木芙蓉根提取物的體外抑菌作用研究

曾曉芳，黃 顯，游楓慧

(福建醫科大學附屬協和醫院藥學部，福建 福州 350001)

木芙蓉根提取物的體外抑菌作用研究

曾曉芳，黃 顯，游楓慧

(福建醫科大學附屬協和醫院藥學部，福建 福州 350001)

目的比較木芙蓉根不同提取物的體外抑菌作用。方法采用不同溶劑提取藥材，用連續稀釋法進行體外抑菌活性研究。結果木芙蓉根不同提取物對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌和表皮葡萄球菌均有一定抑制作用。結論木芙蓉根乙酸乙酯提取物抑菌作用最強。

木芙蓉根;提取物;抑菌作用

錦葵科木槿屬植物木芙蓉(Cottomrose Hibiscus)性味微辛、涼，具有清熱解毒、消腫排膿、涼血止血之功效、內用治療肺熱咳嗽、月經過多、白帶，外用治癰腫瘡癤、乳腺炎、淋巴結炎、腮腺炎、燒燙傷、毒蛇咬傷、跌打損傷[1]。木芙蓉在我國分布廣泛，藥材資源豐富，近年來對其研究日益增多，尤其是在臨床應用方面有了較大發展[2]。目前關于木芙蓉葉的藥理作用研究較多，但尚未發現對木芙蓉根的研究報道。本試驗中，選取木芙蓉根，用不同的試劑對其進行提取，并觀察各自的抑菌效果，旨在為木芙蓉植物資源的利用與開發提供一定的依據，報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

儀器和試劑:YXQ－LS－50S1型立式壓力蒸汽滅菌器(上海博迅實業有限公司醫療設備廠);DHP 2000型電熱恒溫培養箱(天津市華北實驗有限公司);水平層流凈化工作臺(蘇州潔凈技術研究所制造);RE－52AA型旋轉蒸發器(上海亞榮生化儀器廠)。瓊脂粉和蛋白胨(廣州海洋生物有限公司);化學試劑均為國產分析純。

藥材:木芙蓉根購自福建古田，按傳統方法加工干燥后粉碎，備用。

菌種:金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC29213、大腸埃希菌(Escherichia coli)ATCC29523、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC27853、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)由福建醫科大學附屬協和醫院微生物實驗室提供。

1.2 方法

1.2.1 營養瓊脂培養基制備

按2005年版《中國藥典(一部)》規定比例加入適量瓊脂，調節其 pH，使滅菌后 pH 為(7.2±0.2)，在 115 ℃滅菌 30 min，無菌操作倒入平板，培養過夜，無菌生長，備用。

1.2.2 菌液制備

取試管若干，裝入融化的培養基滅菌后擺成斜面。在無菌條件下用劃線法將供試菌種移接入相應的斜面培養基上，每個菌種活化多支，放入培養箱中，37℃下培養18～24 h。取出，置4℃冰箱中冷藏。取出活化好的菌種，無菌操作，用適量的滅菌生理鹽水洗入已滅菌的干凈試管中，根據試驗的需要采用比濁法配制成含菌數為107～108CFU/mL的菌懸液，備用。

1.2.3 供試液制備

醇提物制備:精確稱取木芙蓉根粉末100.57 g，置索氏提取器中。用8倍量70%乙醇在85℃左右水浴中冷凝回流3 h，過濾，收集濾液。回收的濾渣用6倍量70%乙醇以相同方法提取2次，每次2 h，收集濾液。合并3次收集的濾液，置旋轉蒸發儀中進行濃縮，溫度控制在65℃左右，濃縮至約150 mL時將提取物移至蒸發皿，置水浴上繼續蒸發至膏狀，再置干燥箱中，干燥至恒重。

萃取物制備:取一定量提取物，配制成約100 mL的混懸液，加入石油醚除去色素、油脂等雜質。萃取多次，直到石油醚層透亮且顏色不再變淺為止。將水相均分成2份，分別用乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，每次萃取劑的用量為溶液量的1.5倍。收集萃取的溶液，置旋轉蒸發儀上濃縮，濃縮至約100 mL時移至蒸發皿，置水浴上繼續蒸發至膏狀，再置干燥箱中，干燥至恒重。

水提物制備:精確稱取木芙蓉根粉末100.21 g，用8倍量的蒸餾水煎煮3 h，過濾，收集濾液。回收的濾渣用6倍量的蒸餾水煎煮2次，每次2 h，收集濾液。合并3次收集的濾液，置旋轉蒸發儀中進行濃縮，濃縮至約150 mL時將提取物移至蒸發皿，置水浴上繼續蒸發至膏狀，再置干燥箱中，干燥至恒重。

供試液制備:取適量木芙蓉根乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物及水提物，用滅菌注射用水配制成含生藥1 g/mL的溶液，滅菌備用。臨用前再用滅菌注射用水稀釋成質量濃度為1 000，500，250，125，62.5，31.25，15.62，7.81 g/L 的溶液。

1.2.4 抑菌試驗[3－4]

吸取上述各種藥物溶液3 mL，置無菌平皿中。將營養瓊脂培養基加熱融化，加入12 mL培養基于無菌平皿中迅速混勻、冷卻，制成含不同質量濃度藥 物 (200，100，50，25，12.5，6.25，3.125，1.562 g/L)的營養瓊脂平板，用筆將藥物平板分為4個區，分別用接種環將上述試驗菌點種于藥物平板上，于37℃恒溫培養16～18 h。以不加提取物溶液的培養基為陰性對照。以每種藥物對4種菌分別做3次重復試驗。觀察藥物對測試菌生長的抑制作用，記錄最低抑菌濃度(MIC)值。

2 結果

結果見表1及表2。

表1 木芙蓉根各提取物抑菌作用試驗結果

表2 木芙蓉根各提取物對試驗菌的 MIC值(g/L)

3 討論

固體培養基連續稀釋法可同時測定大批菌株的MIC，且不受藥物顏色及混濁度的影響，適合于中藥制劑體外抗菌活性測定。

本試驗提取所得的藥液為顏色較深的中草藥制劑，若采用試管法則會因溶液顏色深而導致觀察結果不準確，若采用濾紙片法則會因中草藥擴散慢、抑菌作用弱而無法得到準確的抑菌質量濃度。為避免這些缺陷，因此，本試驗利用平板法。平板法穩定，比較適合于中草藥抑菌濃度的測定，但其缺點是無法測定提取物的最低殺菌濃度(MBC)。

本研究結果顯示，木芙蓉根提取物對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌都有一定的抑制作用;木芙蓉根醇提取物和各萃取物對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的抑制作用均優于銅綠假單胞菌和大腸埃希菌，且在藥物質量濃度相同時，木芙蓉根乙酸乙酯萃取物對上述4種細菌的抑制作用最強，木芙蓉乙醇提取物與木芙蓉根正丁醇萃取物的抑菌作用相似，而木芙蓉根水提物的抑菌作用最弱。

[1]中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準·中藥材(第1冊)[M].廣州:廣東科學技術出版社，1992:16.

[2]黃初貴，雷秀霞.木芙蓉軟膏治療癤、癰539例療效觀察[J].中草藥，1987，18(5):10.

[3]邊才苗.白花蛇舌草提取物的抑菌作用研究[J].時珍國醫國藥，2005，16(10):991.

[4]蔡宏亞，王澤平，何寧先，等.連續稀釋法研究淡紅忍冬體外抑菌作用[J].臨床和實驗醫學雜志，2007，6(9):155.

Study on Bacteriostasis In Vitro of Extracts from Cottomrose Hibiscus Roots

Zeng Xiaofang，Huang Xian，You Fenghui
(Department of Pharmacy，Affiliated Union Hospital，Fujian Medical University，Fuzhou，Fujian，China350001)

ObjectiveTo evaluate the bacteriostasis in vitro of extracts from Cottomrose Hibiscus roots.Methods The different solvents were adopted to extract Cottomrose Hibiscus roots.The bacteriostatic activities were tested by serial dilution method.Results The different extracts from Cottomrose Hibiscus roots had a certain inhibiting effects on the growth of Staphylococcus aureus，Escherichia coli，Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus epidermidis.Conclusion The antibacterial activity of the extract ethyl acetate(EtOAc)from Cottomrose Hibiscus roots is most powerful.

Cottomrose Hibiscus roots;extract;anti－bacterial activity

R285.5;R282.71

A

1006－4931(2011)02－0029－02

曾曉芳(1975－)，女，福建古田人，主管藥師，碩士研究生，從事臨床藥學工作，(電子信箱)zxfadr@126.com。

2010－01－14)