脂肪乳注射液細菌內毒素檢查法的可行性研究

2010-11-07 08:29:10李雪蘭黃新蘭趙愛華葉紅芳陳琴華

中國醫藥指南 2010年11期

李雪蘭黃新蘭* 翟艷趙愛華葉紅芳陳琴華

細菌內毒素檢查是藥品一個非常重要的安全指標，輸液導致熱原超標是輸液反應的主要原因[1]，近年來，世界各國越來越多地以細菌內毒素檢查法代替家兔熱原法檢查藥品和生物制品的致熱物質越來越普遍。脂肪乳注射液是靜脈營養的組成部分之一，為機體提供能量和必需脂肪酸，用于胃腸外營養補充能量及必需脂肪酸，預防和治療人體必需脂肪酸缺乏癥，也為經口服途徑不能維持和恢復正常必需脂肪水平的病人提供必需脂肪酸。《中國藥典》2005年版尚未收載該品種。為此，特對脂肪乳注射液進行了細菌內毒素的檢查。

1 儀器與試藥

2H-2型漩渦混合器（天津藥典標準儀器廠）；DC3A型干式恒溫器（南京三愛斯技術開發有限公司）；LC-233B1型高溫干燥箱。細菌內毒素標準品（中國藥品生物制品檢定所，批號：150601-200860，160EU/支）；細菌內毒素檢查用水（湛江安度斯生物制品有限公司，批號：0904100）；鱟試劑（TAL，湛江安度斯生物制品有限公司，λ=0.125EU/mL，批號：0901120），鱟試劑（湛江博康海洋生物有限公司，λ=0.125EU/mL，批號：0905311）脂肪乳注射液，（規格：100mL∶20g（大豆油）：1.2g卵磷脂，批號：09072301、09072302、09072401）揚子江藥業集團有限公司生產。

2 方法與結果

2.1 細菌內毒素限值L確定

公式L=K/M中L為細菌內毒素限值；K為按規定的給藥途徑，人用每千克體質量每小時最大可接受的內毒素劑量，注射劑為5EU/（kg?h）[1]；M為每小時內每千克體質量（人）的最大給藥劑量，或熱原檢查家兔按規定給藥途徑的給藥劑量，考慮到本品的熱原劑量為10mL/kg，因此可算得L=5/10=0.5EU/mL。

2.2 最大有效稀釋倍數的確定

根據公式MVD=cL/λ，L為供試品的細菌內毒素限值，c為供試品溶液的濃度，λ為鱟試劑的標示敏感度。2005年版《中國藥典》規定當L以EU/mL表示時，c為1.0mL/mL。L=0.5EU/mL，λ為0.125EU/mL，則MVD=4。

2.3 細菌內毒素檢查用水（BET）的質量考察

實驗中使用的細菌內毒素檢查用水（內毒素含量＜0.015EU/mL）經檢查，在37℃試管恒溫儀中放置4h未與鱟試劑產生凝聚反應，符合中國藥典規定[2]。

2.4 TAL敏感度復核

所用TAL按2005年版《中國藥典》規定進行敏感度復核。結果均在0.5～2λ，符合規定，故可用于細菌內毒素的檢查。

2.5 干擾預試驗

選用λ＝0.125EU/mL的TAL，以原液作為基準，用BET水對樣品進行倍比稀釋，得樣品的稀釋倍數系列（即原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16），以此系列為NC系列。PC系列：用原液和供試品各稀釋液將細菌內毒素標準品稀釋成與上述NC系列相同的稀釋倍數系列，但在稀釋過程中每稀釋倍數中都會有2λ內毒素。選擇兩個廠家的標示量為0.125EU/mL的TAL，使之分別與上述兩個系列反應，同時作陽性對照和陰性對照，結果見表1。結果表明：樣品溶液稀釋倍數在1∶2以下時不干擾試驗。

表1 供試品干擾試驗預試驗結果

2.6 干擾試驗

采用兩個廠家0.125EU/mL的TAL，用脂肪乳液注射液的1∶2稀釋液和BET水將同一細菌內毒素工作標準品分別制成2.0、1.0、0.5、0.25λ的系列濃度溶液，考察本品對細菌內毒素檢查法的干擾情況，結果見表2。Es值在0.5～2.0λ，且Et值在0.5Es～2.0 Es，說明此時樣品稀釋對細菌內毒素檢查無干擾。

2.7 樣品中細菌內毒素檢查

按2005年版《中國藥典（二部）》附錄規定的方法，對3批樣品按1∶4稀釋后，以λ為0.125EU/mL的TAL進行常規的細菌內毒素檢查，結果見表3。結果表明，3批脂肪乳注射液的細菌內毒素均＜0.25EU/mL，結果符合規定。

3 討論

本試驗采用不同廠家的TAL對3個批號樣品進行凝膠法細菌內毒素檢查，結果符合2005年版《中國藥典》附錄有關規定，排除了采用了不同廠家TAL對本試驗帶來的影響，使用λ為0.125 EU/mL的鱟試劑進行細菌內毒素檢查是可行的，確證了細菌內毒素檢查法完全可以代替傳統的兔熱原法用于該制劑的質量控制。據此提出脂肪乳注射液的細菌內毒素檢查參考此標準：取本品，依照《中國藥典》2005年版二部附錄XIE檢查，每1ml中含有內毒素的量應小于0.5EU/mL[3]。