大鼠急性腦出血后神經功能保護的實驗研究

張雋 楊子超 孫威王昆祥

大鼠急性腦出血后神經功能保護的實驗研究

張雋 楊子超 孫威王昆祥

原花青素(PC)是多酚類化合物，屬于生物類黃酮，是迄今為止最強有效的自由基清除劑之一。許多研究已經證明PC能通過多種途徑對神經細胞起到保護作用。本項目通過建立大鼠腦出血模型后給予PC治療，從而評價出血后PC的神經保護作用及其機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物分組 健康W istar大鼠，共40只，質量(250 ±30)g。按隨機分組原則分成假手術A組(10只)、腦出血B組(10只)、PC低劑量(50 mg/kg)治療C組(10只)及PC高劑量(200 mg/kg)治療D組(10只)。PC于術前給予灌胃，1次/d，連續1周，于術前1 h再灌胃1次。假手術組和腦出血組給予等量的生理鹽水灌胃。

1.2 動物模型的建立 大鼠用10%水合氯醛(300 mg/100 g)腹腔注射，暴露前囟，于前囟后0.2 mm，中線右3 mm處鉆孔，微量加樣器沿針孔垂直進針6 mm緩慢注入動物自體尾動脈血50ul。對照組只進針不注射。術后觀察神經癥狀和體征，24 h后取腦。

1.3 免疫組化染色 按照SABC試劑盒說明書進行。鼠抗Bcl-2、Bax和caspase-3多克隆抗體(Sigma公司)，工作濃度分別為1∶100、1∶100和1∶200。在400倍鏡下隨機取血腫周圍4個不重疊視野，計數caspase-3、bcl-2和bax陽性細胞數(棕黃色顆粒為陽性細胞)。

1.4 統計學方法 采用SPSS12.0統計軟件數據處理，結果以均數±標準差(±s)表示，組間差異顯著性檢驗采用方差分析，P＜0.05有統計學意義。

2 結果

腦出血灶周圍腦組織Caspase-3蛋白的表達。A組腦組織中見少量caspase-3蛋白表達。而B、C、D3組出血灶周圍腦組織中可見caspase-3陽性細胞表達水平增高。A組腦組織中未見Bax蛋白、見少量Bcl-2表達。而B、C、D3組出血灶周圍腦組織中可見Bax、Bcl-2陽性細胞表達水平明顯增高，其中B組表達水平最高，D組表達水平最低。

注:*與A組比較，P＜0.05;B、C、D 3組間比較，各指標均P＜0.05

3 討論

原花青素(proanthocyanidin，PC)是從葡萄籽中提取出來的多酚類化合物，具有極強的抗氧化及清除自由基能力。Bagchi［1］等發現PC是迄今為止發現的最強有效的自由基清除劑之一，其清除自由基的能力是VE的50倍、VC的20倍。PC能下調促凋亡基因c-Jun及P53表達有關，而且在體內外試驗中均發現OPC能夠改善血腦屏障的通透性［2］。

Bcl-2是重要的凋亡抑制基因，主要通過阻止細胞凋亡的早期環節而發揮作用［3］。Bax是bcl-2基因家族中重要的凋亡促進基因，可通過其自身形成的Bax同源二聚體發揮促進細胞凋亡作用［4］。腦出血灶周圍腦組織Bax蛋白表達增加，表明Bax參于了出血灶周圍腦組織中細胞凋亡的調控，應用花青素后Bax蛋白表達明顯減少，同時花青素可以增加抗凋亡蛋白Bcl-2表達，且與劑量相關。caspase-3是caspase級聯反應中最關鍵的效應酶，在凋亡執行過程中起重要作用［5］。花青素對腦出血的保護機制可能通過某種途徑抑制caspase-3蛋白表達，從而抑制細胞凋亡，挽救出血周圍腦組織來實現的。

腦出血灶周圍腦組織病理改變十分復雜，花青素對腦出血周圍的腦組織有保護作用，可能與調控凋亡相關基因的表達，減少細胞凋亡的發生有關，為腦出血的治療開辟新的道路。

［1］ BagchiD，et al.Protection effects of grape seed proanthocyanidins and selected antioxidant against TPA Induced hepatic and brain liquid peroxidation and DNA fragmentation and peritoneal macrophage activation in mice.Gen Pharamc，1998，30(5):771．

［2］ Robert AM，Tixier JM，Robert L，Legeais JM，Renard G.Effect of procyanidolic oligomers on the permeability of the blood-brain barrier.Pathol Biol(Paris)，2001;49(4):298-304．

［3］ Oltvai ZN，Milliaman CL，Korsmcyer SJ.Bcl-2 heterodimerizes in vivowith aconserved homology， bax， thataccelerates cell death.Cell，1993，74:609．

［4］ Miyashita T，Reed JC.Bcl-2 oncoprotein blocks chemotherapy induced apoptosis in a human leukemia cell line.Blood，1993，81 (1):151．

［5］ 王宇卉，邵福源.Caspase-3與卡配因在神經細胞死亡中的作用.國外醫學腦血管疾病分冊，2002，10:301-304．

黑龍江省衛生廳課題(項目編號:2006-218);黑龍江省教育廳課題(項目編號:11541152)

150001哈爾濱醫科大學附屬第四醫院(張雋 楊子超);哈爾濱醫科大學附屬第二醫院(孫威);佳木斯大學附屬第一醫院神經內科(王昆祥)

張雋 Email:hljzhangjun@yahoo.com.cn