新疆多民族族健康人群eNOS基因G894T多態性分析

基金項目 新疆兵團醫藥衛生科技攻關計劃課題(2006GG56)

摘 要 目的:研究新疆哈薩克族、土爾扈特蒙古族、漢族、維吾爾族健康人群內皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因G894T多態性分布。方法:采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性分析(PCR-RFLP)的方法，分別對新疆哈薩克族、維吾爾族、土爾扈特蒙古族、漢族健康人群作eNOS基因G894T多態性檢測，分類計數進行統計學處理。結果:新疆哈薩克族、維吾爾族、土爾扈特蒙古族、漢族健康人群eNOS基因GG、GT、TT基因型頻率(P>0.005)及G、T等位基因頻率(P>0.005)。結論:eNOS基因G894T多態性分布種族之間沒有顯著性差異，種族內等位基因型頻率分布男女間差異無顯著性(P>0.05)。

關鍵詞 內皮型一氧化氮合成酶基因 多民族 多態性

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.22.205

AbstractObjective:To study the eNOS gene related topolymorphism of G894T in Han，Mongolian，Uyger and Hasake nationality.In Xingiang.Method:To polymerized chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP)in healthy subjects of Han，Mongolian，Uyger and Hasake nationality in Xinjiang.the classified and countered results were processed by statistical analysis.Results:Test results show no significant difference in GG GT TT of eNOS genefrequency(P>0.005)in healthy subjects of Han，Mongolian，Uyger and Hasake nationality.In Xinjiang，and theallele frequency of G and T(P>0.005).Conclusion:There is an ethnic no difference in the distribution of the NOS gene related topolymorphism of G894T，not associated with the gender(P>0.005).

Key WordseNOS gene;polymorphism;Multi ethnic group

eNOS是心血管系統中合成NO的主要酶。eNOS基因第7外顯子第78位堿基即編碼序列第894位堿基發生G突變為T(G894T)，導致第298位氨基酸殘基發生谷氨酸被天門冬氨酸代替(GIu298Asp)。GIu298Asp變異與冠心病及急性心肌梗死的發生顯著相關[1]。國內有關多民族健康人群eNOS基因多態性的研究鮮見系統報到。本研究旨在了解新疆哈薩克族、土爾扈特蒙古族、漢族、維吾爾族健康人群內皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因G894T多態性分布情況。

資料與方法

一般資料:新疆地區哈薩克族無血緣關系、健康體檢者70例，男31例，女39例，平均年齡39.8±6.4歲;漢族91例，男44例，女47例，平均年齡43.1±10.8歲;吐爾扈特蒙古族87例，男46例，女41例，平均年齡47.5±8.9歲;維吾爾族82例，男46例，女36例，平均年齡41.6±6.1歲。4組測試者肺、腎、肝功能正常，無心、腦血管病、內分泌病史和高血壓病史(按WHO標準，收縮壓，≤ 140mmHg;舒張壓≤90mmHg。研究對象均自肘靜脈采血3ml加0.5ml ACD抗凝，充分混勻后放入-20℃冰箱冷藏室保存待檢。

主要儀器:MastercyclerReppendorf PCR儀(梯度核酸擴增儀)，購自上海艾本德生物技術國際貿易有限公司;2.5%瓊脂糖凝膠電泳EB染色、上海生物工程有限公司試劑盒。UVP AC暗箱+GEL相機凝膠成像儀，購自天美有限公司。

DNA的提取:低滲溶血法破紅細胞，采用蛋白酶K消化，飽和酚/氯仿抽提法提取白細胞基因組DNA，最后加TE溶解DNA，-20℃下放置，檢測時BioRad紫外分光光度計測定DNA濃度并標化至100ng/μl。

多聚合酶鏈反應檢測eNOS基因G894T多態性:①引物設計與合成:參照文獻[2]設計引物，primer上游引物:5'-AAGGCAGGAGACAGTGGATGGA-3';下游引物:5'-CCCAGTCAATCCCTTTGGTGCTCA-3'。②PCR擴增:反應體系為25μl，包括DNA模板1.0μl，10X reaction Buffer (Mg++)2.5μl，dNTPMix 2.0μl，primer F引物0.2μl，primerR引物0.2μl Taqpolymerase0.2μl，pure water 18.9μl。③PCR儀擴增反應條件:預變性為95℃ 2分鐘，變性95℃ 30秒，退火66℃ 30秒，延伸72℃ 30秒，共37個循環，最后72℃延伸5分鐘。擴增后的PCR產物為248bp，經2.5%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，100V，30分鐘，置凝膠成像儀上觀察特異性條帶，打印并記錄了實驗結果。④基因型檢測:限制性酶切反應體系10μl，包括PCR產物8.4μl、10×buffer 1μl、Ba II內切酶(大連寶提供)0.6μl，37℃酶切2小時終止。酶切產物經2.5%瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像儀成像，觀察基因型。