毛細管GC法測定格列齊特片和格列齊特片(Ⅱ)的含量

韓學(xué)靜 王熳 杜增輝

格列齊特片和格列齊特片(Ⅱ)是臨床常用的第二代磺脲類降血糖藥，作用較強，能降低血小板的聚集和粘附力，有助于防治糖尿病微血管病變。兩種藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分別收載于國家藥品標(biāo)準(zhǔn)［1］和《中國藥典》2005年版二部［2］，其含量測定均采用高氯酸電位滴定法，提取過程有異，但格列齊特片(Ⅱ)提取步驟更為繁瑣費時，操作時加三氯甲烷振搖提取30 min，用G4垂熔玻璃漏斗濾過，濾液與洗液在40℃以下減壓蒸發(fā)至干，此過程人為因素造成的誤差很大。格列齊特的含量測定還有HPLC法等［3］，尚未見GC法的報道。本研究參考文獻［4］建了毛細管GC法，以正十四烷為內(nèi)標(biāo)，并與高氯酸電位滴定法比較。本法準(zhǔn)確、靈敏、快速，環(huán)境污染小，成本低，可用于這兩種藥物的含量測定。

1 儀器與試藥

6890型全自動氣相色譜儀(Agilent公司)。

格列齊特對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號100269-200402)，正十四烷(內(nèi)標(biāo)，Sigma公司，GC純度≥99.0%)，甲醇為色譜純。格列齊特片(石家莊四藥有限公司提供，批號:100209、100210、100211);格列齊特片(Ⅱ)(石家莊四藥有限公司提供，批號:100201、100202、100203;石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供，批號:100301)。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液配制 內(nèi)標(biāo)溶液:精密稱取正十四烷適量，加甲醇溶解并稀釋成0.3mg/ml的內(nèi)標(biāo)溶液。

對照品貯備液:精密稱取格列齊特對照品150mg，置100 ml量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液超聲溶解并用內(nèi)標(biāo)溶液定容，搖勻即得。

供試品溶液:精密稱取格列齊特片和格列齊特片(Ⅱ)細粉適量(相當(dāng)于格列齊特30mg)，置50 ml量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液25 ml超聲使溶解并用內(nèi)標(biāo)溶液定容，搖勻，濾過，即得。

2.2 色譜條件 色譜柱DB-624毛細管柱(0.53mm×60 m×3.0 μm);柱溫200℃;進樣口溫度220℃;檢測器 FID，溫度250℃;載氣，氮氣，流速 10.0 ml/min;進樣量 1 μl，分流比18∶1。

取空白溶液、對照品溶液和供試品溶液進樣分析，結(jié)果顯示空白溶液不干擾測定(見圖1)。格列齊特與內(nèi)標(biāo)峰分離度為15.5，理論板數(shù)均大于18000。

圖1 典型氣相色譜圖

2.3 線性試驗 精密量取對照品貯備液1、2.5、4 ml，置10 ml量瓶中，以及3、4 ml，置25 ml量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液定容，搖勻。將上述系列濃度溶液，分別進樣測定。以格列齊特濃度c對格列齊特與內(nèi)標(biāo)峰面積比值R進行線性回歸，得回歸方程R=1.251c-0.024，r=0.9995。表明格列齊特在0.15～1.5mg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。檢測限為0.5 ng。

2.4 回收率試驗 取已知含量的格列齊特片(批號:100209)和格列齊特片(Ⅱ)(批號:100301)細粉(相當(dāng)于格列齊特7.5mg)各6份，置25 ml量瓶中，分別精密加入對照品貯備液4、5、6 ml，加內(nèi)標(biāo)溶液10 ml超聲使溶解并用內(nèi)標(biāo)溶液定容，搖勻，過濾。進樣測定，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算回收率。格列齊特片平均加樣回收率為99.49%(n=6)，RSD為0.65%;格列齊特片(Ⅱ)平均加樣回收率為99.61%(n=6)，RSD為0.52%。

2.5 精密度與穩(wěn)定性試驗 取對照品溶液，連續(xù)進樣6次，RSD為0.88%。

取同批片劑樣品，按“2.1”項下方法制得供試品溶液，共6份，分別進樣，RSD為0.40%。

取片劑供試品溶液，分別于室溫下放置 0、2、4、6、8、24 h，進樣測定，RSD為0.93%。

2.6 樣品測定 分別取對照品溶液(含格列齊特為0.6mg/ml)和供試品溶液，進樣測定，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計算樣品含量，并與現(xiàn)行方法結(jié)果比較，見表1。

表1 樣品測定結(jié)果(標(biāo)示量%)

3 討論

本研究選擇與格列齊特(C15H21N3O3S)碳數(shù)相近的長鏈烷烴正十四烷(C14H3O)為內(nèi)標(biāo)，峰形對稱，保留時間4.902 min，色譜峰響應(yīng)值與出峰位置都較適中。正十四烷與甲醇互溶，格列齊特在甲醇中略溶，對照品貯備液時經(jīng)超聲后均能完全溶解，故選擇甲醇作溶劑，且不干擾測定。

曾選用HP-5(0.32mm×30 m×0.25 μm)弱極性毛細管柱，但內(nèi)標(biāo)峰拖尾嚴重，且格列齊特與溶劑峰分離欠佳;改用中極性DB-624毛細管柱，內(nèi)標(biāo)峰形對稱(拖尾因子1.04)。格列齊特的熔點為162℃ ～166℃，DB-624色譜柱的最高使用溫度260℃，本試驗的柱溫為200℃，可有效避免柱流失。調(diào)整分流比為18∶1，峰形良好，靈敏度符合要求。

［1］國家食品藥品監(jiān)督管理局.WS1-(X-103)-95Z-2006.

［2］中國藥典.二部［S］.2005:595-596.

［3］丁洪亮，張根元，陶偉博，等.高效液相色譜法測定格列齊特緩釋片的含量.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2004，24(3):156-157.

［4］景秀娟，韓學(xué)靜，張?zhí)m桐，等.間尼索地平的毛細管GC-電子捕獲檢測器法測定.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2008，39(2):125-126.