烏藥不同炮制品中烏藥內(nèi)酯含量測定

左美玲 歐陽榮* 皮曉華

1 湖南省長沙市第四人民醫(yī)院（410006）

2 湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院（410007）

烏藥始載于《本草拾遺》，《中國藥典》一部各版均有收載。其來源為樟科植物烏藥Lindera aggregata（Sims）Kosterm.干燥塊根[1]。湖南是烏藥的道地產(chǎn)區(qū)，亦是全國的主產(chǎn)區(qū)。其炮制方法古代文獻載有十多種，現(xiàn)代典籍載有醋制、鹽潤、麩炒、酒制、酒潤后麩炒[2]，但均論述不詳?，F(xiàn)代文獻也未見炮制品的系統(tǒng)研究報道。為了探討烏藥不同炮制品中主要化學(xué)成分含量差異，筆者對烏藥不同炮制品中烏藥內(nèi)酯進行了含量測定，現(xiàn)將實驗報道如下。

1 儀器與試藥

儀器：高效液相色譜儀：Agilent1100系列四元梯度泵、Agilent1100手動進樣器、 Agilent1100系列二極管陣列檢測器、Agilent1100工作站（Agilent公司）；超聲波清洗器（昆山市淀山湖檢測儀器廠）、萬分之一電子分析天平（Adventurer）。

甲醇（色譜純，天津市密歐化學(xué)試劑有限公司，20080129）；乙腈（色譜純，天津市密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心，20051012）；其余試劑均為分析純，水為注射用水。

對照品：烏藥內(nèi)酯對照品（批號08031505，供含量測定用）購自上海順勃生物工程技術(shù)（云南）公司。

烏藥藥材采于湖南省邵東以及安徽等地，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥檢室鑒定為樟科植物烏藥Lindera strychnifolia（Sieb．ef Zucc．）Vill．的干燥塊根。

2 炮制方法

烏藥片：取原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，浸至四五成干，潤透，橫切圓形薄片，干燥即成。

醋炒烏藥：取烏藥片，用陳醋拌勻，稍悶，置鍋內(nèi)文火炒干，取出攤涼即可。

麩炒烏藥：將炒鍋燒熱，撒上麥麩，待冒煙時投入烏藥片，炒至黃色時，取出，篩去麥麩，放涼即成。

鹽炒烏藥：取烏藥片，用鹽水拌勻，稍悶，置鍋內(nèi)文火炒干，取出放涼即成[2]。

3 含量測定[3]

3.1 色譜條件

色譜柱為Kromasil C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相：甲醇-乙腈-水（35∶25∶40，v/v）；檢測波長：235nm；柱溫：40 ℃；流速：1mL/min。

3.2 對照品的制備

精密稱取烏藥內(nèi)酯適量，置25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得混合對照品溶液（每1mL中含烏藥內(nèi)酯28μg）。

3.3 樣品制備

取各供試品，將其粉碎成細分，取1g，精密稱定，置50mL錐形瓶中，加甲醇50mL，稱重，超聲15min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，用0.45μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，備用。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別精密吸取混合對照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、20.0μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積，以峰面積值Y為縱坐標(biāo)，以對照品的進樣質(zhì)量X（mg）為橫坐標(biāo)進行線性回歸，烏藥內(nèi)酯的回歸方程為：Y=1316.7X-4.6615，r=0.9992；線性范圍0.06～0.56μg。

3.5 精密度試驗

精密吸取混合對照品溶液10μL，連續(xù)進樣6次，測定烏藥內(nèi)酯的峰面積，RSD（%）為1.49%。表明儀器性能良好。

3.6 穩(wěn)定性試驗

分別精密吸取同一供試品溶液10μL，于0、1、2、4、8、24h進樣，測定烏藥內(nèi)酯的峰面積，RSD（%）1.89%。結(jié)果表明，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7 重復(fù)性試驗

分別取同一批號樣品粉末0.5g 6份，精密稱定，按3.3項下方法制備供試品溶液，測定含量，平均含量為3.60mg/g、RSD為1.87%。表明本方法重復(fù)性良好。

3.8 加樣回收率試驗

精密稱定已知含量的樣品粉末（含量為3.595mg/g）約0.5g，共6份，置于50mL容量瓶中，分別精密加入一定量的對照品，加甲醇50mL，精密稱重，按3.3項下操作，分別制得供試液，以上述色譜條件測定含量，計算加樣回收率，平均回收率為99.13%、RSD為1.22%。結(jié)果見表1。

表1 烏藥內(nèi)酯回收率實驗結(jié)果（n=6）

3.9 樣品的測定

取烏藥不同炮制品粗粉各1g，按3.3項下方法制得供試品試液，以上述色譜條件測定。測定結(jié)果見表2。

表2 烏藥供試品的含量測定

4 討 論

4.1 實驗結(jié)果顯示，烏藥內(nèi)酯的含量從高到低依次為醋炒烏藥片＞烏藥片＞鹽炒烏藥片＞麩炒烏藥片。以醋制品中烏藥內(nèi)酯含量最高，其原理有待進一步探討。

4.2 筆者考察了溫度對烏藥內(nèi)酯的影響，結(jié)果表明烏藥內(nèi)酯的熱穩(wěn)定性較好。本實驗方法色譜條件柱效高，分離度大，精密度高，重現(xiàn)性好。建議下版中國藥典收載烏藥不同炮制品，并制訂其相應(yīng)的含量測定方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:53.

[2]王孝濤,葉定江.歷代中藥炮制法匯典(古代)[M]. 南昌:江西科技出版社,1986:111.

[3]程顯隆,魏鋒,馮玉飛,等.1ip-HPLC法測定烏藥中烏藥內(nèi)酯和烏藥內(nèi)酯的含量[J].藥物分析雜志,2003,23(3):225-227.