阿司匹林促進胃酸分泌的途徑與潰瘍復發(fā)

劉 韓，崔偉龍，牟 林，夏立丁，李光偉，孫東升，王國忠

（齊齊哈爾醫(yī)學院，黑龍江齊齊哈爾 161006）

消化性潰瘍是一種常見病，主要發(fā)生在胃和十二指腸，發(fā)病機制較為復雜[1]。消化性潰瘍愈合后很容易復發(fā)，復發(fā)的機制更為復雜，而且很難防止[2]。阿司匹林（Aspirin）的藥理作用非常廣泛[3-4]，是臨床上最常用的藥物之一。阿司匹林有損傷胃腸道黏膜而導致潰瘍復發(fā)的副作用，但阿司匹林引起潰瘍復發(fā)的機制目前還不十分清楚。該項研究采用經典的大鼠乙酸潰瘍模型，在潰瘍愈合后用阿司匹林誘導復發(fā)，探討阿司匹林促進胃酸分泌的途徑以及胃酸分泌增加對胃黏膜結構的影響，進而闡明潰瘍復發(fā)的機制，這對防止?jié)儚桶l(fā)，保護煤礦工人的健康，提高生產效率具有重要的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料

雄性清潔級Wistar大鼠購于哈爾濱醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院動物實驗中心，生產許可證號：SCXK2006-010，體重180～210g。阿司匹林為alfa aesar公司產品。環(huán)加氧酶-1（Cyclooxygenase-1，COX-1） 一抗、COX-2一抗和胃泌素（Gastrin，Gas）一抗為北京博奧森生物技術有限公司產品，它們的山羊抗兔酶標二抗都是北京康為世紀生物科技有限公司產品。DAB顯色試劑盒為康為世紀公司產品。防脫片氨基載玻片為天津灝洋生物制品科技有限公司產品。前列腺素E2（prostaglandin E2， PGE2）檢測試劑盒為美國 R&D 公司產品。

1.2 儀器與設備

日本產奧林巴斯光學顯微鏡、Motic Med 6.0數碼醫(yī)學圖像分析檢測儀。Leica切片機為德國產品，PHS-3B型pH計為中國上海精科儀器有限公司產品。Model 680型酶標儀為美國Bio-Rad公司產品。

1.3 方法

1.3.1 動物模型復制和分組 大鼠乙酸潰瘍模型按文獻報道方法進行復制[5]，簡述為：將內徑為6 mm的塑料管放置于大鼠胃體與幽門交界處，管內注入100%乙酸75 μm，25 s后移去乙酸。模型制作后的第25天光鏡下檢測潰瘍的組織學后，隨機分為如下3組：模型對照組，潰瘍制作后的第25～54天，每天禁食5 h；鹽水對照組，潰瘍制作后的第25～54天，每天禁食 4 h后，用灌胃法給予生理鹽水 4ml/（kg·d），然后再禁食1 h；阿司匹林組，潰瘍制作后的第25～54天，每天禁食4 h后，用灌胃法給予阿司匹林 40 mg/（kg·d），然后再禁食 1 h。在55d收集各組標本，進行各項指標檢測。

1.3.2 潰瘍組織學檢測 用過量乙醚處死大鼠，取出胃，以潰瘍部為中心，沿胃長軸取材，行組織切片，H&E染色，光鏡下觀察黏膜結構。

1.3.3 再生黏膜厚度和擴張腺體數的檢測 每組隨機取4張切片，每張切片隨機取2個視野，H&E染色后在光鏡下放大100倍，測量再生黏膜上皮細胞表面至黏膜下層之間的距離，結果表示為：微米 （μm）；H&E染色切片在光鏡下放大100倍，測量再生黏膜內呈囊狀擴張的腺體數，結果表示為：個/高倍視野（個/HP）。

1.3.4 COX-1、COX-2和Gas表達的檢測 用免疫組織化學Elivison二步法檢測。COX-1一抗1∶150稀釋，COX-2一抗1∶1 000稀釋，Gas一抗1∶1 000稀釋；它們的山羊抗兔酶標二抗都是1∶150稀釋，用DAB試劑盒顯色。每組隨機取4張切片，每張切片隨機取2個視野，然后用Motic Med 6.0數碼醫(yī)學圖像分析檢測儀檢測其組織切片的積分光密度來表示COX-1、COX-2和Gas表達的強度。

1.3.5 PGE2和胃液pH的檢測 按試劑盒生產廠商說明書并參考文獻[6]報道的方法進行胃黏膜PGE2的測定；大鼠禁食24 h，乙醚麻醉，結扎幽門，4 h后再結扎賁門，收集胃內容于離心管內1 500 r/min離心10 min，取上清液用pH計測量pH。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 潰瘍組織學變化

模型復制后第55天潰瘍的組織學變化，見圖1。

2.2 各組再生黏膜厚度和擴張腺體數的差異

各組再生黏膜厚度和擴張腺體數的差異見表1。

表1 各組再生黏膜厚度和擴張腺體數的差異（±s）Tab.1 difference of the regenerative mucosal thickness and the number ofdilatedgland in eachgroup(±s)

表1 各組再生黏膜厚度和擴張腺體數的差異（±s）Tab.1 difference of the regenerative mucosal thickness and the number ofdilatedgland in eachgroup(±s)

與模型對照組和鹽水對照組相比，*P＜0.01Compared with model controlgroup and saline controlgroup,*P＜0.01

組別 再生黏膜厚度（μm） 擴張腺體數（個/HP）模型對照組鹽水對照組阿司匹林組341.05±28.60 353.84±21.04 286.56±34.51*21.38±4.66 18.50±4.90 30.75±6.09*

2.3 各組COX-1、COX-2和Gas表達的差異

各組COX-1、COX-2和Gas表達的差異，見圖2和表2。

2.4 各組胃黏膜PGE2含量和胃液pH的差異

各組胃黏膜PGE2含量和胃液的差異，見表3。

3 討論

文獻報道用100%乙酸75 μm復制的大鼠乙酸潰瘍模型在3周內完全愈合[5]，本實驗在模型復制后第25天，隨機抽取10只大鼠進行組織學檢測，潰瘍完全愈合。愈合后的大鼠在25～54d給予阿司匹林，在55d 70%的大鼠出現(xiàn)復發(fā)潰瘍，與先前的報道基本一致[7]。由圖1可看出，阿司匹林組復發(fā)潰瘍邊緣腺體擴張（圖1C），模型對照組（圖1A）與鹽水對照組（圖1B）涂乙酸部位的黏膜亦擴張，與正常黏膜（圖1E）有很大差異，而阿司匹林組沒有復發(fā)潰瘍部位的黏膜（圖1D）擴張腺體較少，與正常黏膜結構相似，表明愈合質量與潰瘍復發(fā)有關。

表2 各組COX-1、COX-2和Gas積分光密度的差異（±s）Tab.2 difference of the integral lightdensity of COX-1,COX-2 andgas in eachgroup(±s)

表2 各組COX-1、COX-2和Gas積分光密度的差異（±s）Tab.2 difference of the integral lightdensity of COX-1,COX-2 andgas in eachgroup(±s)

與模型對照組和鹽水對照組相比，*P＜0.01Compared with model controlgroup and saline controlgroup,*P＜0.01

組別 COX-1 COX-2模型對照組鹽水對照組阿司匹林組38.04±7.89 40.37±9.85 43.65±7.37 9.78±4.40 11.52±4.63 45.63±5.45*Gas 29.48±5.59 31.49±6.45 42.66±7.55*

表3 各組PGE2含量和胃液pH的差異（±s）Tab.3 difference of the contents of prostaglandin E2and pH in eachgroup(±s)

表3 各組PGE2含量和胃液pH的差異（±s）Tab.3 difference of the contents of prostaglandin E2and pH in eachgroup(±s)

與模型對照組和鹽水對照組相比，*P＜0.01Compared with model controlgroup and saline controlgroup,*P＜0.01

組別 n PGE2（ng/g）模型對照組鹽水對照組阿司匹林組10 10 10 193.15±25.36 182.28±25.77 146.52±23.78*胃液pH 1.61±0.13 1.67±0.14 1.41±0.15*

目前發(fā)現(xiàn)COX有3種[8]，胃黏膜存在結構型COX-1和誘導型COX-2，COX催化花生四烯酸生成PGE2可加速潰瘍愈合[9]。從圖2的COX表達和表2的COX積分光密度來看，3個組的COX-1的積分光密度差異無統(tǒng)計學意義 （P＞0.05），表明阿司匹林不影響結構型COX-1的表達，因為結構型COX-1通常有一定的表達，以維持正常的生理功能[10]；而在阿司匹林組COX-2的積分光密度高于模型對照組和鹽水對照組（P＜0.01），模型對照組和鹽水對照組之間差異無統(tǒng)計學意義 （P＞0.05），表明阿司匹林影響COX-2的表達，這與文獻報道一致[11]。COX-2表達的增加可能是阿司匹林引起的胃黏膜炎癥所致。COX-2表達增加理應導致PGE2生成增多，但從表3來看，阿司匹林組的PGE2含量比模型對照組和鹽水對照組減少（P＜0.01），如果阿司匹林僅抑制COX-2活性而不抑制COX-1的活性，那么阿司匹林組的PGE2含量應該與模型對照組和鹽水對照組沒有差異，因為模型對照組和鹽水對照組潰瘍完全愈合，接近于正常胃黏膜，正常胃黏膜COX-2表達很少[10]，因此可以推測阿司匹林既抑制COX-1的活性，也抑制COX-2的活性，才能使PGE2生成減少。

Gas由胃黏膜G細胞產生，作用于壁細胞Gas受體促進胃酸分泌。從圖2和表2gas表達可以看出，阿司匹林組Gas積分光密度高于模型對照組和鹽水對照組（P＜0.01），而模型對照組和鹽水對照組Gas積分光密度差異無統(tǒng)計學意義，此結果表明阿司匹林有上調Gas表達的作用。胃酸是重要的黏膜攻擊因子，能夠損傷胃黏膜，從表3胃液pH來看，阿司匹林組的胃液pH低于模型對照組和鹽水對照組（P＜0.01），模型對照組和鹽水對照組之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），表明阿司匹林促進G細胞Gas的表達，Gas作用于壁細胞使胃酸分泌增多，導致胃液pH值降低。

愈合質量是影響消化性潰瘍復發(fā)的關鍵因素[12]。從表1來看，阿司匹林組的再生黏膜厚度低于模型對照組和鹽水對照組（P＜0.01），而再生黏膜擴張腺體數高于模型對照組和鹽水對照組（P＜0.01），但模型對照組和鹽水對照組之間再生黏膜厚度和再生黏膜擴張腺體數沒有差異（P＞0.05），表明胃酸作為黏膜的攻擊因子容易損傷畸形的胃黏膜，降低潰瘍愈合質量，導致潰瘍復發(fā)。

由此可以推測，阿司匹林增加胃酸分泌的途徑是：阿司匹林通過抑制COX的活性，使PGE2生成減少，致上調G細胞Gas的表達，Gas作用于壁細胞受體促進胃酸分泌增加，胃酸分泌增加容易損傷愈合質量降低的畸形胃黏膜，導致潰瘍復發(fā)。

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