ENA檢測(cè)對(duì)診斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡的應(yīng)用及臨床價(jià)值

羅云鵬，譚立明

(1、江西省皮膚病專科醫(yī)院真菌科 330001；2、南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 南昌 330006)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種以免疫調(diào)節(jié)異常，表達(dá)多種自身抗體、形成多種免疫復(fù)合物并導(dǎo)致組織病理損傷為特征的自身免疫性疾病[1]。SLE診斷主要依靠臨床表現(xiàn)，而在疾病早期臨床表現(xiàn)較為明顯，臨床需要能早期診斷的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，而LE細(xì)胞的檢查恰是在患者早期就診、無藥物影響的情況下進(jìn)行的檢測(cè)，陽性率極高，為達(dá)到早期診斷和治療的目的。這對(duì)SLE的早期診斷提供了有利的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)、爭(zhēng)取到治療的有利時(shí)間，同時(shí)聯(lián)合可提取性核抗原(ENA)多種自身抗體的檢測(cè)，能夠更好地觀察病情發(fā)展，結(jié)合臨床表現(xiàn)為指導(dǎo)治療起到有力的輔助作用[2]。隨著免疫學(xué)的發(fā)展及對(duì)SLE研究的進(jìn)一步深人，陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了SLE患者血清中含有多種標(biāo)志性抗體[3]。因此早期檢測(cè)患者體內(nèi)的相應(yīng)抗體，對(duì)SLE等自身免疫性疾病的診斷十分重要。本文對(duì)90例SLE患者ENA檢測(cè)，有助于這些問題的解決，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告分析如下。

1 材料與方法

1.1 材料來源 90例SLE患者均來自南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院住院及門診患者，時(shí)間為2008年7月～2010年 2月，男性24例，女性 66例，年齡為7～73歲，平均年齡為42歲；所有患者皆符合風(fēng)濕病學(xué)會(huì)制定的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。對(duì)照組為南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院健康體檢者40例，其中男性10例，女性30例，年齡為17～61歲，平均年齡為37歲。

1.2 標(biāo)本的收集 所有的被檢患者標(biāo)本均為靜脈空腹采不抗凝血 2～3ml，以 2500r/min速度離心15min分離血清。不能及時(shí)檢測(cè)時(shí)，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試劑和方法 ENA試劑采用深圳市伯勞特生物制品有限公司生產(chǎn)的風(fēng)濕病自身抗體免疫印跡試劑。測(cè)定步驟：①操作為在含有印跡膜條的反應(yīng)槽中加入洗滌應(yīng)用液1ml和待檢血清10μl，置搖床上37℃搖動(dòng)30min，棄去反應(yīng)槽液體，在吸水紙上拍干，加入洗滌應(yīng)用液1ml，洗滌1min棄去反應(yīng)槽液體，反復(fù)洗滌4次，最后在吸水紙上拍干液體。在反應(yīng)槽中加入洗滌應(yīng)用液0.5ml和酶聯(lián)試劑10μl。置搖床上37℃搖動(dòng)30min，棄去反應(yīng)槽液體，在吸水紙上拍干，加入洗滌應(yīng)用液1ml，洗滌1min棄去反應(yīng)槽液體，反復(fù)洗滌4次，最后在吸水紙上拍干液體。在反應(yīng)槽中分別加入顯色劑A、B各0.5ml，在搖床上搖動(dòng)2～10min，顯色，待質(zhì)控帶和陽性區(qū)帶顯色清晰后加終止液0.5ml，在搖床上搖動(dòng)2min，用自來水沖去槽中液體，取出印跡膜條，置吸水紙上，待干后與標(biāo)準(zhǔn)帶對(duì)照判斷結(jié)果。

1.4 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 將印跡膜上起始線與標(biāo)準(zhǔn)帶起始線對(duì)齊，觀察陽性顯色區(qū)帶與對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)帶位置即可判斷顯色帶是何種自身抗體。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)均以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 90例SLE患者及40例健康對(duì)照檢測(cè)ENA結(jié)果。詳見表1。

2.2 ENA檢測(cè)在SLE患者中的各項(xiàng)臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)。詳見表2。

表1 90例SLE患者及40例健康對(duì)照檢測(cè)ENA結(jié)果

3 討論

表2 ENA檢測(cè)在SLE患者各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)結(jié)果

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種涉及許多系統(tǒng)和臟器的自身免疫性疾病，由于細(xì)胞和體液免疫功能障礙，產(chǎn)生多種自身抗體。可累及皮膚、漿膜、關(guān)節(jié)、腎及中樞神經(jīng)系統(tǒng)等，并以自身免疫為特征，患者體內(nèi)存在多種自身抗體，不僅影響體液免疫，亦影響細(xì)胞免疫，補(bǔ)體系統(tǒng)亦有變化。發(fā)病機(jī)理主要是由于免疫復(fù)合物形成，血清中出現(xiàn)多種自身抗體，活動(dòng)期補(bǔ)體水平下降。因此，血清自身抗體的檢測(cè)對(duì)臨床診斷有極大幫助。

抗ENA抗體是診斷SLE的主要實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)[5]，抗Sm抗體是SLE的血清標(biāo)志性抗體，對(duì)早期、不典型的SLE或經(jīng)過治療緩解后SLE回顧性診斷有很大幫助。抗Sm抗體所作用的靶抗原是U族小分子細(xì)胞核糖核蛋白粒子；單獨(dú)有此抗體存在者，常有中樞神經(jīng)受累。本組檢測(cè)結(jié)果顯示，SLE病人抗Sm抗體陽性率為31.1%，與文獻(xiàn)報(bào)道的陽性率相近[6]。抗Sm抗體被認(rèn)為是SLE的標(biāo)志性抗體，對(duì)SLE的診斷有很高的特異性。抗Sm抗體水平隨SLE疾病的活動(dòng)性而波動(dòng)，提示可作為某些患者SLE是否活動(dòng)的指標(biāo)。有研究者認(rèn)為抗Sm抗體單獨(dú)出現(xiàn)于SLE常伴隨有神經(jīng)系統(tǒng)的損害，對(duì)早期不典型的SLE或治療后回顧性診斷有極大的幫助[7]。從理論上講，檢測(cè)到抗Sm抗體的同時(shí)，也應(yīng)檢測(cè)到抗U1RNP抗體。本組抗U1RNP抗體的陽性率為8.89%，較文獻(xiàn)報(bào)道的陽性率略低[8]，差異可考慮檢測(cè)方法的不同。抗U1RNP抗體常常在SLE活動(dòng)期中存在，而且不會(huì)隨病情的緩解立即消失，可持續(xù)1～2年后才轉(zhuǎn)陰，抗U1RNP抗體陽性的SLE患者，則腎病發(fā)生率較低；抗Sm抗體陽性時(shí)，則發(fā)生狼瘡性腎炎的可能性較大；抗SSA抗體和抗SSB抗體主要與干燥綜合征(SS)有關(guān)，在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中抗SSA和抗SSB抗體陽性率根據(jù)檢測(cè)方法不同而有差異。據(jù)表1顯示，在SLE中抗SSA抗體的陽性率為24.44%，抗SSB抗體的陽性率為6.67%，抗RO-60抗體陽性率為46.67%，陽性率最高，抗RO-60抗體、抗SSA抗體和抗SSB抗體與SLE病情相關(guān)，具有抗RO-60抗體、抗SSA和抗SSB抗體的SLE患者出現(xiàn)光過敏、皮損和紫癜者多見。此外，有研究表明，抗SSA和抗SSB抗體陽性可造成新生兒狼瘡及嬰兒心臟傳導(dǎo)阻滯等先天性心臟病[9]。

各種抗體單獨(dú)出現(xiàn)除抗Sm抗體和抗Rib抗體較高外其它均較低。從表1看出ENA的檢測(cè)特異性很高(正常人均為陰性)，其中每一項(xiàng)目檢測(cè)的敏感性較低，ENA中的各項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)則能提高其敏感性和特異性。系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床表現(xiàn)多樣，變化多端，實(shí)驗(yàn)室檢查尤其是自身抗體的檢測(cè)為人們?cè)缙谡_診斷和治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡提供了有利證據(jù)。但由于實(shí)驗(yàn)的方法不同、質(zhì)量控制的差異、檢測(cè)的敏感性和特異性的高低，故不能以某一項(xiàng)的檢測(cè)結(jié)果來診斷疾病，而應(yīng)根據(jù)臨床癥狀和其他檢查綜合判定，這樣才不至于漏診或誤診。應(yīng)對(duì)不同情況進(jìn)行分析，以提高對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷率[10]。

綜上所述，抗ENA多肽抗體譜檢測(cè)靈敏度高、結(jié)果可靠、方法簡(jiǎn)便、易于推廣，對(duì)SLE的診斷有重要的臨床價(jià)值。

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