TPX2蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義

張惠球 沈浩賢 劉奕生

廣東省廣州市廣州醫(yī)學(xué)院形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心（510182）

TPX2蛋白是脊椎動(dòng)物一個(gè)新的紡錘體成分家族，作為紡錘體成分的一種微管相關(guān)蛋白，彌散分布在S期和G2期細(xì)胞的核心，在細(xì)胞有絲分裂紡錘體形成過程中發(fā)揮重要作用。TPX2在多種惡性腫瘤中存在過表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞中心體異常擴(kuò)增、異倍體形成以及細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。并與腫瘤的生物學(xué)行為有關(guān)。研究表明，TPX2表達(dá)受細(xì)胞周期的嚴(yán)格調(diào)控，阻斷其表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，有望成為腫瘤治療的候選靶點(diǎn)，TPX2與乳腺癌臨床病理特征間的關(guān)系國(guó)內(nèi)報(bào)道較少，本研究旨在檢測(cè)TPX2在乳腺癌中的表達(dá)情況，探討其與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

組織標(biāo)本為廣州醫(yī)學(xué)院形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心2006至2007年收集存檔蠟塊，共80例，均為女性；另選20 例正常乳腺組織作為對(duì)照組。

1.2 方法

采用免疫組織化學(xué) SP法，抗體TPX2為基因公司產(chǎn)品，所用SP試劑盒，DAB顯色劑均為福州邁新生物公司產(chǎn)品。組織經(jīng)10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋；4μm厚連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，檸檬酸鹽高溫、高壓修復(fù)抗原；實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，TPX2抗體稀釋液的濃度為1∶500，用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照；DAB 顯色，蘇木素復(fù)染，顯微鏡下觀察。

1.3 結(jié)果判斷

以癌細(xì)胞核呈現(xiàn)棕黃色顆粒為TPX2蛋白表達(dá)陽(yáng)性。判斷標(biāo)準(zhǔn)為隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野，觀察100個(gè)細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比，按陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比分成兩組；染色細(xì)胞比例＜10%為陰性；≥10%為陽(yáng)性。

1.4 結(jié)果統(tǒng)計(jì)

本研究?jī)蓸颖韭实谋容^經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)χ2檢驗(yàn)處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 TPX2蛋白在正常乳腺導(dǎo)管上皮和浸潤(rùn)性乳腺癌中的表達(dá)

TPX2蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要定位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核，少部分表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)。在80 例乳腺癌組織中，TPX2陽(yáng)性表達(dá)62 例，陽(yáng)性表達(dá)率為77.5%；在20例正常乳腺組織中全部陰性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為0.0%，TPX2蛋白在兩者之間的表達(dá)存在顯著差異（P＜0.01），說明TPX2蛋白的表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生有聯(lián)系。本實(shí)驗(yàn)在部分正常乳腺組織偶見少數(shù)基底上皮細(xì)胞和中等量的亞基底細(xì)胞顯示陽(yáng)性反應(yīng)，因表達(dá)的細(xì)胞數(shù)較少，達(dá)不到判定標(biāo)準(zhǔn)，故作為陰性結(jié)果處理。另本實(shí)驗(yàn)因未對(duì)乳腺癌組織進(jìn)行分類，故TPX2蛋白表達(dá)是否與乳腺癌組織類型以及乳腺癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后等因素相關(guān)還有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究（表1）。

表1 TPX2在正常乳腺組織和乳腺癌組織中的表達(dá)

3 討 論

乳腺癌是常見的惡性腫瘤，在我國(guó)其發(fā)病率也呈上升趨勢(shì)，特別是經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)已成為威脅婦女生命和健康的大敵[1]。早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療是改善乳腺癌預(yù)后的重要因素。目前除雌、孕激素受體、表皮生長(zhǎng)因子受體外，尚無對(duì)乳腺癌治療及預(yù)后有明確指導(dǎo)價(jià)值的分子標(biāo)記。化療是目前腫瘤治療的主要手段，但其毒性的非特異性和耐藥性的存在依然是困擾臨床醫(yī)生的主要問題[2]。因此，尋找乳腺癌早期診斷和治療的新的標(biāo)記分子具有非常重要的意義[3]。

TPX2是一種受細(xì)胞周期嚴(yán)格調(diào)控的核增殖相關(guān)蛋白，參與細(xì)胞有絲分裂的紡錘體微管功能[4]，圍繞TPX2與細(xì)胞周期、紡錘體微管及腫瘤增殖等方面的研究開展，這個(gè)新的增殖標(biāo)志物可能成為腫瘤細(xì)胞增殖的確切的評(píng)估指標(biāo)。隨著 TPX2單克隆抗體的成功制備，逐漸出現(xiàn)對(duì)腫瘤石蠟組織切片免疫組織化學(xué)方面的研究，其中包括在淋巴結(jié)陰性的乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和黑色素細(xì)胞病等方面的研究，結(jié)果均提示病變組織中的TPX2表達(dá)水平對(duì)疾病生物學(xué)行為有預(yù)測(cè)價(jià)值，并可作為形態(tài)學(xué)改變和獨(dú)立的預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)；而且，端粒酶活性與TPX2高表達(dá)的相關(guān)性提示了TPX2對(duì)于細(xì)胞永生化的貢獻(xiàn)。

目前國(guó)際上的相關(guān)研究多集中于對(duì)該蛋白基礎(chǔ)生理功能方面的探討，國(guó)內(nèi)有關(guān)TPX2蛋白的研究多集中與呼吸系統(tǒng)腫瘤的研究，而有關(guān)TPX2蛋白與乳腺癌的關(guān)系的研究國(guó)內(nèi)報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)乳腺癌組織和正常乳腺組織中的TPX2表達(dá)情況，結(jié)果表明TPX2蛋白于乳腺癌的發(fā)生存在相關(guān)性。TPX2在人體組織，特別是腫瘤中的表達(dá)提示其可作為腫瘤形態(tài)學(xué)改變和獨(dú)立的預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)，生化分析和體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)均表明TPX2過表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞中心體擴(kuò)增，出現(xiàn)明顯DNA異倍體及多倍體的形成，提示過量的TPX2可能抑制正常核分裂的完成及干擾TPX2激活的生理途徑，并且TPX2異常表達(dá)可能在癌變和惡性腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮作用。有學(xué)者采用免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和黑色素細(xì)胞瘤的石蠟包埋組織切片的研究結(jié)果提示，病變組織中的TPX2標(biāo)記指數(shù)對(duì)疾病生物學(xué)行為有預(yù)測(cè)價(jià)值，并可作為形態(tài)學(xué)改變和預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)[4]。

我們采用免疫組織化學(xué)的方法，對(duì)80例乳腺癌組織樣本進(jìn)行TPX2蛋白檢測(cè)分析，結(jié)果顯示，TPX2蛋白表達(dá)水平在腫瘤組織中明顯高于正常組織（乳腺癌組織陽(yáng)性表達(dá)率為77.5%；乳腺組織陽(yáng)性表達(dá)率為0），提示TPX2的高表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生密切相關(guān)。有報(bào)道指出，TPX2的表達(dá)與腫瘤的分期有關(guān)，而且隨著腫瘤分期越晚或組織病理學(xué)分級(jí)越差，TPX2的表達(dá)水平越高[4]。研究表明，TPX2與惡性腫瘤異倍體之間有明顯的相關(guān)性。因此，可以推斷TPX2的異常可能與惡性腫瘤的分級(jí)、臨床分期及預(yù)后有某種相關(guān)性[5]。本實(shí)驗(yàn)因未對(duì)乳腺癌組織進(jìn)行分類，故TPX2蛋白表達(dá)與乳腺癌組織類型以及乳腺癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后等因素是否相關(guān)還有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。

目前，TPX2蛋白已被認(rèn)為是一種新的癌基因，并越來越引起關(guān)注。其研究仍有許多空白。進(jìn)一步研究TPX2的表達(dá)和作用機(jī)制，不僅有助于腫瘤的早期診斷和預(yù)后判斷，而且有可能尋找到特異且實(shí)用的針對(duì)異常TPX2信號(hào)通路的治療方案，從而延緩多種腫瘤細(xì)胞的增生或轉(zhuǎn)移。相信隨著研究的深入，TPX2必將被徹底了解，為抗腫瘤治療提供新的思路[5]。

[1]陸巍,童漢興,周恒花,等.乳腺癌組織中期因子的表達(dá)及其臨床意義[J].中國(guó)臨床醫(yī)學(xué),2008,15(3):433-434.

[2]林海,侯敢,黃迪南.以TRAIL為靶點(diǎn)的腫瘤治療研究進(jìn)展[J].生命科學(xué),2007,19(5):492-495.

[3]張麗軍,譚丁桃.乳腺癌蛋白質(zhì)組研究進(jìn)展[J].生命科學(xué),2007,19(5):512-516.

[4]林冬梅,馬瑩,肖汀,等.TPX2在肺鱗狀細(xì)胞癌及其癌前病變中的表達(dá)和意義[J].中華病理學(xué)雜志,2006,35(9):540-544.

[5]張?jiān)葡? 李湘洲.TPX2在細(xì)胞有絲分裂中的作用及與腫瘤發(fā)生的關(guān)系[J].腫瘤研究與臨床,2007,19(12):861-864.