HPLC法測定精氨酸布洛芬噴霧劑的含量

張 皓，楊金榮，高順昌，王潤玲，程先超，周 慧

（天津醫科大學藥學院，天津 300070）

布洛芬是臨床上常用的非甾體消炎鎮痛藥，具有較強的抗炎、抗風濕及解熱鎮痛作用，但長期口服布洛芬對胃腸道會產生副作用。布洛芬是非選擇性環氧化酶抑制劑,環氧化酶有兩種亞型：COX-1和COX-2。COX-1是一種結構酶，存在于腸、胃、腎等大多數組織中，通過促進PG及血栓烷A2的合成，保護胃腸道黏膜、調節腎臟血流和促進血小板聚集等內環境穩定[1]；而COX-2為誘導酶，在大多數正常組織中通常檢測不到，主要在炎癥部位由炎癥介質誘導產生活性，通過對PG合成的促進作用，介導疼痛、發熱和炎癥等反應的發生[2]。布洛芬的治療作用源于對COX-2的抑制[3]，而不良反應歸于對COX-1的抑制[4]。由于COX-2在炎癥部位誘導產生，所以，在局部炎癥部位給藥，實際起到了靶向作用。本課題組研制了布洛芬水溶性衍生物精氨酸布洛芬[5-6]，并以其為原料制備了外用噴霧劑，改變了口服給藥途徑，通過透皮吸收而達到療效，克服了口服給藥對胃腸道的副作用。目前，該課題組研制的精氨酸布洛芬原料已經獲得國家頒發的新藥證書。其噴霧劑已完成處方篩選等工作，其體外透皮吸收試驗結果表明，該處方的平均滲透速率（8 h）為 847.69 μg·h-1，是一個很有應用前景的外用噴霧劑。本文對該制劑的含量測定方法進行了研究探討。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 LC-10A高效液相色譜儀（LC-10Atvp高壓輸液泵、SPD-10Avp紫外檢測器、Anastar色譜工作站，日本島津），BP211D型電子分析天平（Sartorius），HH-恒溫水浴鍋(鞏義市英峪予華儀器廠)，pHS-3C精密pH計（天津市盛邦科學儀器技術公司）。

1.2 樣品與試劑 精氨酸布洛芬對照品（自制，三次重結晶，在含量測定色譜條件下顯單一色譜峰，含量99.8%）、精氨酸布洛芬原料（自制，含量99.6%）、精氨酸布洛芬噴霧劑（自制，標示含量92.5mg/ml）、重蒸水（自制）、甲醇（色譜純，天津市康科德色譜試劑公司），磷酸、磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱為Diamonsil-C18（150mm×4.6mm，5μm），流動相為甲醇－磷酸鹽緩沖液（75∶25），用磷酸調pH 至 3.0，流速為 1.0ml/min，檢測波長為220 nm，進樣量為20μl，柱溫為30℃。

2.2 溶液的配制 （1）對照品溶液的配制：精密稱取精氨酸布洛芬約0.37 g，置于100ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液；精密量取上述儲備液2.5ml至25ml容量瓶中，以流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。（2）供試品溶液的配制：精密量取精氨酸布洛芬噴霧劑1.0ml，置于25ml容量瓶中，加適量流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液1ml，置于10ml容量瓶中，加流動相至刻度，即得供試品溶液。（3）空白樣品溶液的配制：按處方配制不含精氨酸布洛芬的空白樣品，精密量取空白樣品1.0ml，置于25ml容量瓶中，加適量流動相稀釋至刻度，搖勻；精密量取上述溶液1ml，置于10m l容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，即得空白樣品溶液。

2.3 色譜條件的專屬性 分別精密量取空白樣品溶液、對照品溶液和供試品溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1~3）。

2.4 方法學試驗

2.4.1 線性關系考察 精密稱取精氨酸布洛芬對照品約0.185 g，置于50ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，作為儲備液。精密量取儲備液2、2.25、2.5、2.75、3.0ml，分別置于 25ml容量瓶中，用流動相稀釋至刻度（濃度分別0.296、0.333、0.370、0.407、0.444mg/ml）。分別精密量取 20 μl注入液相色譜儀，在220 nm波長處測定峰面積。以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線。得線性回歸方程為y=24 820 154 x+184 692,r=0.999 9。

2.4.2 精密度試驗 取標準曲線項下，濃度為0.370mg/ml的溶液，連續測定6次，計算所得峰面積的相對標準偏差為0.31%。

2.4.3 精氨酸布洛芬溶液的穩定性試驗 取標準曲線項下，濃度為 0.370mg/ml的溶液，在 0、1、2、4、6、8、10、24 h測定峰面積，計算所得峰面積的相對標準偏差為1.29%。

2.4.4 回收率試驗 精密稱取精氨酸布洛芬0.37 g，置于100ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液，精密吸取2.5m l至25ml容量瓶中，以流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。按照2.1的色譜條件進行測定[7-8]。

按比例精密量取全輔料溶液（空白樣品），置50 ml容量瓶中，精密加入相當于標示量80%、100%和120%的精氨酸布洛芬，混合均勻，用流動相稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1ml，置10ml容量瓶中，以流動相稀釋定容，搖勻，過濾，按照2.1的色譜條件進行測定，計算回收率[9-11]，結果見表1。

2.4.5 樣品含量測定 按上述方法測定3批樣品（批號分別為 070901、070902、070903）含量，結果顯示3批樣品中精氨酸布洛芬含量（n=3）分別為91.2、92.9、92.0mg/ml。

表1 回收率測定結果(n=3)

3 討論

關于色譜條件的選擇，考慮到保留時間的長短會從不同角度影響實驗結果，保留時間短時，分離度可能達不到完全分離的要求，保留時間長時，浪費時間和試驗試劑，故對可能影響保留時間的各因素進行了如下摸索。

3.1 流動相的比例 甲醇:磷酸鹽緩沖液分別為75:25，73:27和77:23，其它條件不變。結果顯示調整流動相比例時，對峰面積影響不大，甲醇比例升高，則保留時間縮短，甲醇比例降低，則保留時間延長，分離度升高，但也能達到分離度＞2的要求。

3.2 柱溫 溫度分別為30℃，25℃和35℃，其它條件不變。調整柱溫時，對峰面積影響不大，升高溫度，則保留時間縮短，但分離度不如正常柱溫的好，但也能達到分離度＞2的要求；降低溫度，則保留時間延長。

3.3 流速 流速分別為 1 ml/min，0.9 ml/min和1.1ml/min，其它條件不變。調整流速，對峰面積有一定的影響，流速增加，峰面積減小，保留時間縮短，降低流速，峰面積增大，保留時間延長。

筆者采用HPLC法確定精氨酸布洛芬噴霧劑的含量測定方法，并進行了方法學驗證。標準曲線為：y=24 820 154 x+184 692,r=0.999 9；在 0.290～0.400 mg/ml范圍內，峰面積與濃度呈良好的線性關系，方法的精密度及回收率均符合中國藥典2005版第二部的要求。本含量測定方法簡便、準確可靠、精密度良好，可作為精氨酸布洛芬噴霧劑的定量控制方法。

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