幾種殺細菌劑對胡蘿卜軟腐歐文氏菌的毒力測定

2010-11-27 02:15:05雷玉明河西學院農學系甘肅張掖734000西部資源與環境化學重點實驗室甘肅張掖734000河西綠洲農業研究所甘肅張掖734000

長江大學學報(自科版) 2010年8期

雷玉明 (河西學院農學系，甘肅張掖 734000；西部資源與環境化學重點實驗室,甘肅張掖 734000;河西綠洲農業研究所，甘肅張掖 734000)

張建朝 (張掖市植保植檢站，甘肅張掖 734000)

邢會琴 (河西學院農學系，甘肅張掖 734000)

費永祥 (張掖市植保植檢站，甘肅張掖 734000)

幾種殺細菌劑對胡蘿卜軟腐歐文氏菌的毒力測定

雷玉明
(河西學院農學系，甘肅張掖 734000；西部資源與環境化學重點實驗室,甘肅張掖 734000;河西綠洲農業研究所，甘肅張掖 734000)

張建朝
(張掖市植保植檢站，甘肅張掖 734000)

邢會琴
(河西學院農學系，甘肅張掖 734000)

費永祥
(張掖市植保植檢站，甘肅張掖 734000)

采用室內抑菌圈法測定了6種殺細菌劑對胡蘿卜軟腐歐文氏菌馬鈴薯黑脛病亞種(Erwiniacarotovorasusp.atroseptica)的毒力，篩選出2種有明顯抑菌作用的藥劑72%農用硫酸鏈霉素可濕性粉劑和90%鏈霉素·土可溶性粉劑，抑菌效果顯著，EC50分別為0.092 1 mg·mL-1和0.097 2 mg·mL-1。

殺細菌劑；胡蘿卜軟腐歐文氏菌馬鈴薯黑脛病亞種；抑菌圈法；毒力測定

馬鈴薯黑脛病(Erwiniacarotovorasusp.atroseptica(Vanhall) Dye)又名黑腳病，是一種由種薯傳播的細菌病害。據國外資料報道，產量損失率為 3%～68%，平均15%[1]。國內凡有馬鈴薯種植的地方黑脛病均有發生，東北、西北、華北發生較為嚴重[2～4]。近幾年來，甘肅省馬鈴薯產業的迅速發展，種植面積已達66.67萬hm2，隨著種植面積的擴大和品種引進，該病害危害越來越重，在田間常引起爛種和死芽死苗，導致缺苗斷壟，發病率高達15%～27.5%[5]。防治此病有效的方法是采用芽栽和整薯播種，而芽栽和整薯播種不適于大面積栽培，目前仍然是以切塊播種為主，防治的主要方法就是藥劑切塊種薯處理。而目前農藥市場上防治細菌病害的殺細菌劑較多，生產上選擇時常常是隨意性大，不知何種藥劑效果顯著。為此，對市場上常見的幾種殺細菌劑進行毒力測定，篩選出有效藥劑，以為種薯處理或包衣提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

胡蘿卜軟腐歐文氏菌馬鈴薯黑脛病亞種，采用營養瓊脂培養基(NA)從馬鈴薯黑脛病塊莖及病苗根部等組織分離，經致病性及NT培養基純化培養獲得菌株，由河西學院農學系植物病理實驗室提供。

1.2 供試藥劑

64%氫氧化銅·鋅(Copper hydroxide·ziram，商品名：細治，陜西省蒲城縣美邦農藥有限公司生產)；72%農用硫酸鏈霉素可濕性粉劑(steptomycim sulfate，華北制藥集團生產)；2%春雷霉素可濕性粉劑(Kasugamycin，延邊春雷生物藥業有限公司生產)；53.8%氫氧化銅干懸浮劑(cuprichydroxide,商品名：可殺得2000，美國固信公司(Griffin Corporation)開發生產)；20%噻菌銅懸浮劑(Thiodiazole-copper，浙江龍灣化工有限公司生產)；90%鏈霉素·土可溶性粉劑(streptomycim+oxyteracykine，商品名：新植霉素，河北省石家莊曙光制藥廠生產)。

1.3 藥劑對胡蘿卜軟腐歐文氏菌馬鈴薯黑脛病亞種抑制試驗

(1) 菌懸液的配制及含菌培養基制備將供試菌株在NT平板培養基表面活化，然后接種于NT斜面培養基表面上培養40 h后，在試管中加入5 mL無菌水，用無菌接種環刮下菌苔，制成菌懸液。在無菌培養皿(?90 mm)中加入菌液1 mL，傾入融化的NA培養基 (液溫40～50 ℃)10 mL，并充分搖均，冷卻凝固后備用[6]。

(2) 藥劑配制及稀釋將供試5種原藥由高濃度向低濃度稀釋。先用無菌水配制1 mg/mL的母液，依次向低濃度稀釋獲得0.8、0.4、0.2、0.1 mg/mL的系列梯度藥液[6]。

(3) 抑菌圈測定用已滅菌的打孔器打取濾紙，分別投入配制的供試藥劑稀釋液中吸附15 s，取出使其靠在燒杯壁上淌落多余的藥液后移入凝固的培養基表面，然后將已浸藥液的濾紙片接到帶菌的NT平板上，以無菌水浸過的濾紙為空白對照(CK)。每一培養皿放3片吸附同一濃度藥液的紙碟，每藥劑濃度重復3次，培養皿移入27 ℃恒溫下培養72 h，采用十字交叉測法測量抑菌圈直徑(mm)。根據公式計算菌落生長抑制率(%)=[(處理組抑制圈直徑-對照組抑制圈直徑)/處理組抑制圈直徑]×100[6]。

1.4 藥劑毒力測定

將1.3中對胡蘿卜軟腐歐文氏菌馬鈴薯黑脛病亞種有明顯抑制作用的藥劑選出，按1.3中測定方法，進一步進行藥劑的毒力測定。根據濃度梯度下菌落生長抑制率的值，將菌落生長抑制率換算成抑制機率值 (y)，藥劑濃度對數(x)，按濃度對數與機率值回歸法求得不同殺菌劑對應菌株的劑量的回歸方程y=a+bx，并由回歸方程計算各藥劑對相應抑制中濃度EC50值及相關系數r值[7、8]。

2 結果與分析

2.1 殺細菌劑對胡蘿卜軟腐歐文氏菌馬鈴薯黑脛病亞種抑菌測定

供試的6種藥劑在不同濃度下對胡蘿卜軟腐歐文氏菌馬鈴薯黑脛病亞種抑菌作用存在明顯差異。從表1可見，0.8～1.0 mg/mL的農用硫酸鏈霉素、1.0 mg/mL的鏈霉素·土對馬鈴薯黑脛病亞種抑制率達100%，0.2～0.4 mg/mL的農用硫酸鏈霉素、 0.2～0.8 mg/mL的鏈霉素·土的抑制率分別為84.7%～95.8%、81.9%～95.8%，效果較為明顯。氫氧化銅·鋅、氫氧化銅、春雷霉素、噻菌銅等4種藥劑在濃度為1.0 mg/mL時對馬鈴薯黑脛病亞種抑制率分別達94.4%、91.7%、90.3%、91.7%，效果較好，但在其它濃度條件下抑菌效果較差。因此，從抑菌圈大小與濃度綜合分析，農用硫酸鏈霉素、鏈霉素·土濃度在0.2～1.0 mg/mL之間隨濃度增加抑菌圈增大，抑菌效果明顯。氫氧化銅·鋅、氫氧化銅、春雷霉素、噻菌銅等4種藥劑在濃度高于1.0 mg/mL時才有明顯抑菌圈。

表1 供試藥劑不同濃度對胡蘿卜軟腐歐文氏菌馬鈴薯黑脛病亞種抑菌測定Table 1 The inhibitive activity of different concentrations of pesticides to Erwinia carotovora susp. atroseptica

2.2 農用硫酸鏈霉素、鏈霉素·土對胡蘿卜軟腐歐文氏菌馬鈴薯黑脛病亞種毒力測定

對抑菌測定試驗篩選出的農用硫酸鏈霉素、鏈霉素·土進行了對胡蘿卜軟腐歐文氏菌馬鈴薯黑脛病亞種毒力測定。從表2結果可以看出，農用硫酸鏈霉素、鏈霉素·土相關系數較高，均大于0.99，抑制百分率的機率值與濃度之間有顯著的線性關系。可用農用硫酸鏈霉素、鏈霉素·土的毒力回歸方程在供試濃度范圍內進行田間藥劑試驗。毒力檢驗，農用硫酸鏈霉素、鏈霉素·土對該菌有較強抑菌效果，EC50為0.092 1、0.097 2，毒力較強。

表2 農用硫酸鏈霉素、鏈霉素·土對胡蘿卜軟腐歐文氏菌馬鈴薯黑脛病亞種毒力測定Table 2 Toxicity determination of steptomycim sulfate and streptomycim+oxyteracykine to Erwinia carotovora susp. atroseptica

3 結論

經對目前市場銷售的幾種殺細菌對胡蘿卜軟腐歐文氏菌馬鈴薯黑脛病亞種的抑菌測定表明，對該菌具有明顯抑菌作用的是72%農用硫酸鏈霉素可濕性粉劑和90%鏈霉素·土可溶性粉劑，其它銅制劑對該菌沒有明顯抑菌作用。目前在馬鈴薯黑脛病防治中，馬鈴薯生產企業和農戶多使用商品名為細治、可殺得2000、細菌角斑絕等銅制劑的殺細菌劑[9,10]，防效甚微。因此，在生產上應用72%農用硫酸鏈霉素可濕性粉劑或90%鏈霉素·土可溶性粉劑，對種薯進行包衣處理或藥劑浸種處理，以達到防治的目的。

致謝：河西學院2005屆種子科學與工程專業學生羊世林、雷志棟參加部分工作，在此表示感謝！

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2010-01-12