蛭龍活血通瘀膠囊對大鼠腎性高血壓 IL-6、CRP的影響

尹思源 郭建敏 席新龍 廖慧玲 瀘州醫學院中西醫結合學院 (瀘州 646000)

據世界衛生組織預測,至 2020年非傳染性疾病將占我國疾病死因的 79%,其中心血管疾病將占首位。高血壓是常見的心血管疾病之一,是全球范圍內的重大公共衛生問題。近年來,隨著分子生物學的快速發展,對高血壓病的研究越來越深入,認為炎癥因子與高血壓病的發生、發展密切相關[1]。本實驗通過使用蛭龍活血通瘀膠囊治療腎性高血壓大鼠,觀察炎癥因子IL-6和 CRP在治療前后的變化,旨在探討蛭龍活血通瘀膠囊的降壓機制,為進一步闡明高血壓的發展與炎性反應的關系提供參考。

1 材料與方法 1.1 實驗動物 2月齡健康 SD大鼠80只,雄性,體重(200±30)g,由華西醫學動物中心提供,均為一級合格動物,合格證號為:080415。

1.2 實驗藥物 蛭龍活血通瘀膠囊主要由水蛭、地龍、黃芪、大血藤、桂枝等組成,每粒 0.4g(相當于生藥 2.6g),由瀘州醫學院附屬中醫醫院制劑室提供。臨用時用溫開水配成80mg/m L、 160mg/m L、 320mg/m L的混懸液。批號:20070528。

1.3 腎性高血壓模型建立 取 SD雄性大鼠 80只,適應環境飼養 1周后,采用 ZH-HX-Z無創血壓測量系統測每只大鼠的基礎血壓 ,禁食不飲水 24h之后,留 10只大鼠作為正常對照組,另 70只大鼠在室溫下進行手術,具體步驟:2%巴比妥鈉45mg/kg經腹腔注射麻醉大鼠,仰臥固定于手術臺上,腹部備皮,常規消毒后,蓋上孔巾沿腹正中線切開,打開腹腔,小心鈍性分離出左腎動脈,然后穿入無菌的線絲,把直徑為 0.25mm的針灸針與腎動脈血管長軸平行放置,用無菌線絲扎緊腎動脈和針灸針然后抽出針灸針,結果造成腎動脈狹窄,對側腎臟和動脈不觸及,然后逐層關閉腹腔,術后 3d每天腹腔注射青霉素3×104U/d,預防感染,共 3d;假手術組方法同模型組 ,但只分離左腎動脈,不結扎。根據腎性高血壓模型成功的判斷標準,于2周后測量大鼠血壓,每次 3次求其平均值,以收縮壓高于基礎血壓 20mm Hg,且收縮壓高于 115mmHg者被認為造模成功[2]。

1.4 動物分組與給藥 選取 2月齡健康雄性 SD大鼠 80只,隨機分為正常組 10只與手術組 70只,手術組采用結扎左側腎動脈的方法建立腎性高血壓大鼠模型,其中假手術組 10只,只分離左側腎動脈不結扎,兩周后采用尾套法測定大鼠血壓,將手術后符合高血壓標準的大鼠 40只隨機分為四組 ,即模型組,高劑量組,中劑量組,低劑量組,每組 10只。假手術組與正常對照組每組 10只。普通飼養 4周后,蛭龍活血通瘀膠囊組根據高、中、低劑量分別給予 1.6g/kg、0.8g/kg、0.4g/kg灌胃,1次 /d,共 8周。模型組、假手術組和正常對照組大鼠給予等容積的生理鹽水。每周稱大鼠體重 1次,根據體重隨時調整給藥量。

1.5 觀察指標 1.5.1 大鼠血壓的測定:用小型電吹風適當的給大鼠尾部加熱,以擴張局部血管,加熱程度視大鼠尾巴皮膚變為微紅,采用 ZH-HX-Z無創血壓測量系統 (安徽淮北正華生物儀器設備有限公司)測每只大鼠的血壓,每次測 3次求其平均值作為該樣本的血壓。

1.5.2 血清 IL-6及 CRP的檢測:最后一次灌胃結束后1h,稱體重后,麻醉大鼠,開胸,下腔靜脈取血約 3～5m L,靜置4h,以 1500r/m in離心 10min,制備血清 ,放置在-70℃冰箱中保存備用。1個月內采用 ELISA法測定血清 IL-6含量,試劑盒購于美國 ADL公司。采用放射免疫法測定血清 CRP含量,試劑盒購于中國人民解放軍總醫院。

2 結 果 2.1 對大鼠腎性高血壓血壓的影響 見表1。各組大鼠的基礎血壓之間無明顯的統計學意義(P＞0.05)。手術后 2周血壓,模型組、高劑量組、中劑量組及低劑量組血壓較正常組均明顯偏高(P＜0.05),且模型組和各用藥組血壓均超過 115mm Hg,與基礎血壓的差值均大于 20mm Hg,根據判斷標準[2],說明用藥組及模型組的腎性高血壓造模成功。假手術組較正常組無明顯變化(P＞0.05),表明手術對血壓無明顯的影響。

治療 8周后血壓,與模型組比較,高劑量組、中劑量組血壓較模型組明顯降低有統計學意義(P＜0.05),低劑量組較模型組降低不明顯無統計學意義(P＞0.05);高劑量組、中劑量組與低劑量組比較有明顯的統計學意義(P＜0.05),高劑量組與中劑量組之間比較無明顯的統計學意義(P＞0.05)。

表1 各組大鼠收縮壓的變化(mm Hg,±s)

表1 各組大鼠收縮壓的變化(mm Hg,±s)

注:△與正常組比較 P＜0.05;▲與模型組比較 P＜0.05;◇與假手術組比較 P＜0.05;◆與低劑量組比較 P＜0.05。

組 別n劑量(g/kg)基礎血壓(mm Hg)手術后兩周血壓(mm Hg)治療八周后血壓(mm Hg)正 常組10--91.8± 3.3589.9± 2.5990± 2.92假手術組10--93.4± 2.6192.4± 4.6292.4± 3.44模型組10--94.1±6.28130.4±8.72△142.7±8.67△◇高劑量組101.694.6± 7.17129± 7.35△102± 6.28△▲◇◆中劑量組100.890.0± 3.71125± 7.23△102± 5.41△▲◇◆低劑量組100.494.0± 4.52128.2± 9.59△138± 5.63△◇

表2 各組大鼠血清 CRP、IL-6水平的變化±s)

表2 各組大鼠血清 CRP、IL-6水平的變化±s)

注:△與正常組比較 P＜0.05;▲與模型組比較 P＜0.05;◇與假手術組比較 P＜0.05;◆與低劑量比較 P＜0.05。

組 別n劑量(g/Kg)CRP(ng/m l)IL-6(ng/m l)正常組10-4.12± 0.091.03±0.10假手術組10-4.23± 0.071.25±0.09模型組10-7.80±0.68△◇8.53±2.00△◇高劑量組10 1.65.92±0.29▲△◇◆4.26± 0.63▲△◇◆中劑量組10 0.86.12±0.18▲△◇◆4.50± 0.66▲△◇◆低劑量組10 0.47.68± 0.96▲△7.36± 0.35△▲

2.2 對大鼠腎性高血壓 IL-6和 CRP的影響 見表2。模型組與正常組、假手術組比較 ,血清中 IL-6、CRP濃度均明顯增高有統計學意義(P＜0.05),高劑量組、中劑量組及低劑量組與模型組比較,高劑量組與中劑量組明顯降低有統計學意義(P＜0.05),低劑量組降低不明顯無統計學意義 (P＞0.05),高劑量組、中劑量組與低劑量組比較降低有統計學意義(P＜0.05),高劑量組與中劑量組之間比較無明顯的統計學意義(P＞0.05)。

3 討 論 高血壓的發病機制及病理過程至今尚未完全闡明,近年來學術界認為內皮細胞功能異常在其發病中起著重要的作用。血管壁增厚和血管內皮細胞受損造成血管硬化和周圍血管阻力增加,是高血壓發生、發展的重要原因。細胞因子是機體免疫細胞和非免疫細胞合成的分泌調節細胞生理功能的小分子多肽,具有高效性、多向性、內生性等特點。包括白介素(IL)、C反應蛋白(CRP)等。據報道,細胞因子在內皮細胞增殖調控中起著重要的作用,他們可能參與了高血壓的發生和發展的過程。

IL-6是由活化的 T細胞、血管內皮細胞、血管平滑肌細胞等產生的,是一種調節免疫應答、急性期反應和造血作用的多肽遞質。Cymerys等[3]認為高血壓存在急性期反應,引起高血壓急性期反應最重要的是 IL-6。IL-6能夠誘導纖維蛋白原啟動凝血因子 ,使血管炎癥部位的纖維母細胞增生,膠原沉積;它還有較強的血小板活化因子的特性,通過激活血小板促進血小板聚集,導致血管內皮細胞損害。IL-6和 TNF顯著增加高血壓患者紅細胞內 Ca2+依賴的 K+外流和細胞膜對 Ca2+通透性,導致Ca2+內流增加,平滑肌收縮,血壓升高。薛冰等[4]的研究表明高血壓患者血管內皮的炎癥反應可以產生大量的 TNF和血小板衍化生長因子,TN F和 PDGF可誘導成纖維細胞、單核細胞產生 IL-6,而 IL-6又能促使平滑肌細胞和成纖維細胞增殖,導致產生大量的 PDGF,最終導致周圍血管阻力增高,引起高血壓。由此可見,IL-6可通過多種途徑參與高血壓病的發生發展。CRP是一種炎癥反應時相蛋白,血液中的 CRP主要由肝臟合成,IL-1、IL-6和 TN F-α能刺激肝臟和上皮細胞合成和分泌包括 CRP在內的急性時相蛋白 ,其中 IL-6是刺激 CRP產生的最主要的細胞因子。Sung等[5]認為 CRP是高血壓發生與發展的一種獨立危險因素。 CRP損傷血管內皮細胞,內皮細胞釋放的NO及前列腺素減少,使其血管舒張、抗血栓、抗病原的特性喪失,這些喪失在高血壓的病理過程中起重要作用[6]。炎癥介質可以激活內皮細胞、巨噬細胞和多形核白細胞釋放內皮素-1及內皮素-1免疫樣激活物 ,使血管收縮,血壓升高[7]。高濃度的血清 CRP可以促進血管內皮細胞增生、遷移、動脈內膜增厚,促進動脈粥樣硬化的形成發展,導致血管重構阻力增加[8]。高濃度CRP直接參與局部和全身炎癥反應損傷血管內皮細胞,使血管對內皮依賴性舒血管物質的反應性減弱 ,血管阻力增加[9]。

祖國醫學無“高血壓”病名,根據高血壓病患者臨床多見頭痛、眩暈等癥狀,把高血壓歸屬于“頭痛”“眩暈”等證范疇。歷代醫家均認為瘀血在高血壓病中作用的重要性,病認為瘀血貫穿在整個病變過程中。我們結合臨床和大量的文獻研究,認為“脈絡瘀阻、血行郁滯”在高血壓病的發病過程中占有重要的作用,貫穿于高血壓病全過程。程志清等[10]報道在高血壓病的治療中運用活血化瘀法有如下重要作用:通過改善血液粘稠度與微循環血液的濃、粘、聚、凝狀態,使外周阻力減小,血流動力學平衡得以正常而使血壓下降;改善血管內皮功能,調節血管緊張素II與一氧化氮水平來達到擴張血管、防止內膜增生降低血壓的目的。本研究中蛭龍活血通瘀膠囊是由水蛭、黃芪、地龍、大血藤等組成。針對瘀血這一基本病機,以水蛭活血化瘀,黃芪益氣為君,以地龍活血化瘀、通行經絡,大血藤通絡、祛風,佐以溫藥桂枝,溫通經脈,體現“血得溫則行,得寒則凝”之意,諸藥同用,共奏活血、益氣、通絡之功。現代藥理學研究認為:水蛭具有抗凝,抗血栓,降低血壓、血脂以及改善血流動力學的作用,以及降低炎性細胞因子 TNF-α及 IL-1β的作用;黃芪具有抗血小板聚集,降低血壓以及降低高血壓患者血清中 hs-CRP、TNF-α、IL-1β及 IL-6水平的作用;地龍具有抗血栓、溶血栓作用,且具有降壓作用;大血藤具有抗凝作用,抗菌消炎作用。本實驗研究發現,蛭龍活血通瘀膠囊能降低大鼠腎性高血壓血壓及IL-6和CRP水平,從而有效的防止血管內皮細胞受損,阻止血液的高凝狀態的發生,這可能是蛭龍活血通瘀膠囊防治高血壓病的機制之一,其可能與中藥的多靶點、多層次、多途徑作用有關,其具體的機制有待進一步研究。

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