廣西習(xí)用中藥材番石榴葉不同季節(jié)采集對槲皮素含量的影響

董俊萍，王國振，支文星

（1.石家莊陽光藥業(yè)有限公司，河北 石家莊 050000； 2.山西省中醫(yī)藥研究所，山西 太原 030012）

番石榴葉為桃金娘科植物番石榴 Psidium guajava L.的干燥葉及帶葉嫩莖，始載于《廣西中藥志》[1]，含有β-谷甾醇、槲皮素、番石榴苷、無色矢車菊素、番石榴酸等成分。現(xiàn)代藥理研究表明，從番石榴葉中提取的總黃酮苷及單黃酮苷具有降血糖作用[2]。其單味藥制劑消渴降糖膠囊收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第十五冊）》，用于輕度及中度成年糖尿病的治療。番石榴葉分布于我國廣西、廣東、海南、貴州及四川等地，目前市場上銷售的番石榴葉主要來自廣西。筆者對不同月份的廣西產(chǎn)番石榴葉藥材進(jìn)行了質(zhì)量考察，以期對藥材的應(yīng)用提供參考。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀，包括515泵、2487紫外檢測器（美國Water公司）；N-2000型色譜工作站（浙江大學(xué)）；TU-1900型紫外分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）。廣西番石榴葉；槲皮素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為10081-200505）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Puresil C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇 -0.5%磷酸溶液（58 ∶42）[3-4]；檢測波長：372 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20 μL。理論塔板數(shù)按槲皮素計(jì)不低于3 000。

2.2 溶液制備

取同一批次的番石榴葉粉末約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入含5%鹽酸的甲醇溶液25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理45 min，放冷，再稱重，用含5%鹽酸的甲醇溶液補(bǔ)足損失的質(zhì)量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.025 mg的溶液，即得對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：稱取槲皮素對照品20.0mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用流動(dòng)相分別稀釋成0.005，0.025，0.050，0.100，0.200 mg/mL 的對照品溶液。分別取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積（Y）對槲皮素質(zhì)量濃度（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 Y=612 288 X-439.67，r=0.999 9（n=5）。結(jié)果表明，槲皮素進(jìn)樣量在 0.01 ～4.04 μg的范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一批次的藥材供試品溶液20 μL，于0，2，4，6，8 h 時(shí)進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果的 RSD 為1.5%（n=5），表明供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

精密度試驗(yàn)：精密吸取對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果的 RSD為1.8%（n=6），表明儀器有良好的精密度。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批藥材6份，分別按供試品溶液制備方法操作，按擬訂的色譜條件測定，記錄色譜圖。結(jié)果的 RSD為1.6%（n=6），表明方法有良好的重現(xiàn)性。

加樣回收試驗(yàn)：取同一批藥材9份，樣品量約為供試品溶液制備方法的一半量，精密加入槲皮素對照品，按供試品溶液制備方法操作，按擬訂的色譜條件測定，記錄色譜圖并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 槲皮素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.4 樣品含量測定

在不同月份采集番石榴葉，自然曬干，按供試品溶液制備方法處理，依法測定含量。結(jié)果 6，7，8，9，10，11，12 月份采集的樣品中槲皮素含量分別為0.30%，0.32%，0.40%，0.44%，0.42%，0.50%，0.56%。

3 討論

稱取槲皮素對照品適量，加甲醇制成適量的溶液，在200～800nm波長范圍內(nèi)繪制槲皮素的紫外吸收圖譜。結(jié)果槲皮素在372 nm左右的波長處有較大吸收，故選372 nm作為檢測波長。

同樣是產(chǎn)自廣西的番石榴葉，采集的時(shí)間不同，其槲皮素含量相差較大，其中以11月、12月產(chǎn)的番石榴葉含量最高，6月、7月產(chǎn)的番石榴葉質(zhì)量較差。上述藥材只是樣品，代表性不是很強(qiáng)，尚需繼續(xù)研究，但從采集時(shí)間的不同可以看出，藥材存在較大的質(zhì)量差異。本試驗(yàn)為以后制訂番石榴葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了參考。

[1]廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳.廣西中藥志（第1冊）[M].南寧：廣西人民出版杜，1959：190.

[2]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草（第五冊）[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1998：642.

[3]朱長福，同利琪，王國振，等.番石榴葉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中草藥，2006，37（6）：942-943.

[4]亢澤坤，丁文學(xué)，王國振，等.不同產(chǎn)地番石榴葉中槲皮素含量測定[J].中國藥業(yè)，2008，17（8）：31.