P16蛋白在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義

楊曉飛，羅光恒

（貴州省人民醫(yī)院，貴州貴陽(yáng) 550002）

胃癌是我國(guó)常見的消化道腫瘤之一。研究表明，胃癌的發(fā)生、發(fā)展與癌基因和抑癌基因結(jié)構(gòu)、功能和表達(dá)調(diào)控異常等因素密切相關(guān)。p16是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的重要的抑癌基因，1994年，Kamb和Nobori等[1-2]幾乎同時(shí)報(bào)道了有關(guān)p16基因的研究。p16基因位于9號(hào)染色體短臂2區(qū)1帶，完整序列包括2個(gè)內(nèi)含子和3個(gè)外顯子，其中，外顯子1含126 b，外顯子2含307 b，外顯子3含11 b。p16基因突變和缺失廣泛存在于各種腫瘤，當(dāng)p16基因失活或被改變時(shí)，P16蛋白表達(dá)缺失，則引起細(xì)胞增殖失控而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。本研究采用免疫組織化學(xué)鏈霉菌素-生物素法（streptaridin peroxidase，SP）對(duì)我院2007年5月～2009年12月收集的68例胃癌患者的新鮮胃癌組織及25例正常胃黏膜的P16蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，旨在探討P16蛋白異常表達(dá)與胃癌不良生物學(xué)行為的關(guān)系，以及P16蛋白的表達(dá)情況對(duì)胃癌預(yù)后的判斷。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入的68例胃癌患者和同期25例正常對(duì)照病例術(shù)前均未接受過放療和化療，且所有標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)。68例胃癌患者年齡41～76歲，平均57歲；其中，男51例，女17例。胃癌組織病理學(xué)分型：高分化腺癌6例，中分化腺癌11例，低分化腺癌47例，印戒細(xì)胞癌4例。癌組織浸潤(rùn)深度：侵犯達(dá)淺層者23例，侵犯達(dá)全層者45例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性42例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例。

1.2 試劑與方法

1.2.1 組織學(xué)處理 全部標(biāo)本按標(biāo)準(zhǔn)取材后，均在手術(shù)切除后0.5 h內(nèi)以10%中性福爾馬林溶液固定24 h。經(jīng)乙醇梯度脫水，二甲苯透明2次，浸蠟包埋，制成4μm厚的切片，準(zhǔn)備免疫組織化學(xué)染色。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色 P16蛋白染色采用SP法，SP免疫組織化學(xué)試劑購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。脫蠟、水化、染色步驟嚴(yán)格按照免疫組織化學(xué)試劑使用說明書進(jìn)行。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

P16蛋白陽(yáng)性染色表達(dá)為胞核型，呈清晰棕黃色。陽(yáng)性細(xì)胞百分率：（-）為無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞；（+）為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜25%；（++）為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)25%～50%；（+++）為陽(yáng)性細(xì)胞＞50%。每張切片以每10個(gè)高倍視野陽(yáng)性細(xì)胞百分率綜合分析。計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)后取均值。（+）～（+++）均定性為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，經(jīng) SPSS 10.0分析，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

25例正常胃組織標(biāo)本中，P16蛋白表達(dá)25例（100%）；在68例胃癌組織標(biāo)本中，男51例（75.0%），女 17例（25.0%），P16陽(yáng)性率為41.11%，可見P16蛋白在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于其在正常胃黏膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)率，正常胃黏膜組織與胃癌組織中P16蛋白陽(yáng)性表達(dá)情況差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；P16蛋白表達(dá)與胃癌患者的性別、浸潤(rùn)深度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和胃癌分化程度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與高、中分化胃癌組織P16蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較，低分化、未分化胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著降低（P＜0.05）；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者組織學(xué)檢查顯示，P16蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為28.57%（12/42），而無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組P16蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為61.53%，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見表 1。

表1 P16蛋白表達(dá)與主要病理因素的關(guān)系

3 討論

致癌因子作用于不同的基因并引起相關(guān)基因的突變和表達(dá)水平的變化，導(dǎo)致胃癌的發(fā)生。因此，研究胃癌組織中基因表達(dá)的變化不但對(duì)胃癌發(fā)生機(jī)制的研究有幫助，而且可為胃癌的早期發(fā)現(xiàn)等提供理論依據(jù)。p16是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的重要抑癌基因，其編碼產(chǎn)物為CDK4的抑制物，在細(xì)胞周期中起負(fù)調(diào)節(jié)作用。P16蛋白通過抑制細(xì)胞周期cyclin Denzymes/cyclin dependent kinase 4（cyclin D／CDK4）的活性參與并調(diào)節(jié)細(xì)胞從G0期進(jìn)入G1期[3]。若沒有P16蛋白的抑制作用，細(xì)胞會(huì)異常增生，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生及發(fā)展。有學(xué)者用腺病毒載體將外源野生性p16基因感染有p16基因缺失的腫瘤細(xì)胞，使p16基因恢復(fù)表達(dá)來(lái)治療腫瘤[4-6]。1995年，Lukas等[7]在胃癌細(xì)胞系中首次發(fā)現(xiàn)p16基因純合性缺失與胃癌的關(guān)系，本研究用SP法研究胃癌組織P16表達(dá)與胃癌的關(guān)系，證實(shí)P16蛋白在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于其在正常胃黏膜組織中的表達(dá)率，說明在胃癌組織中存在p16基因的失表達(dá)，且分期越晚，p16的表達(dá)越低，反映胃癌病程和淋巴轉(zhuǎn)移情況。

本研究表明，P16蛋白表達(dá)與胃癌患者的性別、浸潤(rùn)深度差異無(wú)關(guān)，但與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和胃癌分化程度差異有關(guān)。研究顯示，在低分化、未分化胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于高分化、中分化胃癌組織，p16基因表達(dá)減低有可能使癌細(xì)胞獲得某種生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)，這與各種腫瘤細(xì)胞系中存在p16基因表達(dá)減低而具有生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)的結(jié)果一致[7]，也與近年研究一致[8-9]。p16基因變異在胃癌發(fā)生及發(fā)展中起重要作用，p16基因mRNA的表達(dá)顯著改變，一方面說明重度異型增生、結(jié)腸型腸化等疾病是重要的癌前病變，同時(shí)也提示p16基因的變異是胃癌發(fā)生的早期事件；在胃黏膜形態(tài)癌變之前，p16基因mRNA的表達(dá)已顯著下降，p16基因的檢測(cè)可以在一定程度上預(yù)測(cè)異型增生、腸上皮化生等疾病的癌變趨向，有助于胃癌的早期診斷和治療，也對(duì)胃癌預(yù)后的判斷有一定的幫助。

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