正交試驗優選醋制青皮的炮制工藝

李毓群

(浙江省臺州市第一人民醫院 ，浙江 臺州 318020)

正交試驗優選醋制青皮的炮制工藝

李毓群

(浙江省臺州市第一人民醫院 ，浙江 臺州 318020)

目的優選醋制青皮的最佳炮制工藝。方法以橙皮苷的含量為考察指標，考察加醋量、燜潤時間、炒制溫度、炒制時間對指標成分含量的影響。結果最佳炮制工藝為加10%醋，燜潤時間3 h，炒制溫度200℃，炒制時間8 min。結論提取工藝設計合理、結果可靠，為優化醋制青皮的最佳炮制工藝提供了理論依據。

醋制青皮;正交試驗;炮制工藝

青皮為蕓香科植物橘及其栽培變種的干燥幼果或未成熟的果皮，具有疏肝破氣、消積化滯之功效，主治胸肋疼痛、疝氣、食積、乳腫、乳核等癥。中醫認為，青皮有辛烈之性，故多用炮制品，青皮傳統炮制主要是用醋制。2010年版《中國藥典(一部)》及2005年版《浙江省中藥炮制規范》將醋制青皮作為法定炮制方法。全國有20多個省市地區都用醋制品，查閱歷代炮制文獻及生產實地調查，雖然都為醋制，但實際操作不一致，導致作為療效指標的炮制品中橙皮苷含量差異很大，而長期以來又沒有具體探究原因。筆者通過正交試驗對醋青皮炮制工藝進行優選，為臨床用醋制青皮提供最合理的炮制方法，以利于青皮在成藥和制劑中的進一步開發和利用。

1 儀器與試藥

Agilent1200型高效液相色譜儀及其工作站;炒藥鍋等炮制設備。甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純;橙皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為110721－200618);青皮(產自浙江溫州，批號為20090811)，所用藥材均購自臺州醫藥有限公司，經臺州市食品藥品檢驗所鑒定，均符合2005年版《中國藥典(一部)》標準。

2 方法和結果

2.1 橙皮苷含量測定

2.1.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Eclipse XDB －C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);檢測器:VWD;流動相:甲醇－水(25∶75);流速為1.0 mL/min;柱溫:30 ℃;檢測波長:284 nm;進樣量:10 μL。

2.1.2 溶液制備

精密稱取橙皮苷對照品0.005 10 g，加甲醇至50 mL，溶解，搖勻，即得對照品溶液。取醋青皮細粉約0.2 g，精密稱定，取50 mL置量瓶中，加甲醇30 mL超聲處理30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.1.3 方法學考察

系統適用性試驗:分別取對照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀。結果表明，供試品與對照品溶液色譜均在相同保留時間內出現吸收峰，理論板數大于8 000。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:吸取對照品溶液 1，5，10，15，20，25 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積Y為縱坐標、進樣量 X(μg)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程 Y=1 824 033.61X －13 938.42，r=0.999 9(n=6)。結果表明，橙皮苷進樣量在0.102～2.55 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液10 μL，進樣5次。結果平均峰面積為1 769 434，RSD=1.0%(n=5)，表明方法精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品(批號為20090811)溶液，分別于制備后 0，3，6，9，12 h 時進樣，測定。結果平均峰面積為 1 921 436，RSD=0.3%(n=5)，表明供試品溶液在12 h內穩定。

重現性試驗:取批號為20090811的樣品，依法制備供試品溶液并測定含量。結果平均含量為8.76%，RSD=1.60%(n=5)，表明方法重現性良好。

加樣回收試驗:稱取已測知含量的樣品約0.1 g精密稱定，加入橙皮苷對照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定，計算回收率。結果見表1。

表1 橙皮苷加樣回收試驗結果(n=5)

2.2 正交試驗

2.2.1 因素水平確定

該藥材的主要有效成分為橙皮苷，故以橙皮苷的含量為考察指標，對醋制青皮炮制工藝中的加醋量(因素A)、燜潤時間(因素B)、炒制溫度(因素C)、炒制時間(因素D)進行考察，每個因素選取3個水平，按L9(34)正交表進行正交試驗。因素水平見表2。

表2 炮制工藝正交試驗因素水平表

2.2.2 正交試驗結果

根據正交設計表，共進行9次試驗。結果見表3及表4。直觀分析顯示，A1B3C3D3提取工藝最佳，但通過方差分析發現B因素無顯著性差異，其余3個因素均有非常顯著性差異(P＜0.01)。結合經濟效益、生產條件等因素，確定最佳工藝為A1B3C3D3，即加10%醋，燜潤時間3 h，炒制溫度200℃，炒制時間8 min。

2.2.3 最佳工藝驗證試驗

采用A1B3C3D3提取工藝，測定同一溫州產3批樣品中橙皮苷的含量。結果見表5。

表3 正交試驗設計及試驗結果

3 討論

中醫傳統用青皮的習慣都是用醋制品，但歷代對其炮制品質量的認識均僅限于文獻記載。本研究結果顯示，加醋量對結果影響最大。但對于加醋量的多少，筆者僅根據經驗選定了3個水平，尚有待進一步細化考察。其他幾個因素亦然。

試驗中，樣品和炒制時的溫度均勻度對試驗結果的誤差很重要。通過正交試驗優選出的最佳醋青皮炮制工藝，可規范臨床用醋制青皮時的炮制方法，有利于青皮在成藥和制劑中的進一步開發和利用。

表4 方差分析表

表5 樣品含量測定結果(n=3)

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[2]李兆奎，侯太勇，王 黎，等.補腎健骨膠囊的提取工藝研究[J].中國中醫藥科技，2008，15(2):126 －127.

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TQ461;R282.71

A

1006－4931(2011)10－0049－02

2010－12－03;

2011－03－30)