作同2.1項下方法。

2.3.2 實驗結果與分析

2.3.2.1 pH對三七皂苷R1在樹脂上吸附的影響 結果見表7。

表7 不同pH藥液中三七皂苷R1在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表7可見，藥液pH5時，三七皂苷R1在LSA-30、HPD-100兩種樹脂上均具有最大的比吸附量，但LSA-30明顯高于HPD-100;而在pH7時，均具有最小的比吸附量。另外，pH對三七皂苷R1在兩種樹脂上的比吸附量的影響程度有明顯的差異。

2.3.2.2 pH對人參皂苷Rg1在樹脂上吸附的影響 結果見表8。

表8 不同pH藥液中人參皂苷Rg1在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表8可見，pH改變，對人參皂苷Rg1在LSA-30、HPD-100兩種樹脂上的比吸附量有一定程度的影響，對LSA-30樹脂，以pH5為佳;而對于HPD-100樹脂，以pH5～6為佳。兩種樹脂相比，在pH4～7范圍內，LSA-30均明顯優于HPD-100。

2.3.2.3 pH對人參皂苷Rb1在樹脂上吸附的影響 結果見表9。

表9 不同pH藥液中人參皂苷Rb1在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表9可見，pH改變，對人參皂苷Rb1在LSA-30、HPD-100兩種樹脂上的比吸附量的影響趨勢不同，在pH4～7范圍內，人參皂苷Rg1的比吸附量在兩種樹脂上呈現相反的變化趨勢，對 LSA-30樹脂，以 pH5為佳;而對于 HPD-100樹脂，以pH7為佳。

2.3.2.4 pH對羥基紅花黃色素A在樹脂上吸附的影響結果見表10。

表10 不同pH藥液中羥基紅花黃色素A在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表10可見，pH改變，對羥基紅花黃色素A在LSA-30、HPD-100兩種樹脂上的比吸附量的影響趨勢不同，在pH4～7范圍內，對LSA-30樹脂，羥基紅花黃色素A的比吸附量呈先上升后下降走勢，pH以5為佳;而對于HPD-100樹脂，羥基紅花黃色素A的比吸附量呈逐步下降的趨勢，pH以4為佳。兩種樹脂相比，在pH5～7范圍內，LSA-30明顯優于HPD-100。

2.3.2.5 pH對阿魏酸在樹脂上吸附的影響 結果見表11。

表11 不同pH藥液中阿魏酸在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表11可見，pH改變，對阿魏酸在LSA-30、HPD-100兩種樹脂上的比吸附量的影響非常大，阿魏酸的比吸附量均是隨pH的增加而下降。對LSA-30樹脂，從pH4→5，阿魏酸的比吸附量稍有下降，而pH6～7時，比吸附量急居下降，幾乎達到不吸附的程度;而對于HPD-100樹脂，從pH4→5時，阿魏酸的比吸附量即出現明顯下降，pH6～7時與LSA-30樹脂相似。兩種樹脂對阿魏酸的比吸附量，均以pH4為佳。

2.3.2.6 pH對川芎嗪在樹脂上吸附的影響 結果見表12。

表12 不同pH藥液中川芎嗪在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表12可見，pH改變，對川芎嗪在LSA-30、HPD-100兩種樹脂上的比吸附量的影響趨勢不同，在pH4～7范圍內，對LSA-30樹脂，川芎嗪的比吸附量呈先上升后趨于穩定的走勢，pH以5為佳;而對于HPD-100樹脂，川芎嗪的比吸附量在pH5時出現明顯下降，而在其它pH時，比吸附量較為接近。兩種樹脂相比，除pH5外，LSA-30與HPD-100在各pH處的比吸附量相近。

3 小結與討論

3.1 上柱藥液生藥濃度為0.3～0.6 g/mL范圍內，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、羥基紅花黃色素A、阿魏酸和川芎嗪六種有效成分在LSA-30樹脂上的動態比吸附量一般均大于HPD-100樹脂。其中生藥濃度為0.4 g/mL時，各成分在LSA-30樹脂上均有較佳的比吸附量;其中生藥濃度為0.6 g/mL時，各成分在HPD-100樹脂上均有較佳的比吸附量。

3.2 不同成分在同一樹脂上的比吸附量隨pH變化趨勢視樹脂種類不同差異有大有小。對于LSA-30樹脂，除阿魏酸外，其它5種成分比吸附量隨pH變化趨勢較為相似，且均以pH5時為最佳，阿魏酸在此pH亦可獲得較好的比吸附量;而對于HPD-100樹脂，6種成分的比吸附量隨pH變化趨勢差異較大，但pH4時各成分均可獲得較佳的比吸附量。

3.3 結構類型相同的成分，pH對其在樹脂上的吸附性能影響不一定相同。如三七所含3種皂苷在LSA-30、HPD-100二種樹脂上的比吸附量隨pH的變化趨勢亦有程度不等的差異。對于有機弱酸類(如阿魏酸)、黃酮類(如羥基紅花黃色素A)，pH增加，可明顯降低其在非極性樹脂上的吸附性能，該現象可能與其解離后極性增加或使氫鍵破壞有關;對生物堿類成分(如川芎嗪)，pH增加，其在非極性樹脂上的吸附性能稍有增加，該現象可能與其游離程度增加，極性降低有關。因此，用大孔樹脂分離純化復方提取液中多種不同結構類型的有效成分時，考察藥液pH對各類成分比吸附量的影響十分必要，它將有助于尋找到對于大多數有效成分均具有較佳吸附性能的最適pH。

3.4 動態吸附實驗與實際生產條件較為接近，它的研究結果對于合理選擇大孔樹脂的吸附工藝條件用于復方多組分的分離純化具有一定的指導價值。

［1］中國藥典［S］.一部.2005:636.

［2］何 麗，夏新華.川芎提取液中川芎嗪與阿魏酸在HPHPD-100型大孔樹脂上吸附-脫吸附動力學研究［J］.湖南中醫藥大學學報，2007，27(3):29-30.

［3］楊紅艷，夏新華.RP-HPLC測定腦得生片中4種皂苷的含量［J］. 亞太傳統醫藥，2008，4(5):38-40.

［4］夏新華，吳 衛.均勻設計法優選紅花提取工藝［J］.中藥材，2006，29(11):1251-1253.