保健食品中功效成分檢測方法研究

　　[摘要]為保證保健食品中的功效、質量，本文通過建立保健食品中大豆異黃酮、染料木素的高效液相色譜法檢測對保健食品中功效成分進行檢測，此方法具有快速、靈敏、易操作、專禹性強及重復性好等優點。
　　[關鍵詞]高效液相色譜法；保健食品；檢測方法
　　[中圖分類號]R.284.1　[文獻標識碼]A　[文章編號]1005-6432(2010)35-0132-01
　　
　　大豆異黃酮(IsO)是從大豆中分離提取的一種植物雌性激素，是一種具有改善心血管、抗氧化等保健功能的活性成分。筆者通過建立保健食品中大豆異黃酮的高效液相色譜法檢測，其操作方便、靈敏度高以及回收率高，具有較好的臨床應用。現總結分析如下。
　　
　　1　材料與方法
　　
　　1.1　材料與儀器
　　(1)材料：甲醇含量99.8％(色譜純)；無水乙醚(分析純)；染料木素和大豆苷元(美觀Sigma公司)；Milli-Q超純水。
　　(2)儀器：LC-6A高效液相色譜儀，AS3120型超聲波清洗器，SPD-10Avp紫外可見檢測器，LC-10Atvp輸液泵，shimadzu class-vp5.03工作站。
　　
　　1.2　標準溶液的配制
　　(1)大豆異黃酮標準溶液：取大豆苷元加少量的甲醇進行溶解后再用40％的甲醇定容并制成1.0mg／mL的標準準備液，在放入4℃冰箱進行保存，最后給予40％的甲醇稀釋為25.0ug／mL的標準使用液。
　　(2)染料木素標準溶液：取染料木素加少量甲醇進行溶解后再用40％的甲醇定容并制成1.0mg／mL的標準準備液，在放A4℃冰箱進行保存，最后給予40％的甲醇稀釋為25.0ug／mL的標準使用液。
　　(3)大豆異黃酮、染料木素混合標準溶液：取大豆異黃酮、染料木素給予40％的甲醇稀釋為25.0ug／mL的標準使用液。
　　
　　1.3　方法
　　(1)樣品制備。取含有大豆異黃酮的保健食品1g放于25mL的容量瓶中，加入80％的乙醇溶液溶解至20 mL，超聲提取30min，再加80％的乙醇溶液定容至刻度，離心5min，3000dmin，搖勻靜置，在加入80％的乙醇溶液20倍稀釋上述溶液，過0.45μm濾膜，待備用。
　　(2)色譜條件。色nw9DSLQ1YTSTEoD/QOs1Qg==譜柱：ODS—C18；檢測器：紫外可見檢測器；流動相：甲醇+水+冰醋酸(45，55，1)；流速：1.0mL／min；柱溫：40℃；波長260rim；進樣量：10uL。
　　
　　2　結果
　　
　　2.1　標準曲線制作
　　分別取不同程度的大豆異黃酮、染料木素混合標準溶液10ul給予色譜分析，縱坐標以色譜峰面積繪制，橫坐標用濃度以繪制。大豆苷元于1-80ug／mL的范圍內呈線性，線性相關系數r=0.9994，回歸方程y=132083x+151976。染料木素在8-100ug／mL范圍內呈線性，線性相關系數r=0.9992，回歸方程y=10858x+132794。
　　2.2　方法的準確度與精密度
　　取10、25、50ug／mL三種濃度水平的大豆異黃酮、染料木素混合標準溶液，按色譜條件給予色譜測定。結果中染料木索回收范圍為93.5％-103.1％，平均回收率為99.5％；大豆苷元的回收范圍為95.4％-106.3％，平均回收率為97.8％。染料木素的相對標準偏差為2.09％-2.83％、大豆苷元的相對標準偏差為1.53％-2.69％。染料木素的RSD為2.10％-2.86％，大豆苷元的RSD為1.53％～2.67％。
　　
　　3　討論
　　
　　大豆異黃酮已廣泛應用到保健食品的生產中，目前有很多保健食品以大豆異黃酮為主要成分。但由于目前我國的保健食品缺乏嚴格的質量控制，使得對其大豆異黃酮的檢測還無相應的國家標準檢驗方法。大豆異黃酮與染料木素是大豆制品類保健食品的主要成分功效，而大豆異黃酮則占30％左右，染料木素則占50％左右，而其他的含量則較低，故一般對大豆制品類的保健食品給予檢測時只需檢測大豆異黃酮與染料木素。大豆異黃酮需通過酶解或酸水解，而因游離的苷元才有活性故需以游離式的形式存在，才能讓體內易吸收。在對大豆異黃酮給予檢測時，一般給予氣相色譜法、高效液相色譜法、薄層色譜法及紫外分光光度法。本文主要對大豆異黃酮與染料木素給予高效液相色譜法檢測。
　　高效液相色譜法即HPLC，是20世紀60-70年代發展的新型分析分離技術。它是一種傳統的液相色譜方法、現代高壓技術、高靈敏檢測器及高效柱填充物的新型分析分離技術。因高效液相色譜法需樣品制成溶液，無須氣化，故無須受到樣品的揮發性約束，尤其是對熱穩定性差，揮發性低，分子量大的離子型化合物及高分子化合物尤為有利，而高效液相色譜法具有速度快、范圍廣、安全性高、分離效率高、靈敏度高及色譜柱可反復使用等優點，故常用于對大豆制品類保健食品的檢測。
　　綜上所述，本文通過對大豆制品類保健食品給予高效液相色譜法檢測，其結果表明染料木素的平均回收率為99.5％；大豆苷元的平均回收率為97.8％。染料木素的相對標準偏差為2.09％-2.83％、大豆苷元的相對標準偏差為1.53％-2.69％。染料木素的RSD～2.10％～2.86％，大豆苷元的RSD為1.53％-2.67％。故對大豆制品類保健食品給予高效液相色譜法檢測能更清楚地了解保健食品的質量，從而保證其質