OPN和 CD44V6在乳腺浸潤性導管癌中的表達及其相關性

王 欣,唐 旭,王 新

(佳木斯大學附屬第一醫院腫瘤外科,黑龍江 佳木斯 154003)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一,近年來發病率逐年上升,據2010年 1月《中國乳腺疾病調查報告》,報告顯示：我國城市地區乳腺癌的死亡率增長了38.91%,乳腺癌已成為對婦女健康威脅最大的疾病,發病率位居大城市女性腫瘤的第一位,積極采取有效措施以控制其發生發展應是當務之急。乳腺癌的發生發展是多基因參與,經過多步驟、多階段的復雜生物學過程[1],因此研究乳腺癌相關的特異性標志物和治療靶點,對于了解乳腺癌的發生發展及轉歸有重要意義。本實驗通過用免疫組化 SP法檢測乳腺癌組織中 OPN、CD44V6的表達情況。探討兩者在乳腺癌中的發生、發展中的作用及相互關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集佳木斯大學第一附屬醫院腫瘤外科2009-03～2010-01行手術治療的乳腺癌患者64例,均為女性。根據2002年 AJCC制定的 TNM分期標準：I期 18例,Ⅱ 期 21例,Ⅲ～ IV期 25例。有淋巴結轉移38例,無淋巴結轉移 24例。所有患者術前均未接受化療、放療、生物治療及內分泌治療。

1.2 主要試劑

即用型鼠抗人 OPN單克隆抗體、即用型鼠抗人CD44V6單克隆抗體均購自北京中山金橋生物技術有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 乳腺癌標本經10%福爾馬林液固定,常規石蠟包埋。4 μm厚連續切片,供常規 HE染色和免疫組化染色。參照檢測試劑盒說明書進行。每批染色均用已知乳腺癌陽性片做陽性對照,并用 PBS取代一抗做陰性對照。

1.3.2 結果判定標準：細胞染成棕色至棕黃色者為陽性,OPN陽性著色定位于胞質或胞膜,CD44v6陽性著色主要定位于胞膜。取表達最強的部分,按著色程度分為：基本未著色,染色與背景相似者為0分;著色淺,略高于背景者為1分;中度著色,明顯高于背景者為 2分;強染,著色深棕色者為 3分。陽性細胞數 ＜10%為0分,10%～ 25%為 l分,26%～ 50%為 2分 ,51%～ 75%為 3分,＞ 75%為 4分。兩項相加后 0～ 1分為陰性(-),2～ 3分為陽性(+ ),4～ 5分為陽性(++ ),6～ 7分為陽性(+++)。

1.4 統計學處理

采用 SPSS13.0統計學軟件分析,陽性率之間用卡方檢驗。以 P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌組織不同分期間 OPN和 CD44V6的表達

OPN的表達定位于胞漿,CD44V6的表達定位于胞膜和(或)胞漿。不同分期間表達結果見表1。

表1 乳腺癌組織不同分期間 OPN和 CD44V6表達的免疫組化結果

2.2 乳腺癌組織中 OPN和 CD44V6的表達與腋窩淋巴結轉移的關系結果

見表2。

表2 OPN和 CD44V6在乳腺癌組織中的表達與腋窩琳巴結轉移的關系

2.3 OPN和 CD44V6在乳腺癌中表達的關系

OPN表達陽性的38例乳腺癌組織中 ,CD44V6表達陽性32例;OPN表達陰性的28例乳腺癌組織中,CD44V6表達陽性6例。結果顯示在乳腺癌組織中 OPN、CD44V6表達之間存在顯著正相關 (P＜0.05)。OPN、CD44V 6表達與淋巴結轉移、TNM分期顯著相關 (P＜0.05)。

3 討論

關于癌細胞侵襲過程,Liotta等通過生化研究和超微結構觀察 ,提出腫瘤侵襲的三步假說[2]。第一步 ,腫瘤與基底膜發生黏附。基底膜是普遍存在于上皮下、內皮下、和間皮下等的一種連續的細胞外基質成分構成的超微結構,主要含層連蛋白(LN)和 IV型膠原。第二步,局部蛋白質水解導致基底膜降解、斷裂,有利于瘤細胞穿出。第三步,瘤細胞在趨化因子作用下,瘤細胞隨意運動和定向運動,侵犯周圍組織間隙。OPN人的骨橋蛋白 (OPN)基因位于4q13上,編碼產物為一種415000的酸性糖蛋白,富含精氨酸的序列能與羥磷灰石結晶結合參與骨鹽沉積。OPN蛋白中含有 RGD(Arg-Gly-Asp)基序,這一基序在不同物種的 OPN中都普遍存在。它對于 OPN的黏附起著重要作用。OPN在人許多腫瘤中過量表達[3]。目前已經在整聯蛋白是 OPN的受體,由 α和 β兩種亞基組成 ,多種乳癌細胞株可表達 α 1- α 5(β 1)和 α v(β 3)整聯蛋白。此外有報道 OPN可與 CD44相互作用,對 CD44依賴的化學趨化性敏感性增高。本實驗研究顯示 OPN的表達與癌組織的分期以及腋窩淋巴結轉移狀況有關,I期乳腺癌 OPN的陽性率 (38.9%)顯著低于 II、III～ IV期乳腺癌分別為(66.7%和72.0%)(P＜0.05);腋窩淋巴結有轉移者 OPN的陽性率(65.0%)顯著高于無淋巴結轉移患者 (33.3%)(P＜0.05)。從而提示 OPN的表達與乳腺癌的侵襲轉移密切相關。CD44基因是編碼分布極為廣泛的細胞表面跨膜蛋白,它定位于11號染色體短臂上,主要參與細胞-細胞、細胞與基質之間特異性粘附過程。CD44基因有不含 V區外顯子的轉錄子 CD44S和含 V區外顯子的轉錄子 CD44V;后者因其 V區外顯子變異拼接方式不同而產生許多不同排列的CD44拼接變異體轉錄子[4]。CD44V6是最早被發現與腫瘤轉移有關的 CD44變異體,它與腫瘤侵襲、轉移有關,但有關CD44V6的表達與乳腺癌轉移的相關性尚未明確[5]。而臨床病理研究表明,非轉移性乳腺癌中 CD44S呈低表達,而在轉移性乳腺癌中 CD44V6呈過表達,認為 CD44V6可能是乳腺癌轉移的重要因素[6]。

本實驗研究發現,OPN與 CD44V6的表達有顯著相關性,提示 CD44V 6水平升高可能上調 OPN水平,OPN水平升高也可能上調 CD44V 6水平,兩者可能有著互相促進作用。與 Ito等[7]的研究結果相符合。Gao等[8]研究認為,CD44v6的過表達是由 OPN通過與整合素結合,促進腫瘤的發展和轉移。因此,通過 OPN和 CD44V6各自的作用以及相互間促進作用,最終促使腫瘤發展和遠處轉移。

綜上所述,OPN與 CD44V 6的表達與乳腺癌的生物學行為有關,兩者存在一定的協同性,有望成為預測乳腺癌侵襲及淋巴結轉移的重要標志。

[1]孫慧.乳腺癌侵襲和轉移相關基因的研究現狀 [J].國外醫學.腫瘤學分冊,2004.12(31)：916

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[6]李燕平,徐惠綿,張斌,等.CD44V6表達與乳腺癌臨床病理因素及預后的關系 [J].中國腫瘤臨床與康復,2001,8(4)：5-6

[7]Ito T,Hashimoto Y,Tanaka E,et al.An inducible shorthairpinRN A vector against osteopontin reduces metastatic potential of human esophageal squamous cell carcinomain vitro andin vivo[J].Clin Cancer Res,2006,12(4)：1308-1316

[8]Gao CJ,Guo HT,Downey L,el a1.Osteopontin- dependent CD44v 6 expression and cell adhension in HepG2 cells[J].Carcinogenesis,2003,124(12)：1871-1878