陳皮配方顆粒質量標準研究

羅文匯，李養學，孫冬梅，胥愛麗

(廣東省中醫研究所，廣東 廣州 510095)

陳皮配方顆粒質量標準研究

羅文匯，李養學，孫冬梅，胥愛麗

(廣東省中醫研究所，廣東 廣州 510095)

目的建立陳皮配方顆粒的質量標準。方法采用薄層色譜(TLC)法進行定性鑒別;運用傅立葉變換紅外光譜(FTIR)法進行檢驗;采用高效液相色譜(HPLC)法測定方中橙皮苷含量，色譜柱為 Agilent HC－C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，甲醇－醋酸－水(35∶4∶61)為流動相，流速為0.8 mL/min，柱溫為30℃，檢測波長為283.4 nm。結果用薄層色譜法檢出了方中的橙皮苷。紅外光譜法對陳皮配方顆粒所含基團進行了詳細分析。高效液相色譜法測定的橙皮苷進樣量線性范圍為0.676～4.056 μg，回歸方程為Y=600.759 62X－21.199，r=0.999 9，平均回收率為97.61%，RSD=0.80%(n=6)。結論所建立的方法簡便、準確、重現性好，可作為陳皮配方顆粒的質量控制方法。

陳皮配方顆粒;橙皮苷;質量標準

陳皮來源于蕓香料植物Citrus、reticulata、Blanco及其栽培變種的成熟果皮，采摘成熟果實，剝取果皮，曬干或低溫干燥即得。藥材分為“陳皮”和“廣陳皮”。廣陳皮常3瓣相連，形狀整齊，厚度均勻(約1 mm)，點狀油室較大;對光照視，透明清晰，質較柔軟;氣香，味辛、苦[1]。廣陳皮和陳皮均有理氣健脾、燥濕化痰之功效，可用于胸脹滿、食少吐瀉、咳嗽痰多[2]。歷代醫家憑藥用經驗認為，以廣陳皮品質為優。橙皮苷是陳皮的有效成分，屬黃酮類成分，對胃腸平滑肌既有興奮又有抑制作用，對支氣管平滑肌收縮有一定的抑制作用，且有抗菌、抗炎作用。經加工制成的陳皮顆粒現已用于臨床。為保證臨床用藥安全有效，提供生產、銷售、臨床使用過程中的質量監測手段，筆者對配方顆粒中的陳皮進行了薄層色譜鑒別和傅立葉變換紅外光譜檢驗，并采用高效液相色譜法對陳皮中的橙皮苷[3]進行了含量測定，報道如下。

1 儀器與試藥

Camag ATS4型薄層自動點樣儀(瑞士);Camag Reprostar 3型薄層色譜自動成像系統(瑞士);Mettler－Toledo XS205DU型電子分析天平(瑞士);Thermo Fisher Scientific 6700型傅立葉變換紅外光譜儀(美國)，譜圖處理使用OMNIC軟件;Agilent 1100型高效液相色譜儀(美國)，包括 DAD檢測器、四元梯度泵，軟件為 Agilent G2171BA數據處理軟件系統;YP－2型壓片機(上海山岳);DHG－9203A型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海精宏);硅膠G薄層板(浙江)、HWS－26型電熱恒溫水浴鍋(上海一恒)。甲醇為色譜純(Merk公司);KBr為光譜純(DHC);水為屈臣氏蒸餾水;其余試劑均為分析純;陳皮對照藥材(批號為120969－200507)、橙皮苷對照品(批號為110721－200613)購自中國藥品生物制品檢定所;陳皮中藥配方顆粒(批號分別為 0709139，0710107，0805101，0812079，0704053，廣東一方制藥有限公司)。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別[4]

取陳皮配方顆粒0.3 g，加甲醇10 mL，加熱回流20 min，濾過，取濾液5 mL，濃縮至約1 mL，作為供試品溶液。另取陳皮對照藥材3 g，加甲醇10 mL，同法制成對照藥材溶液。再取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點于同一以0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲醇－水(100 ∶17 ∶13)為展開劑，展開至 3 cm，取出，晾干，再以甲苯－乙酸乙酯－甲酸－水(20∶10∶1∶1)的上層溶液為展開劑，展開至約8 cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈下檢視(365 nm)。供試品溶液色譜中，在與對照藥材及對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點(見圖1)。

圖1 薄層色譜圖

2.2 傅立葉變換紅外光譜鑒別

2.2.1 供試品制備

取本品1～2 mg，加入120℃干燥4 h的KBr粉末約200 mg，于研缽中研磨、混勻，轉移到模具中，在低真空下用9.81 GPa左右的壓力，經1～2 min將樣品壓成透明的薄片[5]。壓片厚度約1～2 mm。

2.2.2 光譜測定

將上述樣品置傅立葉變換紅外光譜儀(DTGS檢測器，分辨率4 cm－1，掃描次數32次，掃描時實時扣除水和CO2的干擾)中，測定光譜范圍在4 000～400 cm－1之間。紅外光譜圖見圖2。

圖2 紅外光譜圖

2.2.3 測定結果

從圖2 A可看出，各批號樣品的紅外光譜基本相似，在533，580，615，766，817，833，865，1 024，1 078，1 149，1 237，1 371，1 417，1 517，1 619，1 747，2 930，3 400 cm－1處附近均有吸收峰。圖2 B顯示，樣品中含有無機磷化合物(朱紅色區域)、脂肪胺組[5](淺綠色區域)、脂肪族炔組(淺藍色區域)、脂肪族團體(粉紅色區域)及醇羥基官能團(深藍色區域)。

2.3 橙皮苷含量測定

2.3.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Agilent HC －C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 －醋酸 －水(35 ∶4 ∶61);流速:0.8 mL/min;檢測波長:283.4 nm;柱溫:30 ℃;進樣量:10 μL。在此條件下，色譜圖見圖 3。

圖3 高效液相色譜圖

2.3.2 溶液制備

精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，即得對照品溶液。取陳皮配方顆粒1 g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)80 mL，加熱回流2～3 h，棄去石油醚，藥渣揮干，加甲醇80 mL，再加熱回流至提取液無色，放冷，濾過，濾液置100 mL量瓶中，用少量甲醇分數次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.3.3 方法學考察

線性關系考察[6]:精密吸取質量濃度分別為 67.6，135.2，202.8，270.4，338.0，405.6 μg/mL 的對照品溶液，依法進樣測定峰面積，以峰面積(Y)對橙皮苷進樣量(X)進行線性回歸，回歸方程為Y=600.759 62X－21.199(r=0.999 9)。結果表明，橙皮苷進樣量在0.676～4.056 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液(67.6 μg/mL)適量，重復進樣6次。結果峰面積的RSD小于2%(n=6)，表明方法精密度良好。

穩定性試驗:精密吸取同一供試品溶液(批號為0812079)，分別于0，4，8，16，24 h時進樣，依法測定。結果橙皮苷峰面積的RSD小于2%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

重現性試驗:取同批樣品(批號為0812079)，依法制備供試品溶液并測定峰面積、計算含量。結果橙皮苷含量的RSD為0.34%(n=6)，表明方法重現性較好。

加樣回收試驗:取已知含量的樣品(批號為0812079)，分別精密加入一定量的橙皮苷對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，測定含量并計算回收率。結果見表1。

表1 橙皮苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.3.4 樣品含量測定

精密量取供試品溶液和對照品溶液各10 μL，進樣，按外標法以峰面積計算橙皮苷含量。結果批號為 0709139，0710107，0805101，0812079，0704053的樣品中橙皮苷含量分別為 27.697 0，27.785 8，27.536 0，27.624 9，27.409 9 mg/g。

3 討論

試驗過程中發現，用乙酸乙酯－甲醇－水(100∶17∶13)為展開劑展開，結果會產生干擾，用展開劑甲苯－乙酸乙酯－甲醇－水(20∶10∶1∶1)的上層溶液進行二次展開，方可排除干擾[7]。

用紅外光譜檢測配方顆粒時，從其基礎紅外譜圖解析可知，陳皮含有無機磷化合物、脂肪胺組、脂肪族炔組、脂肪族團體、醇羥基官能團，它們在譜圖上各具相應的吸收特征峰;另還可以利用陳皮的峰值表作為數據參考進行比對。因此，傅立葉變換紅外光譜技術可為陳皮的檢驗提供簡便、直觀的方法和手段。

預試驗中曾嘗試過Agilent Eclipse XDB－C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)及流動相甲醇 －水(35 ∶65)，結果柱子基線不易平穩，橙皮苷雖可檢出但峰形較差、拖尾。由于進樣溶劑甲醇的溶劑強度較流動相強得多，且橙皮苷在流動相的溶解度較甲醇小，進樣溶劑和流動相不匹配時可造成柱效下降[8]。加入酸后使流動相控制在低pH條件下[9]，所得色譜峰分離度高、峰形好。結果表明，高效液相色譜法的回收率、重復性、穩定性、精密度好，可用于陳皮配方顆粒的質量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:132.

[2]鄧超澄.陳皮不同炮制品化學成分分析[J].藥學研究，2000，17(4):60－61.

[3]吳愫青，葉 瑩，張 俊.HPLC測定不同產地陳皮橙皮苷的含量[J].中國現代中藥，2008，10(8):20 －22.

[4]翁雪萍，李蕙敏.藿香正氣膠囊的質量研究標準[J].中藥新藥與臨床藥理，2005，2(16):121 －124.

[5]周 欣，孫素琴，黃慶華.FTIR對不同產地陳皮的鑒別研究[J].光譜學與學譜分析，2007，12(27):2 453 －2 455.

[6]姜舜堯.HPLC法測定2種含陳皮中成藥中的橙皮苷的含量[J].中成藥，2001，23(8):612 －614.

[7]張明艷.香陳顆粒的薄層色譜鑒別[J].時珍國醫國藥，2006，17(7):1 261－1 262.

[8]Dolan JW.Method development， peak distortion，and interfering peak[J].LC·GC Asia Pacific，1999，2(2):16.

[9]Mouly P，Gaydou EM， Auffray A.Simultaneous separation of flavanone glycodsides and polymethoxylated flavones in citrus juices usingl iquidc hromatography[J].J Chromatogr A，1998，800:171 －179.

Study on Quality Standards for Dispensing Granules of Pericarpium Citri Reticulatae

Luo Wenhui，Li Yangxue，Sun Dongmei，Xu Aili
(Guangdong Provincial Institute of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou，Guangdong，China510095)

ObjectiveTo establish the quality standards for dispensing granules of pericarpium citri reticulatae.Methods The thin － layer chromatography(TLC)was adopted for qualitative identification，the Fourier transform infrared spectroscopy(FTIR)was used to test the dispensing granules of dried tangerine peel.Hesperidin was detected by HPLC.The chromatography column was Agilent Eclipse HC － C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)with methanol－ acetic acid － water(35 ∶4 ∶61)as the mobile phase.The flow rate was 0.8 mL/min，the column temperature was 30℃ and the detection wavelength was 283.4 nm.Results Hesperidin was detected by thin－layer chromatography.The groups contained in dispensing granules of pericarpium citri reticulatae were analyzed in detail by the infrared spectroscopy.The linear range of hesperidin was 0.676 － 4.056 μg and the regression equation wasY=600.759 62X－21.199，r=0.999 9.The average recovery rate was 97.61% ，RSD=0.80%.Conclusion The method is simple，accurate，reproducible，which can be used as the quality standards of dispensing granules of pericarpium citri reticulatae.

pericarpium citri reticulatae;hesperidin;quality standard

R284.1;R286.0

A

1006－4931(2011)02－0032－02

羅文匯，男，主管中藥師，中藥學碩士，從事中藥質量標準研究，(電子信箱)acid123@126.com。

2010－01－22;

2010－05－18)