高遷移率蛋白-1水平變化與膿毒癥患者死亡率的關系

馬玉東,黎明新,孫寶山,宋巖,*

(1.沈陽醫學院奉天醫院ICU,遼寧 沈陽 110024;2.檢驗科)

膿毒癥 (sepsis)指由感染引起的全身炎癥反應綜合征 (systemic inflammatory response syndrome,SIRS),多可證實有細菌或高度可疑感染灶存在,是各種嚴重燒傷、創傷、休克及外科手術后嚴重的并發癥,進一步發展可導致膿毒性休克、多器官功能障礙綜合征 (multiple organ dysfunction syndrome,MODS)。目前膿毒癥的搶救成功率仍未達滿意效果,已成為臨床危重患者最主要的死因之一。高遷移率蛋白-1(high mobility group protein box-1,HMGB-1)作為晚期炎癥介質,在膿毒癥的發展、轉歸及預后方面扮演著重要角色。本研究從臨床角度出發,通過檢測膿毒癥患者血清 HMGB-1水平變化和死亡率的關系,以指導臨床治療。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2008年 1月至 2009年 12月在我院 ICU共收治膿毒癥患者 48例,平均年齡 49.3歲,男 32例,女 16例,其中外傷 23例 (斷肢再植 10例,腦外傷 4例,復合外傷 9例,共死亡 14例),感染 12例 (肺內感染 8例,泌尿系感染 4例,共死亡 7例),手術術后 8例 (胰腺炎術后 5例,結腸癌術后 2例,胃癌術后 1例,共死亡 3例),心肺復蘇術后 5例 (死亡 3例)。

1.2 標本采集 患者 2 h、12 h、24 h、48 h、72 h取外周靜脈血 3ml,迅速在離心機上分離血清,置于 -80℃冰箱保存,統一測定 HMGB-1并記錄患者轉歸 (生存或死亡)。

1.3 HMGB-1測定 人 HMGB-1酶聯免疫分析試劑盒,由沈陽金標準生物制品有限公司提供。方法：用純化的 HMGB-1抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入 HMGB-1,再與 HRP標記的羊抗人抗體結合,形成抗體 -抗原 -酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 HMGB-1呈正相關。用酶標儀在 450 nm波長下測定 OD值,通過標準曲線計算樣品中HMGB-1濃度。

1.4 統計學分析 使用 SPSS 13.0軟件進行統計學處理,計量資料以±s)表示,采用 t檢驗,計數資料采用 χ2檢驗,P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同時間膿毒癥患者 HMGB-1水平變化 隨著時間的增加,兩組患者血清 HMGB-1水平逐漸上升,于 72 h達高峰 (圖 1)。

圖 1 不同時間膿毒癥患者HMGB-1水平變化

2.2 存活組和死亡組患者 HMGB-1水平變化 死亡組患者血清 HMGB-1水平在 2 h、12 h、48 h、72 h明顯高于存活組患者 HMGB-1水平 (P＜0.01);在24 h時,兩組患者 HMGB-1水平無明顯差異 (表 1)。當患者血清 HMGB-1≥100μg/L時,患者的死亡率將明顯升高 (表 2)。

表 1 不同時間膿毒癥患者血清HMGB-1水平變化 (μg/L)

表 2 患者血清 HMGB-1水平與死亡率的關系

3 討論

近年來的研究發現,一種在炎癥晚期釋放的炎癥介質 HMGB-1在膿毒癥的發展、轉歸及預后方面扮演著重要角色[1,2]。HMGB-1因其分子量小,凝膠電泳時泳動的速度快而得名,是細胞核內含量最豐富的非組蛋白染色質蛋白,正常人血清HMGB-1含量為陰性。HMGB-1作為一種免疫炎癥分子,參與并調節內生性和適應性免疫反應,能夠促進免疫細胞的成熟分化以及炎性介質的釋放[3,4]。HMGB-1是膿毒癥致死效應中發揮關鍵作用的細胞因子,其促炎作用的關鍵在于其核內的DNA結合蛋白被活化的巨噬細胞 /單核細胞釋放到細胞外,從而發揮一系列炎癥效應[5],這種釋放大多與 LPS、TNF-α、IL-1β等刺激有關,也能被壞死細胞直接釋放,但凋亡細胞并不直接釋放HMGB-1[6]。

研究結果表明,HMGB-1作為晚期炎性介質,在膿毒癥患者存在逐漸上升的趨勢,在 72 h達高峰。死亡組患者血清 HMGB-1水平在 2 h、12 h、24 h、48 h、72 h明顯高于存活組患者 HMGB-1水平,說明 HMGB-1水平與患者病情關系密切,并且當患者血清 HMGB-1≥100μg/L時,患者的死亡率將明顯升高。

雖然有實驗表明,在體外實驗和動物實驗中采用抗 HMGB-1抗體、抗 A-Box抗體、抗 RAGE抗體等治療可顯著抑制細胞外 HMGB-1水平,明顯提高膿毒癥大鼠的生存率,但其能否應用于膿毒癥的臨床治療尚不清楚[7,8]。在臨床中,通過檢測血清中 HMGB-1,可以盡早的判斷患者的預后,以便盡早的給予臨床干預,對于膿毒癥患者何時及怎樣應用抗 HMGB-1抗體等,有待于進一步研究。

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