血清中CD44V6與甲狀腺癌的關系

[摘要] 目的 探討白細胞分化抗44變異型(CD44V6)與甲狀腺癌的關系。方法 采用酶聯免疫吸附法測定50例甲狀腺良性結節患者和50例甲狀腺癌患者血清中的CD44V6水平，分析其與甲狀腺癌之間的關系。結果 甲狀腺癌組患者血清中CD44V6水平高于甲狀腺良性腫瘤組(P<0.01)。伴有淋巴結轉移的甲狀腺癌患者血清中CD44V6顯著高于不伴有淋巴結轉移的甲狀腺癌患者(P<0.05)。結論 血清中CD44V6水平檢測對甲狀腺癌患者有重要臨床意義，可作為甲狀腺癌患者手術前重要的評價方法。

[關鍵詞] 白細胞分化抗44變異型(CD44V6);甲狀腺癌

[中圖分類號] R736.1 [文獻標識碼] A[文章編號] 1673-9701(2010)10-27-02

Serum CD44V6 Expression in Thyroid Carcinoma and Its Significance

SHI XinWU Naiwang

Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

[Abstract] Objective To explore the relationship between leukocyte differentiation anti-44 variant(CD44V6) and thyroid cancer. Methods The serum CD44V6 level was detected by enzyme-linked immunosorbent assay in 50 cases of benign thyroid nodules(thyroid benign tumor group)and 50 cases of thyroid cancer(thyroid cancer group)and the correlation of the CD44V6 level with thyroid cancer was analyzed. Results Serum CD44V6 was higher in the thyroid cancer group than that of the thyroid benign tumor group(P<0.01). Serum CD44V6 was higher in thyroid cancer with lymph node metastasis than that in thyroid cancer without lymph node metastasis. Conclusion The detection of the serum CD44V6 level is of great importance in thyroid cancer，and the serum CD44V6 level can be serve as significant pre-operation evaluation.

[Key words] CD44V6;Thyroid cancer

目前，國內外對甲狀腺癌的研究多集中在對標本的檢驗，對于血清中腫瘤分子標記物的檢測還較少。白細胞分化抗44變異型(CD44V6)作為有價值的腫瘤分子標記物，進入了研究視線，它是一族與免疫相關的膜整合糖蛋白多形性家族，參與細胞基質的黏附、淋巴細胞的激活和靶向及腫瘤的生長和轉移[1]。在本研究中，對甲狀腺腫瘤患者血清中CD44V6的水平進行檢測，旨在探討其與甲狀腺癌的關系。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇山西省腫瘤醫院頭頸外科2008年5月～2009年5月住院患者100例，男20例，女80例。年齡19～60歲，平均45歲。病理類型:甲狀腺良性腫瘤50例，甲狀腺癌惡性腫瘤50例(其中甲狀腺乳頭狀癌40例，濾泡狀腺癌6例，髓樣癌4例)。患者入院后頸部B超檢查證實有甲狀腺結節，并常規檢查除外高血壓、冠心病、腦血管意外、糖尿病、肺結核和其他系統腫瘤，近6個月內有手術史者不在本研究入選之內。

1.2方法

受試者過夜禁食12h后，清晨空腹狀態下，經無菌靜脈采血程序，抽取肘靜脈血3mL，所有患者均術前抽血。室溫靜置30min后，2000r/min離心15min，分離血清，取1.5mL置于-70℃冰箱保存以備測定CD44V6，所有血清統一編號保存，各項指標均統一標準，一批完成測定。

采用酶聯免疫法(ELISA)測定CD44V6含量。CD44V6試劑盒購自美國RB公司。按試劑盒說明書進行操作，使用酶標儀檢測。具體步驟如下:實驗前把凍存的血樣從-20℃的低溫冰箱取出，徹底融化備用，所有試劑都平衡至室溫(20～25)℃再開始試驗。血清樣品稀釋100倍(5μL血清500μL樣品稀釋液)，標準品不稀釋。濃縮洗滌液(20×)用雙蒸水稀釋1×(至500mL)。在反應板中分別加入5μL標準品和5μL已稀釋血清，輕輕混勻10s。每孔加入200μL Anti-CD44V6 Biotin，輕輕混勻30s，37℃溫育30min。反復洗滌反應板5次，甩盡板內液體，用洗滌液洗滌反應板，并去除水滴(用厚疊吸水紙拍干)。在反應孔加入200μL HRP，輕輕混勻10s，37℃溫育30min。反復洗滌反應板5次，甩盡板內液體，用洗滌液洗滌反應板，并去除水滴(用厚疊吸水紙拍干)。每孔加入100μL TMB顯色液，輕輕混勻10s，37℃溫育30min。每孔加入100μL終止液，輕輕混勻30s，15min內在酶標儀450nm處讀OD值。以OD值為縱坐標，以標準品濃度為橫坐標，繪制標準曲線。每個標準品和標本的OD450值減去零孔的OD450值為實際值。通過標本OD450值在標準曲線上查出其濃度。CD44V6(ng/mL)=主標準曲線上查出的濃度×100%。

1.3統計學分析

選用SPSS13.0統計軟件，計量資料以(χ±s)表示，采用t檢驗，組間比較計數資料以率表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

甲狀腺癌組血清中CD44V6和對照組良性結節患者比較，甲狀腺癌組高于甲狀腺良性腫瘤組，差異有統計學意義(P<0.01)。同時，在甲狀腺癌的患者中，術前伴有淋巴結轉移的甲狀腺癌患者血清中CD44V6水平顯著高于不伴有淋巴結轉移的甲狀腺癌患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

3討論

CD44V6與甲狀腺癌:CD44是一族與免疫相關的膜整合糖蛋白多形性家族，參與細胞基質的黏附、淋巴細胞的激活和靶向、腫瘤的生長和轉移。CD44V6蛋白屬表面黏附分子，主要參與細胞-細胞、細胞-基質間的特異性粘連過程。CD44V6是最早發現與腫瘤轉移有關的CD44的變異體，它與腫瘤侵襲、轉移有關。

CD44V6與甲狀腺腫瘤:腫瘤細胞在細胞外基質(ECM)中活躍的遷移是腫瘤浸潤轉移的必要條件[2]。CD44V6參與甲狀腺腫瘤的浸潤和轉移的機制有:CD44通過胞外區肽鏈與相應配體的結合和黏附，這種黏附作用因為CD44v轉錄過程中異常剪接表達CD44V6而發生改變;CD44V6介導與異型細胞配體結合使腫瘤細胞的黏附性增強而易侵入基底膜和ECM;CD44s介導的同型細胞間的黏附受損，腫瘤細胞去黏附能力增高。CD44還通過其胞內肽鏈和胞內側連接蛋白結合，與細胞骨架發生相互作用，影響癌細胞的骨架構象和分布，從而影響了癌細胞的極性和增加了細胞的運動能力。另外CD44V6也可能通過與配體的相互作用影響細胞內信號轉導，改變癌細胞的生物學特性。國內研究顯示[3]甲狀腺癌中CD44V6陽性率為64%(32/50)，在淋巴結轉移組及無轉移組分別為76.9%(20/26)和50.0%(12/24)，二者比較有顯著差異性(P<0.05)。這表明CD44V6與甲狀腺癌的頸淋巴結轉移密切相關，說明在甲狀腺乳頭狀腺癌的異常分化過程中CD44V6陽性細胞也象淋巴細胞歸巢一樣，模擬淋巴細胞的行為向淋巴結轉移。國外研究Gunt hert等[4]在1991年用單克隆抗體技術發現，具有v6外顯子編碼的功能區僅在正常細胞株表達，在非轉移細胞株和正常組織中不表達，并且通過其穩定轉染可使非轉移腫瘤細胞株轉變為快速擴散的轉移性癌細胞。Ermak等[5]報道CD44V6與甲腺癌有密切關系，并認為CD44V6是甲狀腺濾泡狀細胞異常的生長標志。甲狀腺癌多以頸淋巴結轉移為主，血行轉移比較少見，這可能是由于甲狀腺癌細胞通過某些因子的修飾后，在淋巴細胞內獲得了生長優勢。

本研究結果顯示，甲狀腺癌組患者血清CD44V6水平顯著高于甲狀腺良性腫瘤組患者血清中CD44V6水平(P<0.01)。甲狀腺癌伴有淋巴結轉移患者血清CD44V6含量與不伴有淋巴結轉移患者比較，差異有統計學意義(P<0.05)。提示血清中CD44V6的水平與甲狀腺癌的形成及發展過程有關，對甲狀腺癌和甲狀腺良性腫瘤的鑒別有意義，且與甲狀腺癌的浸潤轉移有關。本實驗中淋巴結轉移組CD44V6表達水平明顯高于無淋巴結轉移組，它的值越高越有理由認為甲狀腺癌已經轉移或者會發生轉移，可以幫助醫生較早對患者手術的范圍及是否需要預防性清掃作出判斷。

甲狀腺癌的發生與其他惡性腫瘤一樣存在著機體免疫紊亂，本課題在綜合分析了國內外文獻的基礎上，將密切關聯腫瘤的標志物CD44V6應用于甲狀腺癌的研究。本組資料證實，在甲狀腺腫瘤患者的血清中，高水平的CD44V6含量與甲狀腺癌有關。在甲狀腺癌患者的血清中，高水平的CD44V6含量與甲狀腺癌是否伴淋巴結轉移有關。選擇CD44V6進行血清檢測，目標明確，方法簡單，術前即可獲得結果，為診斷和治療甲狀腺癌提供了一種可靠的血清學指標。

[參考文獻]

[1] 張健. 分子腫瘤標記物在甲狀腺癌診斷中的意義[J]. 中國實用內科雜志，2007，27(17):9.

[2] Cichy J， Pure E. The liberation of CD44[J]. J Cell Biol， 2003， 161(5):839-843.

[3] 賞金標，劉愛華，孫文勇，等. CD44V6在甲狀腺乳頭狀腺癌中的表達及意義[J]. 耳鼻咽喉-頭頸外科，2000，7(4):223-225.

[4] Guther U，Hofmann M，Rudy W，et al. A new variant of glycoprotein CD 44 confer metastatic potential to rat carcionma cell[J]. Cell，1991， 65:13-24.

[5] Ermak G，Jrnnings T，Robinson L，et al. Resticted patterns of CD44 variantexonexpressioninhuman papillary thyroid carcionma[J]. Cancer Res，1996，56(5):1083.

(收稿日期:2010-01-05)