康復訓練對腦梗死患者血清中血管內皮生長因子表達的影響

摘要： 目的：探討腦梗死患者康復訓練后血清中血管內皮生長因子表達的影響。方法： ①研究對象為本院神經內科2007年6月～2007年10月收治的腦梗死患者78名，其中男48名，女30名，年齡40～65歲，平均(58.33±7．66)歲。健康體檢者(正常組)：26名，其中男16名，女10名，年齡40～62歲，平均(56.43±6．56)歲，并且符合排除標準除外影響VEGF的相關因素。②將23名藥物治療的同時進行功能康復訓練的（被動運動）腦梗死患者分為康復組，而26名只進行藥物治療的腦梗死患者分為治療組。康復患者均由康復醫師進行被動訓練，每天30-40分鐘。③住院后第1天采清晨空腹肘靜脈血2～3 mL，并于住院第7、15 d各采血1次；正常組采血1次。血清VEGF的測定采用雙抗體夾心酶聯免疫分析(ELISA)法檢測。結果：同一組間不同時間點的比較 急性腦梗死患者第一天時VEGF開始表達，第7天時其含量達到一定高峰，之后表達開始下降。康復組在第1天、第7天、第15天VEGF的濃度不同時間點比較有明顯差別(P < 0.05)。治療組在第1天、第7天、第15天VEGF的濃度不同時間點比較有明顯差別(P<0.05)。同一時間點不同組間的比較。急性期腦梗死患者與正常人比較血清中VEGF無明顯差別(P > 0.05)。在第7天，康復組與治療組患者血清中VEGF含量均升高到一定濃度，經單因素的方差分析無明顯差別(P > 0.05)。在第15天所有腦梗死患者的血清中VEGF含量明顯下降，而康復組患者經14天的康復訓練，雖然VEGF含量下降但仍高于未經康復訓練的治療組，兩組間有顯著差異(P < 0.05)。血清VEGF的含量與ACI組神經功能評分的關系。血清VEGF的含量在神經功能評分輕、中、重度3組之間差異，其中神經功能評分重度患者的血清VEGF明顯高于輕度與中度(P < 0.001)。結論：康復訓練能促使腦梗死患者血清中VEGF的表達。檢測VEGF水平對判斷病情的輕重可能有意義。

關鍵詞： 血管內皮生長因子 腦梗死 神經保護 康復訓練

The experiment on functional recovery and expression of VEGF in cerebral infarction patient after rehabilitative training

Cui Yong Huang Jingsheng Wu Guang et al.

Abstract:Objective:To approach the experiment on functional recovery and expression of VEGF in cerebral infarction patients after rehabilitative training.Methods: ①The object of investigations are 78 cerebral infarction patients in our hospital of department of nerve.There are 48 men and 30 women.The patients of average age is (58.33±7．66) years.②Disparting 23 cerebral infarction patients for drug treatment who are rehabilitative training (passive exercise)at the same time is rehabilitative group，and another 26 cerebral infarction patients who are only for drug treatment is treatment group.Rehabilitative patients are passive exercised by physiatrician 30-40 minute everyday.③The patients are got the blood of ulnar vein for 2～3 ml when they were in hospital and get the blood in the same way at the seventh and fifteenth day;The normal group get blood for only once.The measure of VEGF adopt enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).Results:①Compared with different time in the same group:VEGF began express in the acute cerebral infarction patients at the first day，the content achieved a certainty peak at the seventh day，subsequently the express began to descend.The density of VEGF were compared with different time in the rehabilitative group at the first、the seventh and the fifteenth day，there was statistically significant difference between them (P < 0.05).There was same result in the treatment group at the first、the seventh and the fifteenth day，(P < 0.05).②Compared with different group in the same time:At the fifteenth day，Although the density of VEGF obviously descended in the all cerebral infarction patients of blood serum，the patients of the density of VEGF in the rehabilitative group were still higher than the patients who were not rehabilitative training，there was statistically significance between them，(P < 0.05).③The relation between the density of VEGF in the blood serum and grading the nerves of function in the cerebral infarction patients:There was obviously statistically significant difference in the density of VEGF among mild、moderate and severity，among which the severity’s content of VEGF is obviously higher than the mild’s and the moderate’s (P < 0.001). Conclusion:①Rehabilitative training can promote the expression of VEGF in the blood serum of cerebral infarction patients.②To detect the level of VEGF might be significant to estimate if the state of an illness is mild or severity.

Keywords:Vascular endothelial growth factor Cerebral Infarction;Neuroprotective effect Rehabilitative training

【中圖分類號】R49【文獻標識碼】A 【文章編號】1008-1879(2010)11-0001-02

血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)又叫血管調理素(vasculotropin)是新近發現的一種生長因子^［3］，具有促內皮細胞分裂的作用，可以促進血管的生長和側支循環的建立。最近VEGF基因已克隆出來，有人應用重組VEGF給冠狀動脈^［4］和下肢動脈閉塞的動物血管內持續灌注14天，證明可以促進血管的新生和側支循環的建立，有效地防治心肌梗塞和閉塞性血管病^［5，6］。在腦缺血發生時，VEGF對神經系統具有多重保護作用，涉及血管形成、促進神經發生、直接的神經營養和神經保護作用等多種機制。康復功能訓練可增加大腦的血液循環、改善腦缺血、促進腦組織的代償、恢復，同時可使VEGF表達上調，而促進微血管新生。

本實驗通過對23例腦梗死患者進行康復訓練后測定VEGF，并和26例非康復訓練腦梗死患者的血清作對照，初步探討康復訓練對腦梗死患者血清中血管內皮生長因子表達的影響。并對55例腦梗死患者在不同時間進行神經功能評分及測定血清中血管內皮生長因子的含量，比較輕、中、重度3組之間差異，以此說明VEGF的含量與腦缺血損傷程度關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象。為本院神經內科2007年6月～2007年10月收治的腦梗死患者75名，其中男45名，女30名，年齡40～65歲，平均(58.33±7．66)歲。

1.2 納入標準：①發病在24 h以內；②診斷符合1995年中華醫學會第4屆全國腦血管病學術會議修訂的《各類腦血管病的診斷要點》中腦梗死的診斷標準^［1］。③經顱腦CT或MRI掃描確診。排除標準：①以前發生過腦卒中的患者；②3個月內有腦部外傷史的患者；③有心肌梗死、腎臟及肝臟疾病的患者；④有腫瘤疾病的患者。健康體檢者(正常組)：26名，其中男16名，女10名，年齡40～62歲，平均(56.43±6．56)歲，并且符合排除標準除外影響VEGF的相關因素。

1.3 主要試劑。

血管內皮生長因子（VEGF）測試盒：美國ADL公司生產

南京建成生物工程研究所提供。

1.4 主要實驗儀器。

酶標儀：芬蘭 Denley Dragon公司生產，MK2型。

高速離心機：德國Heraeus公司生產，PTCO型。

超低溫冰箱：北京三洋公司生產，MPF-2AT型。

1.5 方法。

1.5.1 研究對象分組。

將23名藥物治療的同時進行功能康復訓練的（被動運動）腦梗死患者分為康復組，而26名只進行藥物治療的腦梗死患者分為治療組。康復患者均由康復醫師進行被動訓練，每天30-40分鐘。55名未進行康復訓練的腦梗死患者分為ACI組，給予神經功能評分。

1.5.2 康復訓練。

從早期開始進行關節活動的訓練，不僅可以維持關節正常的活動范圍，還可以有效的防止肌肉廢用性萎縮的發生，并可以達到促進全身機體恢復的作用。在急性期可做比最大活動范圍略小的被動運動，具體的被動活動范圍可參考下列標準：

肩關節：屈曲：0°～ 90°；

外展：0°～ 90°；

外旋：0°～ 30°。

肘關節：屈曲：20°～ 120°。

前臂：90°旋后位 ～ 中立位。

下列一些關節和肢體比較容易引起變形和攣縮，必須特別加以注意。

上肢——肩關節：內收、外旋。下肢——髖關節：屈曲、內收、外旋。

肘關節：屈曲。膝關節：屈曲。

腕關節：屈曲。踝關節：伸展。

指關節：屈曲（有時伸展）。

1.5.3 神經功能評分：改良愛丁堡+斯堪的那維亞卒中量表。

1.5.4 標本采集。

住院后第1天采清晨空腹肘靜脈血2～3 mL，并于住院第7、15 d各采血1次；正常組采血1次。標本應清澈透明，懸浮物應離心去除，避免溶血和高血脂標本；所有樣本以無菌試管留取，不抗凝，室溫放置待凝固后，用離心機以3 000 r#8226;min 離心10 min，分離血清，置于（-80℃）超低溫冰柜內保存待測。

1.5.5 標本檢測。

血清VEGF的測定采用雙抗體夾心酶聯免疫分析(ELISA)法檢測，試劑盒由美國 Adlitteram Diagnostic Laboratories (ADL)有限公司生產，南京建成生物工程研究所提供。操作步驟嚴格按照說明書上要求操作，最后在酶標儀上進行測定A450值。繪制標準曲線，以標準品濃度作橫坐標，A值作縱坐標，以平滑線連接，各標準品的坐標點。通過標本的A值可在標準曲線上查出其濃度。同時行入院的常規檢查：血生化、血常規、纖維蛋白原等項目。

1.6 統計分析。

所有數據應用spss11.5軟件進行統計分析，數據均采用X±S.E.M 表示，兩樣本之間比較采用t檢驗，P<0．05為差異有統計學意義。多組間比較應用單因素的定量資料的方差分析，P<0．05差異均有統計學意義。

2 結果

2.1 同一組間不同時間點的比較。急性腦梗死患者第一天時VEGF開始表達，第7天時其含量達到一定高峰，之后表達開始下降。康復組在第1天、第7天、第15天VEGF的濃度不同時間點比較(P < 0.05)說明有明顯差別。治療組在第1天、第7天、第15天VEGF的濃度不同時間點比較(P < 0.05)亦說明有明顯差別。見表1。

2.2 同一時間點不同組間的比較。急性期腦梗死患者與正常人比較血清中VEGF(P > 0.05)無明顯差別。在第7天，康復組與治療組患者血清中VEGF含量均升高到一定濃度，經單因素的方差分析(P > 0.05)說明亦無明顯差別。在第15天所有腦梗死患者的血清中VEGF含量明顯下降，而康復組患者經14天的康復訓練，雖然VEGF含量下降但仍高于未經康復訓練的治療組(*P < 0.05)，兩組間有顯著差異，有統計學意義。見表2、圖2。

2.3 血清VEGF的含量與ACI組神經功能評分的關系 血清VEGF在神經功能評分輕、中、重度3組之間差異有顯著統計學意義，其中神經功能評分重度患者的血清VEGF含量明顯高于輕度與中度(P < 0.001)。見表3。說明VEGF的含量與腦缺血損傷程度有關，提示檢測VEGF水平對判斷病情的輕重可能有意義。

3 討論

血管再生是一個極其復雜的過程，涉及內皮細胞分裂、血管基底膜及細胞外基質的降解和內皮細胞遷移等；新血管的形成來源于先前存在的血管的內皮細胞增殖，而內皮細胞增殖有賴于VEGF的刺激^［7］。VEGF為分泌性蛋白，作用于特異性受體，從而保護腦毛細血管內皮細胞，防止毛細血管消失，同時刺激內皮細胞增殖，血管新生，神經功能迅速恢復^［8］。新近的研究表明，VEGF還可通過抑制腦缺血后神經細胞凋亡、調節離子通道、促進神經發生、直接神經營養等機制促進神經功能恢復^［9］。本次實驗研究了血清VEGF的含量與ACI組神經功能評分的關系，血清VEGF在神經功能評分輕、中、重度3組之間差異有顯著統計學意義，其中神經功能評分重度患者的血清VEGF明顯高于輕度與中度。說明VEGF的含量與腦缺血損傷程度有關，提示檢測VEGF水平對判斷病情的輕重可能有意義。

腦缺血后血流增加可誘導VEGF的大量表達^{［10，11］}，運動康復訓練具有改善側枝循環、增加腦缺血后腦血流量的作用，并激活血管新生，新生血管形成可在一定程度上減輕神經功能的缺失，微血管新生的范圍與程度直接關系到缺血邊緣區血流的改善，影響神經元生理功能的恢復。從而決定了患者的預后，尤其是在梗死周圍半暗帶中新生血管的數量與中風患者的存活率直接相關^［13］。本次實驗研究表明，急性期腦梗死患者與正常人比較血清中VEGF無明顯差別。在第7天，康復組與治療組患者血清中VEGF含量均升高到一定濃度，但經單因素的方差分析無明顯差別。在第15天所有腦梗死患者的血清中VEGF含量明顯下降，而康復組患者經14天的康復訓練，雖然VEGF含量下降但仍高于未經康復訓練的治療組。

大腦重塑與功能恢復之間的關系在橫斷面研究及隊列研究中均有所深入。近來研究表明，運動系統通過殘存神經元輸出運動指令來完成自身的重塑，卒中后皮質興奮性的改變更為運動系統的修復提供了良好基礎^［14］。這對保證幫助運動技能學習的那部分神經功能區的完好無損尤為重要。豐富康復訓練是促進大腦樹突生長的一個積極因素。豐富康復訓練能促進大鼠缺血再灌注腦損傷后功能的恢復，并加強了損傷對側大腦皮層神經元的可塑性改變，以上作用可能是多種積極因素綜合作用的結果。大腦皮層缺血或局灶性、創傷性損傷可作為一種刺激引起大量神經元及膠質細胞的結構和功能發生變化，引起一定的自發性功能恢復；運動訓練可加強這種可塑性改變和功能的恢復。

總之，腦缺血后血流增加可誘導VEGF的大量表達。運動康復訓練具有改善側枝循環、增加腦缺血后腦血流量的作用。因此從理論上講，具有誘導VEGF表達的可行性。這樣患者血清中VEGF的含量增加，就更能發揮VEGF促進新生血管形成，神經保護，神經生長的作用，更快的完成腦結構重塑的過程。及時恢復缺血區的血供，使腦組織的損傷盡最大可能的修復，最終達到患者康復的目的。

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