Ang-2、Cox-2及 VEGF在食管癌組織中表達的研究

卓 越,李敬巖

(佳木斯大學附屬第一醫院消化二科,黑龍江 佳木斯 154003)

血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)和血管內皮生長因子 (vascular endothelial growth factor,V EGF)為目前已知的兩個作用于血管內皮細胞的血管生成促進因子,在腫瘤的血管生成及發展中起著重要的作用[1]。V EGF是一類作用最強、特異性最高的可溶性血管生成促進因子,與腫瘤的生長、侵襲和轉移等特性密切相關。V EGF表達后,通過與血管內皮細胞上的血管內皮生長因子受體結合,刺激內皮細胞分化、增殖、遷移 ,促進血管構建[1]。環氧化酶-2(cyclooxygenase-2,Cox-2)又稱前列腺素過氧化物合成酶-2(PGHS-2),是前列腺素(PGs)合成初始步驟中的關鍵限速酶,生理情況下無明顯表達,當細胞受到相應刺激后便開始合成表達。近期研究表明,Cox-2除了在炎癥中發揮重要作用外,還與腫瘤細胞生長、細胞凋亡、細胞運動和腫瘤血管生成等有密切關系[2]。實驗應用免疫組化技術檢測 Ang-2、Cox-2和 V EGF在食管癌病理組織中的表達,分析其與臨床病理學特征的關系。

1 資料與方法

1.1 標本來源

所有標本收集于2008-01～ 2009-06胸外科手術切除的食管癌病理標本52例,患者男43例,女9例。年齡42～ 79歲,平均58歲。標本均經病理學確診為鱗狀細胞癌。其中有淋巴結轉移者23例,無淋巴結轉移者29例。所有患者送病理檢查前均未放療和化療,且均為該院病理科存檔標本。另取隨機胃鏡檢查組織學相對正常的食管黏膜20例作為正常對照組。

1.2 主要試劑

采用免疫組化方法,兔抗人 Angiopoietin-2多克隆抗體、羊抗人 Cox-2多克隆抗體購于武漢博士德生物技術公司,鼠抗人 VEGF單克隆抗體工作液、S-P免疫組化試劑盒購于中山生物技術公司。

1.3 方法

收集相應病例的存檔蠟塊,行 4μm厚連續切片,取 1張行HE染色,其余行免疫組化 SABC方法染色。操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。每次實驗均以公司提供的陽性片作陽性對照。

1.4 結果判定

以胞漿呈棕黃色為陽性細胞。在光鏡下計數10個高倍視野 (×400),平均陽性細胞數≥ 10%判斷為陽性病例,＜10%為陰性病例。

1.5 統計學方法

兩組間率的比較采用 X2檢驗,檢驗水準 α= 0.05,P＜0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 Ang-2Cox-2及 VEGF在食管癌組織及正常組織中的表達

Ang-2陽性著色主要位于腫瘤細胞和部分腫瘤微血管內皮細胞,Cox-2及 VEGF蛋白表達主要在腫瘤細胞的胞質,少部分在胞膜。在食管癌組織和正常對照組中 Ang-2陽性率分別為55.76%(29/52)和5.00%(1/20),兩組比較差異有統計學意義 (P＜0.05)。在食管癌組織和正常對照組中Cox-2陽性率分別為 67.31%(35/52)和10.00%(2/20),兩組比較差異有統計學意義 (P＜0.05)。在食管癌組織和正常對照組中 V EFG陽性率分別為61.54%(32/52)和0.00%(0/52)兩組比較差異有統計學意義 (P＜0.05)。

2.2 Ang-2 Cox-2及 VEFG在食管癌有無淋巴結轉移組織中的表達

在有、無淋巴結轉移食管癌組織中 Ang-2陽性率分別為82.61%(19/23)、37.04%(10/29),兩組比較差異有統計學意義 (P＜0.05)。在有、無淋巴結轉移食管癌組織中 Cox-2陽性率分別為 82.61%(19/23)、55.17%(16/29),兩組比較差異有統計學意義 (P＜0.05)。在有、無淋巴結轉移食管癌組織中 VEGF陽性率分別為 86.96%(20/23)、44、44%(12/29),兩組比較差異有統計學意義 (P＜0.05)。

3 討論

腫瘤性血管是高度不成熟的血管,依賴于腫瘤組織產生的促血管生成因子克服保持血管穩定的因素。Ang-2是分泌性蛋白,由血管內皮細胞產生,與 Tie-2受體結合不能引起后者磷酸化而破壞血管完整性。病理狀態下,Ang-2主要表達于腫瘤、炎癥、創傷等部位 ,以新生血管網最為豐富。Cox-2在多種腫瘤中有較高表達,促進細胞增殖,抑制凋亡,增加腫瘤細胞侵襲力及促進腫瘤血管生成。V EGF是最直接參與誘導腫瘤血管形成的因子之一,特異地誘導和激活血管內皮細胞的有絲分裂,直接刺激血管生成;又可使微血管通透性增加,導致大分子滲出,為新血管形成提供基質支架。Inueo等研究表明,V EGF蛋白不僅在腫瘤細胞中表達而且在血管內皮細胞中表達[3]。我們實驗證實,Ang-2、Cox-2和 V EGF表達量在正常食管黏膜中明顯低于癌組織,在癌組織的表達集中于腫瘤浸潤前緣,說明食管癌的發生與浸潤與 Ang-2、COX-2和 VEGF的高表達密切相關。分析顯示 Ang-2、Cox-2和 VEGF表達量與淋巴結轉移浸潤有關,淋巴結轉移組 Ang-2、Cox-2和 V EGF表達量明顯高于無淋巴轉移組。淋巴結轉移和浸潤的深度是與食管癌預后明顯相關的指標。Tadahiro等發現 Cox-2強表達的食管癌患者預后較弱表達的差,多因素分析中 Cox-2是預后差的獨立危險因素[4]。綜上所述,Ang-2、Cox-2和 V EGF在食管癌組織中的過表達和腫瘤的血管及淋巴管生成密切相關,參與腫瘤的發生、發展和淋巴轉移。

[1]Hardwick JS,YangY,Zhang C,et al.Identification ofbiomark-ers for tumor endothelial cell proliferation through gene expression profiling[J].Mol Cancer Ther,2005,4(3):413-425

[2]王彬,張湘茹,儲大同,等.易瑞沙在晚期非小細胞肺癌化療失敗后的作用 [J].中華腫瘤雜志,2004,26(12):742-745

[3]Inueo K,Ozeki Y,Suganuma T,et al.Vascular endothelialg rowth factor expression in primary esophqgeal squamous cellcarcinoma.Association with angiogenesis and tumor progression[J].Cancer,1997,79(2):206-213

[4]Tadahiro N,Takahiro E,Akira K,et al.Significance of immunhisto-chemical expression of cycloox ygenase-2in squamous cell carcinoma of the esophagus[J].Am J Surgery,2005,189(1):110-115