制備環境對N-乙酰半胱氨酸木糖醇注射液有關物質的影響

方紅英，王福根，莊讓笑，席建軍，邵益丹，繆斌，吳錫銘

（浙江中醫藥大學附屬第六醫院，浙江 杭州 310014）

N-乙酰半胱氨酸木糖醇注射液（NACX）是我院研制的用于治療慢性重癥肝炎的制劑[1]。由于N-乙酰半胱氨酸（NAC）在水溶液中很不穩定，其分子中的巰基易發生自動氧化，產品在制備過程中可產生的雜質有 L-半胱氨酸（CSH）、L-胱氨酸（CSSC）、N，N-二乙酰胱氨酸（ASSA）等，其中 N，N-二乙酰胱氨酸能明顯影響產品的質量。第5版歐洲藥典（EP）、2003年版英國藥典（BP）對這些有關物質的含量有著嚴格的限制。為進一步嚴格控制NACX中的雜質，提高制劑質量，筆者參照BP的測試方法，對在不同制備環境中產生的上述有關物質含量進行比較試驗，報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀。NACX（自制）；N-乙酰半胱氨酸、L-半胱氨酸、L-胱氨酸對照品，購自中國藥品生物制品檢定所；N，N-二乙酰胱氨酸（自制）；庚烷磺酸鈉為高效液相色譜專用試劑，磷酸、磷酸二氫鈉為分析純。

2 方法與結果

2.1 含量測定

2.1.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ODS柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相:0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鈉1.38 g，庚烷磺酸鈉3.2 g，加水700 mL溶解后，用磷酸調pH 2.15，加水至1 000 mL）-甲醇（95 ∶5）；流速：1 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：210 nm；進樣量：20 μL。

2.1.2 溶液制備

取NACX適量，加流動相制成質量濃度為4 mg/mL的溶液，作為供試品溶液。分別稱取N-乙酰半胱氨酸、L-半胱氨酸、L-胱氨酸、N，N-二乙酰胱氨酸對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1 mL中含上述成分各1 mg的溶液，搖勻，作為對照品溶液。

2.1.3 方法學考察

系統適用性試驗：取對照品溶液，依法進樣記錄色譜圖（圖1）。結果表明，在該色譜條件[2]下，N-乙酰半胱氨酸與3種雜質均能達到基線分離，L-胱氨酸、L-半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、N，N-二乙酰胱氨酸的色譜峰保留時間約為1.5，2.0，3.5，6.4 min。

線性關系考察：精密稱取N-乙酰半胱氨酸和3種雜質對照品適量，加流動相配制成相當于有關物質檢查用對照品溶液的80%，90%，100%，110%，120%濃度的5種溶液，分別進樣20 μL，以質量濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，線性回歸方程見表1。

精密度試驗：取線性關系考察項下的對照品溶液，重復進樣6次。結果的 RSD范圍在0.1% ～0.9%，表明儀器精密度良好。

圖1 各雜質典型的色譜分離圖

表1 線性關系考察結果

加樣回收試驗：取已知含量的樣品適量，分別加入不同量的N-乙酰半胱氨酸對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定含量，計算加樣回收率。結果見表2。

表2 N-乙酰半胱氨酸加樣回收試驗結果（n=6）

2.2 穩定性影響因素考察

2.2.1 pH

取NAC和木糖醇，用注射用水制成含量為99.6%的注射液，以 NaOH 或 HCI調 pH 分別為 2.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，灌封于250 mL輸液瓶中，于115℃加熱30 min后，分別進行液相色譜分析。結果見表3。可見，7種不同pH的溶液加熱前后pH、澄明度無明顯變化，而NAC含量有不同程度的改變。NAC的氧化、水解產物在酸性溶液中為CSH和CSSC，在堿性溶液中以ASSA為主，但在pH為6.0～7.0范圍內溶液較穩定，分解產物也相對減少。綜合上述結果和結合臨床要求，NACX溶液pH以6.5～7.5為妥。

表3 不同pH溶液加熱后各雜質含量變化

2.2.2 氧

取樣品，按2.2.1項下方法制成pH約為6.5的溶液，在配制溶液及容器空間分成通氮和不通氮兩組。通氮組所用注射用水預先煮沸，通入氮氣，冷至60℃；不通氮組按一般方法配制。兩組樣品分別經日光照射3 d和115℃加熱30 min，并依法測定pH及各雜質含量，結果見表4。

表4 通氮氣對光照和高溫滅菌條件下NAC溶液中各雜質含量的影響

2.2.3 光照

取樣品，按2.2.2項下通氮組方法配制溶液，調pH約為6.5，置光照度為4 000 lx的光照箱內，間隔一定時間取樣分析。結果見表5。

表5 光照對通氮NAC溶液各雜質的影響

2.2.4 加熱

取樣品，按2.2.2項下通氮組方法配制溶液，調pH約為6.5，置 90 ℃進行恒溫加速試驗，間隔 0，24，48，72，96，120，144 h 取樣分析。結果見表6。

表6 通氮NAC溶液在恒溫（90℃）條件下不同時間各雜質含量變化

2.3 室溫留樣考察試驗

取樣品，在室溫條件下放置，并定期進行對比分析。結果見表7。

表7 通氮NAC溶液室溫留樣考察的雜質含量變化

3 討論

N-乙酰半胱氨酸分子結構中含有巰基，在水溶液中易發生自動氧化，溶液中的溶氧和容器空間氧及溶液的pH對產品質量影響較大，溫度、光照等對產品的穩定性也有一定影響。由于N-乙酰半胱氨酸的氧化還原電位很小，一般抗氧劑不僅不能發揮抗氧作用，反而會促進其氧化，若遇高溫則氧化更迅速，故配制時必須嚴格控制溫度。

穩定性試驗表明，本品在合適的工藝條件范圍內能克服上述多項不穩定因素，故產品質量容易控制，能符合注射劑的質量要求。另外，采用高效液相色譜法能有效控制雜質，客觀反映產品質量。

[1]吳 剛，郭樹華.N-乙酰半胱氨酸在肝病治療中應用[J].中華肝臟病雜志，2004，12（3）：185-186.

[2]韓曉捷，黃哲蘇，李海生.反相離子對色譜法測定乙酰半胱氨酸注射液含量及有關物質的方法研究[J].天津藥學，2005，17（6）：7-9.