Fbgβ455基因多態性與CRP協同作用對動脈粥樣硬化的影響

孫曉盈,王 海,高 申,謝 風

(吉林大學中日聯誼醫院,吉林長春 130033)

Fbgβ455基因多態性與CRP協同作用對動脈粥樣硬化的影響

孫曉盈,王 海,高 申,謝 風*

(吉林大學中日聯誼醫院,吉林長春 130033)

目的研究血漿纖維蛋白原Fbgβ455基因多態性與此反應蛋白CRP的協同作用對動脈粥樣硬化的影響。方法采用限制性長度多態性聚合酶鏈反應檢測血漿Fbgβ455基因態性及免疫比濁法檢測CRP。結果心肌梗塞組與冠心病組患者外周血基因組DNAFbgβ455多態性分布G/G,G/A,A/A具有顯著性差異(P＜0.05);心肌梗塞組與冠心病組中血漿高敏CRP與Fbgβ455多態性分布無顯著相關性(P＞0.05)。結論血漿Fbgβ455等位基因型G/A,A/A可能是急性心肌梗塞發病的遺傳性危險因素,Fbgβ455與CRP在動脈硬化的發生過程中無協同作用。

纖維蛋白原;C反應蛋白;限制性長度聚合酶鏈反應;基因多態性

(Chin J Lab Diagn,2010,14:1449)

目前研究已證實在急性心肌梗塞或腦梗塞的患者中血漿纖維蛋白原及C反應蛋白的濃度顯著高于正常水平。但從基因水平上分析冠狀動脈粥樣硬化的發生時二者的基因多態性是否具有協同作用,

目前尚無報道,本文作以下研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗對象 心肌梗塞血清標本收集2006年10月-2007年8月吉林大學中日聯誼醫院心內科,急診科等72例,其中男39例,平均年齡58歲;女33例,平均年齡62歲。診斷符合WHO心肌梗塞的診斷標準。對照組冠心病血清標本收集2006年10月-2007年2月吉林大學中日聯誼醫院心內科78例,其中男43例,平均年齡61歲,女35例,平均年齡65歲。診斷符合WHO冠心病的診斷標準,部分經冠狀動脈造影證實。

1.1.2 主要試劑 全血基因組DNA提取試劑盒、PCR擴增試劑盒及HaeⅢ限制性內切酶(大連寶生物工程有限公司、引物(上海生工生物工程技術服務有限公司)

1.2 方法 采用分子生物學技術——限制性長度多態性聚合酶鏈反應。

1.2.1 標本收集及處理

取靜脈血(2%EDTA抗凝)2 ml用于提取白細胞做基因檢測,枸櫞酸鈉抗凝血7 ml用于檢測血漿Fbg。

1.2.2 外周血基因組DNA提取

1.2.3 PCR擴增DNA

Fbg 引 物 設 計:上 游:5′-GGAATGCAATCTCTGCTACCT-3′

下游 :5′-TGTCGTTGACACCTTGGGAC-3′

1.2.4 HaeⅢ限制性內切酶酶切

1.2.5 1%瓊脂糖凝膠電泳

1.3 統計學分析 采用統計軟件SPSS11.5分析,其中兩組(心肌梗死組與對照組)Fbgβ455G/A基因頻率及等位基因頻率分布進行 χ2檢驗。

2 結果

2.1 Fbgβ455G/A多態性分布圖

圖1 Fbgβ455G/A多態性分布

圖1中顯示從左向右第一條帶是異常突變雜合子G/A型;第二條帶為正常基因G/G型;第三條帶為異常突變純合子A/A型;第四條帶為未經酶切的Fbgβ455基因 ;M 為 maker。

2.2 心肌梗塞組與冠心病組患者外周血基因組DNAFbgβ455多態性分布

心肌梗塞組與冠心病組患者外周血基因組DNAFbgβ455多態性分布G/G,G/A,A/A具有顯著性差異(P＜0.05),兩組G和A等位基因頻率均有顯著性差異,P＜0.05,見表1。

2.3 心肌梗塞組與冠心病組Fbgβ455多態性分布與血漿高敏CRP濃度的關系

心肌梗塞組與冠心病組中血漿高敏CRP與Fbgβ455多態性分布無顯著相關性(P＞0.05),且心肌梗死患者血漿高敏CRP濃度明顯高于對照組(P＜0.005)。(見表2)

表2 心肌梗塞組與冠心病組Fbgβ455多態性分布與血漿高敏CRP濃度的關系

3 討論

目前發現β纖維蛋白原455G/A基因多態性表現為455G/G,455G/A,455A/A三種基因型,且G/A或A/A基因型的個體血漿纖維蛋白原水平明顯高于G/G,A/A和G/A基因型個體的缺血性心腦血管疾病發生率明顯高于G/G型個體[1]。長期以來CRP被當作感染與炎癥的經典指標[2]。細胞因子尤其是由肝細胞和激活的巨噬細胞分泌的白細胞介素-6(IL-6),在斑塊破裂和血栓形成中也起著重要的作用,白細胞介素-6可誘導CRP和纖維蛋白原的分泌。在心肌梗塞等動脈硬化時刺激肝細胞刺激因子白細胞介素-6(IL-6)產生增多,而IL-6主要促進肝細胞合成分泌Fbg,導致血漿Fbg水平的增高[3]。CRP是Fbg的一種趨化因子,Fbg又使巨噬細胞粘附到內皮表面從而移植到內膜。CRP趨化單核細胞,單核細胞誘導組織因子的產生而促進凝血過程。又因為Fbgβ-455G/A位點鄰近IL-6反應區域,與該位點連鎖的基因位點Fbgβ-148也位于IL-6反應區域附近,它的變異可通過IL-6介導使Fbg表達增加。從理論上講二者在動脈硬化發生時應具有協同作用,但本實驗中心肌梗塞組Fbgβ-455多態性分布與CRP無相關性,原因一方面可能是血清CRP水平受自身CRP基因多態性調控,且IL-6基因變異也會影響CRP釋放入血;另一方面,標本量較少也是影響本實驗結果的重要原因。以上問題還有待于今后進一步探討。

[1]Dong QL,Zhang C.Association between the polymorphism of beta-fibrinogen gene-455G/A and ischemic stroke[J].Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi,2004,21(3):274.

[2]Kim YJ,Shin YO,Bae JS,et al.Beneficial effects of cardiac rehabilitation and exercise after percutaneous coronary intervention on hsCRP and inflammatory cytokines in CAD patients[J].European journal of physiology,2008,455(6):1081.

[3]Dorsch MF,Barrett JA,Lawrance R A,et al.Premature coronary artery disease shows no evidence of linkage to loci encoding for tissue inhibitors of matrix metallopro2 teinases[J].J Hum Genet,2003,48(10):508.

The relationship between fibrinogen,polymorphismβ-455G/A,hs-CRP and artherosclerosis

SUN Xiao-ying,WANG Hai,GAO Shen,et al.(China-Japan Union Hospital of Jilin University,Changchun130033,China)

ObjectiveTo investigate the relationship between gene frequency 、allele frequency of Fgβ455G/A and pathological change degree of myocardial infarction(MI)、blood plasma Fg、CRP.MethodsAdopt molecular biology restricted length polymorphism reaction and observe results by agarose gelelectro There is no significant difference between CRP and polymorphism of DNAFgβ455in bothgroupMI andCHD(P＞0.05)phoresis under extreme ultraviolet lamp.Test the level of Fg and CRP by coagulogram analysator ACL900 and beckman autoanalyser.ResultsThere is significant difference on polymorphism of DNAFgβ455 G/G,G/A,A/A、allele frequency of G and A between two groups(P＜0.05).ConclusionAllelotype G/A,A/A of Fgβ455 is probably heritage risk factor of AMI;The level of Fg is affected by polymorphism of Fgβ455;3 the high sensitive CRP is not affected by polymorphism of Fgβ455.

fibrinogen;C reactive protein;Restricted length polymorphism reaction;polymorphism of gene

R541.4

A

1007-4287(2010)09-1449-02

吉林省科委資助項目

*通訊作者

2009-12-02)