反相高效液相色譜法測定止嗽掃痰丸中鹽酸麻黃堿含量

張 虹，謝俊峰，樊鈺庫

（1.寧夏回族自治區人民醫院，寧夏 銀川 750001； 2.寧夏回族自治區隆德縣人民醫院，寧夏 隆德 756003；3.寧夏回族自治區固原市人民醫院，寧夏 固原 756000）

止嗽掃痰丸收載于《衛生部藥品標準·中藥成方制劑（第四冊）》，具有宣肺定喘、止咳祛痰的功效，用于治療咳嗽氣喘、痰多胸悶。筆者對方中具有發汗散寒、宣肺平喘功效的麻黃[1]進行了含量測定方法研究，為進一步完善該制劑的質量標準提供依據，報道如下。

1 儀器與試藥

Waters-Alliance 2695-2487型高效液相色譜儀；Waters-Brzze 1525-717-2996型高效液相色譜儀；UV-2550型可見紫外分光光度計。水為超純水，乙腈、甲醇為色譜純，乙醚、鹽酸、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉均為分析純。鹽酸麻黃堿對照品（批號為171241-200303，中國藥品生物制品檢定所）；止嗽掃痰丸（市售品）；缺麻黃陰性空白樣品（按處方及制法自制）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；柱溫：35 ℃；流動相：0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺，用磷酸調pH 為 2.7）- 乙腈（100 ∶5）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：207 nm；進樣量：10 μL。在此色譜條件下，色譜圖見圖1。可見，理論塔板數按鹽酸麻黃堿計算不低于5 000，鹽酸麻黃堿與相鄰色譜峰的分離度大于1.5，拖尾因子符合要求。

2.2 溶液制備

取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1 mL含50 μg的溶液，即得對照品溶液。取樣品適量，研細，取粉末2.0 g，精密稱定，精密加入甲醇50 mL，稱定質量，超聲處理（250 W，40 kHz）30 min，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液25 mL，蒸至近干，加水20 mL溶解轉移至分液漏斗中，加濃氨試液1 mL，用乙酸乙酯萃取5次，每次15 mL，合并萃取液，蒸至近干，加鹽酸乙醇溶液（1→20）1 mL，低溫蒸干，用流動相溶解并定容至10 mL，用0.45 μm的微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。取陰性空白樣品 2.0 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法同法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：取2.2項下對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液，按擬訂的色譜條件測定。結果供試品溶液在與對照品溶液相同保留時間有一致的色譜峰，陰性對照品溶液則無此峰（圖 1）。

線性關系考察：取質量濃度為67 μg/mL的對照品溶液，按擬訂的色譜條件，分別進樣 1，2，5，10，15，20，30，50，100 μL，記錄色譜圖，計算峰面積，以峰面積對進樣量進行線性回歸，得回歸方程 Y=1 932 347.79 X-40 425.66，r=1.000 0（n=9）。結果表明鹽酸麻黃堿進樣量在0.067～6.700 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

穩定性試驗：取供試品溶液，于24 h內分別進樣5次，記錄峰面積。結果平均峰面積為1 538 117，RSD為0.18%（n=5），表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

精密度試驗：取同一對照品溶液，重復進樣6次。結果平均峰面積為1 584 685，RSD為0.10%（n=6），表明儀器精密度良好。

重現性試驗：取同一批號的樣品，按擬訂的方法重復測定6 次。結果平均含量為 0.639 mg/g，RSD=1.47%（n=6），表明方法重現性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（鹽酸麻黃堿含量為0.639 mg/g）適量，研細，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入質量濃度為0.364 8 mg/mL的對照品溶液2 mL，揮干，按供試品溶液制備方法制成待測溶液，依法測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收試驗結果（n=6）

2.4 樣品含量測定

依法測定5批樣品，結果每g樣品中鹽酸麻黃堿的含量分別為 0.639，0.602，0.563，0.547，0.616 mg（n=2）。依據測定結果，每g樣品中鹽酸麻黃堿的含量可以暫訂為不少于0.50 mg。

3 討論

取鹽酸麻黃堿對照品溶液，以流動相為空白溶液，在紫外分光光度計上于190～300 nm波長范圍內掃描，結果鹽酸麻黃堿在207.1 nm波長處有最大吸收，故選擇207 nm為檢測波長。

選擇提取溶劑時，先用甲醇提取，可以除去部分脂溶性雜質，甲醇提取液蒸干后加水溶解，再用乙酸乙酯萃取，又可除去部分水溶性雜質。分別以乙醚、氯仿、乙酸乙酯為提取溶劑依法制備供試品溶液并測定含量，結果氯仿、乙酸乙酯提取的含量明顯高于乙醚提取，考慮氯仿的毒性較大，選擇以乙酸乙酯作為提取溶劑。以乙酸乙酯作為提取溶劑，分別提取3～7次并測定含量，結果樣品提取5～7次的含量無明顯差別。

曾對不同比例的流動相進行了考察，并參考文獻[2-5]優化條件，以文中流動相時pH恒定，出峰穩定性及峰形均好。

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