安寐湯對失眠大鼠腦組織多巴胺含量的影響

刁遠明，陳 群

廣州中醫藥大學，廣東廣州 510006

失眠是睡眠障礙性疾病中最常見的癥狀，屬中醫“不寐”范疇，在臨床上極為常見，指經常不能獲得正常的睡眠，輕者入眠困難，或眠而不安酣，時寐時醒，醒后不能再入睡，嚴重者可整夜不眠，可反復數年不愈，給患者的身心健康帶來了嚴重影響[1]。安寐湯為廣州中醫藥大學陳群教授多年臨床實踐總結的經驗方，具有寧神安寐、誘導睡眠的作用，臨床應用效果顯著。運用安寐湯治療失眠患者126例結果顯示總有效率為91.27%[2]。本文通過庫侖陣列電化學高效液相色譜法檢測安寐湯對失眠大鼠腦組織內單胺類中樞神經遞質多巴胺（DA）含量的影響，探討其寧神安寐，誘導睡眠的作用機制，為安寐湯進一步開發利用提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

SPF級SD大鼠，雌雄各半，體質量180～220 g，由廣州中醫藥大學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK（粵）2008-0020。正常光照，自由飲水、攝食，適應性喂養一周后，稱重，隨機化分為正常組、模型組、安寐湯低劑量組、安寐湯中劑量組、安寐湯高劑量組、安定對照組，每組12只，雌雄各半。

1.1.2 實驗儀器與試劑

1.1.2.1 儀器 ESA 5600A庫侖陣列電化學高效液相色譜儀（美國ESA公司），Coularray Win工作站，Heraeus Thurmo D-37520型高速冷凍離心機（德國Heraeus公司），Dionex Tcc-100型柱溫箱（美國戴安公司），pHS-25型pH計（上海精密科學儀器有限公司），GenPure超純水系統（德國TKA公司），BP211D電子天平（德國Sartorious），3K超濾管（PALL公司）。

1.1.2.2 試劑 DA標準品（批號：100076-200405）為中國藥品生物制品檢定所產品；對氯苯丙氨酸（PCPA）為sigma公司產品，批號：C6506；安定由廣州中醫藥大學第一附屬醫院藥房提供；乙腈為色譜純（德國默克公司）；實驗用其他試劑均為分析純。

1.1.3 藥物制備及給藥方法

1.1.3.1 藥物制備 安寐湯組成分：夜交藤、酸棗仁、生龍骨、珍珠母、五味子、白芍、生地等。實驗所用中藥飲片均購自廣州市藥材公司，經驗證為正品。安寐湯組成藥物中的生龍骨、珍珠母先煎1 h，再與方中其他藥物一起煎煮2次，10倍量水，每次1 h，過濾，合并濾液，水浴濃縮成1∶1藥液，置冰箱內4℃保存備用。安定片研碎配成相應濃度的混懸液備用。

1.1.3.2 給藥方法 除正常組大鼠外，其余各組大鼠腹腔注射對氯苯丙氨酸（PCPA）300 mg/kg，臨用前用弱堿性生理鹽水配置成混懸液，連續注射2 d。造模同時開始灌胃，各受試藥物的灌胃劑量以人體推薦量為依據，灌胃量為1 ml/100 g，每日1次。以等效劑量為中劑量，低劑量為等效劑量的1/2，高劑量為等效劑量的2倍給藥，正常組、模型組給予等體積生理鹽水，連續給藥10 d。

1.2 方法

1.2.1 檢測樣品制備

方法[3-6]，實驗大鼠連續給藥10 d后，禁食12 h，斷頭處死動物，在冰臺上迅速分離出大腦組織，將標本稱質量后，錫紙包好，保存于-80℃冰箱中。稱取腦組織0.3 g，加入1 ml 0.1 mol/L高氯酸溶液冰浴勻漿，用渦旋器混勻，4℃離心10 min，轉速15 000 r/min，取上清液置于3 K超濾管中4℃離心10 min，轉速12 000 r/min，取超濾后上清液檢測。

1.2.2 色譜條件

色譜柱為 Luna C18色譜柱（Phenomenex，4.6 mm×150 mm，5 μm），Alltech C18預柱（Alltima，7.5 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為緩沖液（每升水含EDTA 37.2 g，NaH2PO431.2 g，辛烷磺酸鈉 1 g，pH=4.0）∶乙腈=87∶13；流速為 1.0 ml/min；檢測電壓為350 mV；柱溫為 35℃；自動進樣器溫度為 4℃；進樣量 15.0 μl。

1.3 統計學處理

含量計算公式：含量（μg/g濕組織）=CV/W，式中C為大鼠腦組織樣品測得的濃度（μg/ml），V為樣品預處理過程中加入液體體積總量（ml），W為腦組織濕重（g）。統計采用SPSS 12.0軟件分析，數據以均數±標準差（±s）表示，總體比較采用方差分析，組間比較采用方差分析LSD進行兩兩比較，以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

各組DA含量結果見表1。大鼠第一次腹腔注射PCPA造模后28～30 h開始出現晝夜節律消失，白天也活動不停，煩躁不安，易激惹和攻擊性增強等表現，表明失眠大鼠造模成功。腦組織DA含量檢測結果顯示，模型組大鼠腦組織中DA含量與正常組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。安寐湯高、中劑量組大鼠腦組織中DA含量與模型組相比顯著降低（P＜0.05），安寐湯低劑量組大鼠腦組織中DA含量與模型組相比有所降低，但差異無統計學意義（P＞0.05）。安定對照組大鼠腦內DA含量與模型組相比，差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 各實驗組大鼠腦內DA含量

3 討論

失眠， 中醫又稱為 “不寐”、“不得眠”、“不得臥”、“目不瞑”等，是以經常不能獲得正常睡眠為特征的一類病癥。目前，影響人們身心健康、生活質量和工作效率的第一問題是失眠，預計到2020年全球有大約超過7億失眠者。

安寐湯方中生龍骨、珍珠母含鈣、鐵、鈉、鉀等微量元素，可抑制神經與骨骼肌興奮，作用于快波睡眠期，對失眠伴有多夢、驚悸、遺精、盜汗效果較好。五味子含五味子素、五仁醇，與白芍均對中樞神經系統有抑制、鎮靜作用。夜交藤藥性平和，功擅引陽入陰，據現代藥理研究[7]，在諸多安神藥中，以夜交藤誘導睡眠、縮短入睡潛伏期的作用最好，并有明顯的安定作用，可用于各類失眠。酸棗仁對實驗動物和人均有顯著而溫和的催眠、鎮靜、安定效果，為治療虛煩不得眠的要藥。酸棗仁與夜交藤兩藥，為無論古代醫家還是現代中醫治療失眠使用最多的藥物，也是安寐湯的君藥。

安寐湯以化石、介殼類安神藥生龍骨、珍珠母潛陽入陰、重鎮安神；以植物類安神藥夜交藤、酸棗仁、五味子、白芍、生地黃養心安神，誘導睡眠，辨證加減用于治療不寐癥，取得了較好的臨床療效。該方藥味精煉，組方巧妙合理，治標當中兼顧治本?，F代藥理及臨床實驗研究結果也顯示，本類藥物可作用于中樞神經系統，起鎮靜、催眠作用，或改善中樞神經系統功能，且無毒副作用、耐藥性和藥物依賴性，是治療失眠具有開發前景的理想藥物。

研究表明，睡眠發生不僅是生物體對環境變化的被動反應，更是中樞神經系統內發生的一個主動過程，當與睡眠-覺醒機制相關的中樞神經遞質含量發生改變時，機體會表現出明顯的睡眠障礙。有實驗報道，中腦腹側被蓋區（VTA）存在大量的多巴胺神經元，其纖維投射到紋狀體、邊緣系統、大腦皮質外，還與視前區、藍斑、中縫核等與睡眠一覺醒有關的神經結構有著廣泛的聯系，當腦內DA濃度增高時，腦電出現低幅快波，即興奮的表現[8]。

安寐湯是臨床行之有效的治療失眠的方劑，作者前期研究中也證實安寐湯高中低劑量組均有顯著的促睡眠作用，能顯著提高小鼠入睡率，縮短入睡時間，延長睡眠時間，但其作用機制尚不明確。從本研究來看，大鼠注射PCPA造模后腦內DA含量顯著升高，與文獻[8]報道一致，經灌胃給藥10 d后，安寐湯中、高劑量組用藥后DA含量顯著下降，與模型組比較差異有統計學意義。安寐湯低劑量組用藥后DA含量與模型組比較有所降低，但差異無統計學意義，可能與其劑量較低未能明顯起效有關。安定對照組大鼠腦內DA含量與模型組相比差異無統計學意義，說明安定鎮靜催眠作用的發揮主要不是通過DA含量變化起作用的。DA在腦內主要起興奮作用，對睡眠具抑制作用，安寐湯中、高劑量組可使失眠大鼠腦內升高的DA含量降低，從而使大腦興奮性降低，由此認為安寐湯促睡眠機制與其可以調節大鼠腦內DA的含量密切相關，其促睡眠機制是否與其他中樞神經遞質有關系有待進一步深入研究。

[參考文獻]

[1]楊德富.中醫藥治療失眠的現狀[J].光明中醫,2009,24(9)：1818-1819.

[2]陳群,徐志偉.安寐湯治療失眠126例療效觀察[J].新中醫,2000,32(6)：18-19.

[3]張瀟.高效液相色譜-電化學法測定大鼠不同腦區單胺類神經遞質及其代謝產物的方法學研究[J].遼寧中醫藥大學學報,2009,11(6)：255-257.

[4]張峰,曹仲偉,李法曾.黃芪對應激大鼠生長和腦單胺類神經遞質含量的影響[J].山東大學學報：醫學版,2008,45(7)：645-649.

[5]謝忠禮,李杰,王興華.加味四逆散對慢性應激模型大鼠下丘腦單胺類神經遞質的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2008,14(1)：50-52.

[6]吳勇,李政木,卓廉佳,等.腎氣丸“陰中求陽”配伍對腎陽虛大鼠下丘腦多巴胺及五羥色胺含量的影響[J].時珍國醫國藥,2009,20(10)：2387-2388.

[7]駱和生,王建華.中藥方劑的藥理與臨床研究進展[M].廣州：華南理工大學出版社,1991：267.

[8]劉彬,臧佩林.保神開郁沖劑影響失眠鼠中樞遞質的實驗研究[J].遼寧中醫雜志,2000,27(2)：92-94.