首烏益智膠囊對血管性癡呆大鼠學習記憶及性激素水平的影響

李長生 楊曉妮 賀 仆 劉世青 林梅青

(山東省千佛山醫院,山東 濟南 250014)

血管性癡呆(VD)是因腦血管疾病所致的智能及認知功能障礙的臨床綜合征〔1〕,是老年人多發病和疑難病,給社會和家庭帶來沉重的負擔,因此探討其發病原因和機制,研究開發治療該病的新藥具有十分重要的意義。隨著對 VD研究的不斷深入,人們認識到性激素與VD關系密切,性激素水平與VD的發生發展存在著密切聯系。本研究采用改良 Pulsinelli四血管阻斷(4-VO)法制造 VD大鼠模型,觀察首烏益智膠囊對 VD大鼠的療效,并通過性激素水平的變化,進一步探討首烏益智膠囊對 VD的作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 Wistar健康老齡大鼠 120只(月齡 ＞15個月),雌雄各半,體重 300～400 g。山東大學實驗動物中心提供,實驗動物質量合格證號:010281。

1.1.2 藥物與試劑 首烏益智膠囊(藥物組成:制何首烏、黃芪、丹參、川芎、益智仁、天麻、水蛭等)由濟南鋼鐵職工醫院制劑室生產。腦復康片由濟南東風制藥有限公司生產(批號0307043)。碘〔125I〕-人血清睪酮 (T)放射免疫藥盒、碘 〔125I〕-雌二醇(E2)放射免疫藥盒、碘〔125I〕-孕酮(P)放射免疫藥盒,均購于北京北免東雅生物技術研究所。

1.2 方法

1.2.1 迷宮學習訓練 大鼠購進,室溫 20～24℃,相對濕度45～55%,飼養 1 w后,Morris水迷宮法進行大鼠行為學訓練。方法:定位航行試驗,每天下午 4次,將受試大鼠按順時鐘方向順序面向池壁放入水中。記錄 2 min內找到平臺的時間(逃避潛伏期)。共學習 6d。

1.2.2 VD大鼠模型的制備 用改良 Pulsinelli4-VO法制造VD大鼠模型〔2,3〕。大鼠于術前禁食 12 h,不禁水。0.4%戊巴比妥鈉,0.16g/kg腹腔麻醉,將大鼠俯臥固定,行背側頸正中切口,逐層鈍性分離,暴露雙側第 1頸椎橫突翼小孔,用直徑約

0.5 mm的電凝針灼燒雙側翼小孔內的椎動脈,造成永久性閉塞,再將大鼠仰臥固定,行腹側頸正中切口,鈍性分離雙側頸總動脈,以“4”號絲線穿線備用。24 h后,用微動脈夾夾閉雙側頸總動脈5 min,間隔 1 h后再夾閉 5 min,共夾閉 3次,局部傷口縫合前,以慶大霉素局部噴灑處理防止感染,術后3d給予青霉素 2 U/kg肌肉注射抗感染。假手術組步驟同上,不做缺血處理。

1.2.3 造模后水迷宮測試 造模術后 7 d,對大鼠進行水迷宮測試。定位航行試驗:歷時 6 d,每天下午 4次,將受試大鼠按順時鐘方向順序面向池壁放入水中。記錄2 min內找到平臺的時間。前 5 d學習,第 6天測試,記錄測試成績。空間探索試驗:第 6天下午定位航行試驗后撤除平臺,將大鼠從任意一點放入水中,拍攝游泳過程 1 min,分析循行路徑,統計其在原平臺所在象限內外循行路徑之比,和在該象限內外停留的時間之比,統計跨越原平臺位置的次數。

1.2.4 分組 按術后水迷宮定位航行測試成績,隨機分組。將 VD模型大鼠分為首烏益智膠囊組、腦復康組、鹽水組,每組16只(雌雄各 8只)。并設假手術組 10只(雌雄各 5只)。

1.2.5 藥物干預 術后 7 d,給大鼠用灌胃器灌胃,每天下午灌一次,共灌胃 20 d。灌胃液體溫度為 20℃。首烏益智膠囊組,首烏益智靈溶液灌胃,每次5 ml,含藥量 0.24 g。鹽水組,生理鹽水灌胃,每次5ml。腦復康組,腦復康溶液灌胃,每次5 ml,含藥量 0.06 g。假手術組,生理鹽水灌胃,每次 5 ml。

1.2.6 用藥后迷宮測試 用藥 20 d后,對大鼠進行水迷宮測試。方法同造模后水迷宮測試。迷宮后 3 d,頸靜脈取血測性激素。

1.3 性激素的測定 E2、P、T三個試驗項目均采用放射免疫分析方法。

1.4 統計學方法 數據以x±s表示,應用 SPSS11.5軟件,組內數據比較用 t檢驗,組間數據比較用單因素方差分析。

2 結 果

2.1 各組大鼠造模后定位航行試驗結果 造模后假手術組大鼠的逃避潛伏期為(2.26±0.55)s,明顯小于鹽水組(6.45±0.39)s、腦復康組(6.42±0.44)s、首烏益智膠囊組(6.55±0.48)s,具有統計學意義(P＜0.01),鹽水組、首烏益智膠囊組、腦復康組間大鼠的逃避潛伏期無統計學差異(P＞0.05),表明 VD模型成功。

2.2 各組大鼠用藥前后定位航行試驗及空間探索試驗測試結果 用藥后組內比較,首烏益智膠囊組、腦復康組治療后逃避潛伏期明顯小于治療前(P＜0.01);首烏益智膠囊組、腦復康組治療后在原平臺象限內的游泳距離和時間及跨越原平臺位置的次數均較治療前明顯改善(P＜0.05,P＜0.01);用藥后組間比較,首烏益智膠囊組大鼠的逃避潛伏期明顯小于腦復康組和鹽水組(P＜0.01,P＜0.05),低于假手術組(P＜0.01);首烏益智膠囊組大鼠在原平臺所在象限內的循行路徑和停留時間及跨越原平臺位置的次數均好于腦復康組、鹽水組,低于假手術組(P＜0.01)(見表 1)。

2.3 各組VD模型大鼠用藥前后性激素水平變化 VD模型雌鼠用藥后首烏益智膠囊組、腦復康組治療后E2、P水平明顯高于治療前(P＜0.05),VD模型雄鼠用藥后首烏益智膠囊組、腦復康組治療后 E2水平明顯低于治療前(P＜0.05),T水平明顯高于治療前(P＜0.05)。首烏益智膠囊組雌鼠 E2、P水平明顯高于腦復康組、鹽水組(P＜0.05),首烏益智膠囊組雄鼠 E2水平明顯低于腦復康組、鹽水組,而T水平明顯高于腦復康組、鹽水組(P＜0.05),見表 2。

表1 用藥前后定位航行成績及空間探索成績分析(x±s)

表2 VAD模型大鼠用藥后性激素水平比較(x±s)

3 討 論

研究表明,VD的病理機制主要有腦梗死、小血管疾病、白質損傷、神經元損傷幾方面;其分子機制主要有級聯反應、興奮性毒性、炎癥反應、細胞凋亡等〔4〕。VD的發病機制目前還不完全清楚,隨著對 VD研究的不斷深入,人們認識到性激素與 VD關系密切。近年來研究發現 VD時血漿性激素水平發生變化,出現性激素水平失衡,認知功能的減退與性激素水平的下降成正相關,提示性激素水平與 VD的發生發展存在著密切聯系。性激素對 VD發揮作用主要通過擴血管增加腦血流、促進葡萄糖代謝、促進乙酰膽堿合成和釋放、降血脂、改善血液流變學以及減少興奮性氨基酸毒性、抗氧自由基〔5,6〕等幾個方面發揮作用,改善癥狀。本實驗研究結果表明:首烏益智膠囊能升高 VD模型雌鼠體內 E2、P水平,降低 VD模型雄鼠體內 E2水平,升高T水平,從而調節VD模型大鼠體內性激素水平的失衡。

VD屬中醫“呆病”范疇,本病病位在腦,與肝、腎、心、脾等臟密切相關,我們以傳統中醫理論為指導,根據多年來的臨床經驗,提出腎精虧虛、淤血阻絡是 VD的基本病機,確立了補腎健腦、化淤通竅的基本治法,經過反復試驗,組方不斷加減,制成首烏益智膠囊。本方以何首烏為君藥,苦、甘、澀、溫、不寒不燥,專入肝腎,養陰益精,補腎健腦,養血益肝。黃芪氣味俱輕,具有升發之性,功專補氣升陽,為補氣藥之最,益智仁辛溫氣香,既能溫補腎陽,收斂固精,縮小便,又能溫胃逐寒,暖脾攝涎唾。二藥為輔藥鼓舞腎氣以生精,助陽以化陰。銀杏葉、水蛭、天麻共為佐藥,與主藥、輔藥共達益氣活血、化瘀通絡、推陳致新、填精益腦、開竅聰智之功。川芎為使藥,辛溫香竄,走而不守,為血中之氣藥,與黃芪相輔相成、益氣活血、安神醒腦,可帶諸藥到達病所。全方配伍共達補腎健腦、益精填髓、益氣活血、化瘀通竅之功跑。本實驗研究結果驗證了首烏益智靈對 VD有明顯的治療作用。

首烏益智靈能明顯改善 VD大鼠的智能,其治療 VD的機制之一可能是調節 VAD模型大鼠體內性激素水平。這為中詠藥防治腦 VD提供了新思路、新方法,有重要的使用價值和理論意義。

1 王維治,羅祖明.神經病學〔M〕.北京:人民衛生出版社,2002:253-5.

2 Schmidt-Kastner R,Paschen W,Ophoff BG,et al.Q modified four-wessel occlusion model for inducing in complete forebrain ischemia in rats〔J〕.Stroke,1989;20:936-8.

3 Pulsinelli WA,Brierley JB,Plum F.Temporal profile of neuronal damage in model of transient forebrain ischemia〔J〕.AnnNeurol,1982;11:491.

4 田金洲.血管性癡呆〔M〕.北京:人民衛生出版社,2003:210.

5 朱鋐達,陳名道 .性激素與動脈硬化性心血管疾病及其相關事件的關系〔J〕.中華內分泌代謝雜志,2005;21(1):84-7.

6 張秀清,遲兆富 .性激素與老年期腦梗死的相關性研究進展〔J〕.山東醫藥,2003;43(25):54-5.