反相高效液相色譜法測定潔白膠囊中沒食子酸含量

王 景，徐秀珍，夏文孝，李小萍

(1.寧夏多維藥業有限公司，寧夏 銀川 750101; 2.寧夏藥品檢驗所，寧夏 銀川 750100)

反相高效液相色譜法測定潔白膠囊中沒食子酸含量

王 景1，徐秀珍2，夏文孝1，李小萍1

(1.寧夏多維藥業有限公司，寧夏 銀川 750101; 2.寧夏藥品檢驗所，寧夏 銀川 750100)

目的建立測定潔白膠囊中沒食子酸含量的反相高效液相色譜法。方法以5C18－MS－Ⅱ柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)為固定相，甲醇－水－磷酸 (6∶94∶0.4)為流動相，檢測波長272 nm。結果沒食子酸進樣質量濃度在3.32～39.84 μg/mL范圍內與峰面積積分值線性關系良好，r=0.999 9(n=5);平均回收率為99.80%，RSD=2.50%(n=6)。結論該方法測定簡便、快速、靈敏、重現性好，可用于測定潔白膠囊中沒食子酸的含量。

反相高效液相色譜法;潔白膠囊;沒食子酸;含量測定

潔白膠囊為國家中藥保護品種，系由訶子、翼首草、丁香、肉豆蔻等中藥提取加工而成的復方制劑，具有健脾和胃、止痛止吐、分清泌濁的功效，用于治療胸腹脹滿、胃脘疼痛、消化不良、嘔逆泄瀉。原藥品標準收載于2005年版《中國藥典(一部)》，無含量測定項。為提高質量標準的可控性，筆者參考文獻[1－4]，采用反相高效液相色譜(HPLC)法測定潔白膠囊中沒食子酸的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜系統，Waters 2487型紫外檢測器;TU－1901型雙光束紫外可見分光光度計;BP211D型Sartorivs電子分析天平。沒食子酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為110831－200302);潔白膠囊及其陰性樣品(寧夏多維藥業有限公司);甲醇(色譜純，美國天地公司)，水(去離子水)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Waters 5 C18－MS－Ⅱ柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 －水 －磷酸 (6 ∶94 ∶0.4);流速:1.0 mL/min;檢測波長:272 nm;柱溫:室溫;進樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取經五氧化二磷減壓干燥器干燥24 h的沒食子酸對照品適量，加甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液，作為對照品溶液。取重量差異項下的本品內容物，研細，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇20 mL，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)45 min，放冷，濾過，濾液置25 mL容量瓶中，用甲醇洗滌殘渣和濾器，并入容量瓶中，再加甲醇稀釋至刻度;精密吸取2 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取除訶子外的其他藥材，按樣品處方比例及制備工藝制成缺訶子的制劑，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

系統適用性試驗:取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液，進行分析。結果見圖1，沒食子酸的保留時間約為11 min，與其他組分峰的分離度均大于1.5，陰性對照品溶液對測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密稱取沒食子酸對照品適量，加甲醇制成每1 mL含沒食子酸66.4 μg的對照品溶液。精密吸取對照品溶液0.5，1.5，3.0，4.5，6.0 mL，分別置 10 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，各精密吸取10 μL，分別注入液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積積分值為縱坐標、質量濃度為橫坐標繪制標準曲線，線性回歸方程為Y=37 622X－20 872，r=0.999 9(n=5)。結果表明，沒食子酸質量濃度在3.32～39.84 μg/mL范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

穩定性試驗:吸取同一供試品溶液 10 μL，分別于 0，2，4，8，12，24 h時進行測定。結果峰面積的RSD=1.27%(n=6)，表明供試品溶液在常溫下24 h內穩定性良好。

精密度試驗:精密吸取質量濃度為20 μg/mL的對照品溶液10 μL，連續進樣 6 次。結果峰面積的RSD=0.62%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:取同一批樣品6份，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定。結果沒食子酸平均含量為2.27mg/粒，RSD=1.7%(n=6)。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量(5.775 mg/g)的樣品6份，分別準確加入沒食子酸對照品溶液各2份，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定，計算回收率。結果見表1。

表1 沒食子酸加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

按供試品溶液制備項下方法分別制得3批供試品溶液，精密吸取 10 μL，依次進樣，測定，每批次測定3次，按測得的峰面積積分值取平均值，計算含量。結果見表2。

3 討論

考察了以甲醇－0.025 mol/L磷酸溶液(2∶98)、甲醇－水(13 ∶67)、0.2%甲醇的乙腈溶液 －0.1%三乙胺和 0.1%磷酸水溶液(1∶99)、甲醇 －四氫呋喃 －冰醋酸 －水(0.08 ∶0.64 ∶2 ∶97.28，v/v)、甲醇 －水－磷酸(6∶94∶0.4)為流動相時的效果，發現以甲醇－水－磷酸(6∶94∶0.4)為流動相較適宜，沒食子酸的峰形尖銳，分離度好，色譜分析15 min內即可完成。

采用二極管陣列檢測器檢測，發現供試品溶液色譜中的沒食子酸峰與對照品色譜峰均在272 nm波長有最大吸收，兩者紫外吸收光譜完全一致，陰性對照無干擾，因此選用272 nm為測定波長。

表2 樣品含量測定結果(n=3)

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:565.

[2]許乾麗，茅向軍，熊慧林，等.HPLC測定寧泌泰膠囊中沒食子酸的含量[J].中成藥，2001，23(9):641.

[3]周 萍.高效液相色譜法測定生訶子及炒訶子中沒食子酸含量[J].時珍國醫國藥，2001，12(4):291.

[4]陳秀勤，林 燕，康雙龍，等.反相高效液相色譜法測定蒙成藥八味清心沉香散中沒食子酸的含量[J].中國民族醫藥雜志，2003，9(4):43－44.

Determination of Gallic Acid in Jiebai Capsules by RP－HPLC

Wang Jing1，Xu Xiuzhen2，Xia Wenxiao1，Li Xiaoping1(1.Ningxia Duowei Pharmaceutical Co.，Ltd.，Yinchuan，Ningxia，China750101;2.Ningxia Institute for Drug Control，Yinchuan，Ningxia，China750100)

ObjectiveTo establish a RP － HPLC method for the determination of gallic acid in Jiebai Capsules.Methods To determine the gallic acid content by HPLC with the 5C18－MS－Ⅱ column (250 mm ×4.6 mm，5 μm)as the stationary phase.The mobile phase was methanol－ water－ phosphoric acid(6 ∶94 ∶0.4).The detection wavelength was 272 nm.Results The linear range of gallic acid was 3.32 －39.84 μg/mL，r=0.999 9(n=5).The average recovery rate was 99.81% ，RSD2.50%(n=6).Conclusion The method is fast，simple，sensitive and repeatable，which can be used to determine the gallic acid content in Jiebai Capsules.

RP－HPLC;Jiebai Capsules;gallic acid;content determination

R284.1;R286.0

A

1006－4931(2011)02－0041－02

王景(1967－)，女，高級工程師，研究方向為中藥新劑型與新藥，(電話)0951－6149306(電子信箱)wang.jing666@163.com。

2010－02－06;

2010－08－12)