前攝寧顆粒對大鼠慢性前列腺炎的治療作用

何 穎， 沈先榮， 蔣定文， 陳 偉

(海軍醫(yī)學研究所，上海200433)

慢性前列腺炎(chronic prostatitis，CP)是男性泌尿生殖系統(tǒng)最為常見的疾病之一，發(fā)病率高，多發(fā)于20～40歲成年男性。由于CP病因復雜，發(fā)病機制尚未完全明了，目前臨床治療還比較困難。西醫(yī)治療主要有抗生素的應用、α受體阻滯劑的應用和非甾體類抗炎藥等的應用，但療效欠佳。而中藥治療有其獨特的優(yōu)勢。CP屬于中醫(yī)“淋濁”范疇，癥狀復雜、病程遷延，容易反復發(fā)作。病位在下焦，多責之濕熱、瘀血、腎虛，病性多為本虛標實。國內(nèi)學者報道了605例慢性前列腺炎中醫(yī)辨證分型的統(tǒng)計結(jié)果，發(fā)現(xiàn)605例中濕熱型109例，氣滯血瘀型132例，腎虛型29例，混合型335例，所占比例分別為18.02%、21.85%、4.8% 和 55.46%［1］。因此有學者認為濕熱下注、痰瘀膠結(jié)、虛實錯雜是CP的主要病理機制特點。我們根據(jù)上海中醫(yī)文獻館老中醫(yī)周家衡教授多年的臨床經(jīng)驗方研制了前攝寧顆粒，并對其治療大腸桿菌引起的細菌性前列腺炎和角叉菜膠引起的急性前列腺腫大(以水腫為主)進行了報道［2］。為了進一步探討前攝寧顆粒對慢性前列腺炎的治療效果，我們開展了前攝寧顆粒對消痔靈致大鼠慢性前列腺炎的療效研究。

1 材料和方法

1.1 藥物 前攝寧顆粒，由上海澳博海洋生物技術有限公司提供，含生藥5.0 g/g，棕黃色顆粒，由黃芩、黃柏、牡丹皮和丹參等組成，功能:扶正固本，滋陰益腎，清熱解毒，利濕通淋、祛瘀止痛，主治慢性前列腺炎。前攝寧顆粒60 g加水配成100 mL混懸液，含前攝寧顆粒0.6 g/mL，作為大鼠大劑量組用藥，中、小劑量組再對半稀釋，按10 mL/kg體質(zhì)量灌胃給藥，劑量分別為6、3和1.5 g前攝寧顆粒/kg(30、15和7.5 g生藥/kg);小鼠用藥則配成含前攝寧顆粒0.4 g/mL，按0.2 mL/10 g灌胃給藥，大、中、小劑量組分別為8、4和2 g前攝寧顆粒/kg(40、20和10 g生藥/kg)。

前列通片，廣州中一藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號F00047，主要由蒲公英、黃柏、車前子、兩頭尖和澤蘭等組成，功能:清熱解毒、清利濕濁，理氣活血、消炎止痛等，主治急、慢性前列腺炎。每片重約0.5 g，推薦每次6片，每天3次(共9 g)。實驗時取40片，碾缽內(nèi)碾細后用0.5%CMC-Na溶液配成100 mL的混懸液，相當于0.2 g/mL，大鼠按10 mL/kg灌胃給藥，劑量為2.0 g/kg。

消痔靈注射液，北京萬輝藥業(yè)集團第四制藥廠生產(chǎn)，批號011006，臨用時用生理鹽水配制成25%的溶液。乙酸，分析純，杭州化學試劑有限公司出品。二甲苯，分析純，杭州化學試劑廠生產(chǎn)。

1.2 動物 SD大鼠，清潔級，雄性;ICR小鼠，清潔級，雌雄兼用，均由浙江省實驗動物中心提供，合格證號:浙醫(yī)動字第2001001號。

1.3 儀器 Motic顯微數(shù)碼攝影處理系統(tǒng)(含圖像分析軟件)，電子分析天平，組織切片機等。

1.4 前列腺液白細胞計數(shù) 參照文獻方法［3］，取前列腺按摩液10 μL至200 μL 1%醋酸溶液中，滴管吹打均勻后充于細胞計數(shù)板中，鏡下計數(shù)四角上的4個大方格內(nèi)的白細胞數(shù)，乘以50即為每1 μL前列腺液內(nèi)的白細胞總數(shù)。

1.5 前列腺液卵磷脂小體密度分析 參照文獻方法［4］，取前列腺按摩液涂片，壓上蓋玻片，鏡下觀察卵磷脂小體分布密度，根據(jù)數(shù)量多少分4、3、2和1分，進行半定量分析。

1.6 前列腺組織形態(tài)學分析 參照文獻方法［5］，前列腺組織甲醛固定后，行常規(guī)石蠟切片，HE染色，在10倍物鏡下，每個標本隨機選3個視野(每視野面積4 mm2)，在Motic圖象處理分析系統(tǒng)中，描出每個腺管(上皮外周)外周輪廓，系統(tǒng)自動產(chǎn)生該腺管的面積和周長，將數(shù)據(jù)導出到EXCEL進行處理。位于視野周邊的不完整的腺管不論大小均作為0.5個腺管計，計算視野內(nèi)腺管數(shù)。根據(jù)腺管面積、腺管周長、腺管數(shù)3個原始數(shù)據(jù)(每個樣品3個視野的平均值)，按下列公式計算其它指標:

間質(zhì)面積=視野總面積-腺管面積(mm2)

間質(zhì)面積比例=間質(zhì)面積/視野總面積×100(%)

每個腺管平均面積=腺管面積/腺管數(shù)(mm2)

等效直徑=2√每個腺管平均面積/π(μm)

每視野腺管總周長注1=腺管總周長注2-等效直徑×(不完整腺管數(shù))(μm)

每視野腺管平均周長=每視野腺管總周長/總腺管數(shù)(μm)

注1:對視野周圍不完整腺管中重復計算部分進行校正

注2:指計算機直接讀出的每視野內(nèi)所有腺管周長總和

1.7 統(tǒng)計方法 所有計量數(shù)據(jù)采用學生t檢驗，計數(shù)數(shù)據(jù)采用 χ2檢驗，與正常對照組比較，#P＜0.05，##P ＜0.01;和模型組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01。

1.8 試驗方法［6］雄性SD大鼠60只，體重180～200 g，將動物隨機分成6組，即模型組、前攝寧大劑量組、中劑量組，小劑量組、陽性藥對照組(前列通片)和假手術組，每組10只。飼養(yǎng)1 d后造模:100 mg/kg異戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，打開腹腔，提出膀胱及兩側(cè)精囊，暴露附于精囊的前列腺側(cè)葉，每側(cè)分別注入25%消痔靈溶液100 μL，假手術組注入相同量的生理鹽水，復位、腹腔內(nèi)滴入16萬單位/mL青霉素1滴抗菌，縫合，傷口連續(xù)3 d碘酒消毒。造模后第2天開始灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥30 d。前攝寧顆粒大、中、小劑量組分別為30、15和7.5 g生藥/kg體質(zhì)量(6、3和1.5 g前攝寧顆粒/kg體質(zhì)量)，陽性藥對照組給前列通片2.0 g/kg體質(zhì)量，模型組及假手術組給等量的水，灌胃體積均為1.0 mL/100 g。第30天尾靜脈取血測定白細胞數(shù)，按摩取前列腺液，鏡下觀察卵磷脂小體密度，白細胞計數(shù)。取前列腺按摩液后處死大鼠，解剖摘取前列腺，進行解剖學觀察，稱取前列腺濕重，計算前列腺指數(shù)，腫脹率和腫脹抑制率。10%福爾馬林溶液固定前列腺，石蠟包埋，切片，常規(guī)HE染色，進行鏡下組織形態(tài)學觀察與分析。

前列腺重質(zhì)量指數(shù)(g/100 g)=前列腺體質(zhì)量(g)/體質(zhì)量(g)×100

腫脹率=(致炎鼠前列腺指數(shù)-假手術鼠前列腺指數(shù))/假手術鼠前列腺指數(shù)×100%

腫脹率抑率=(模型組腫脹率-用藥組腫脹率)/模型組腫脹率×100%

2 結(jié)果

2.1 前攝寧顆粒對大鼠前列腺組織增生(體質(zhì)量)的影響 前列腺組織內(nèi)注射消痔靈引起大鼠前列腺組織明顯增生，前列腺體質(zhì)量指數(shù)增加(腫脹率)41.9%。和模型組比較，前攝寧顆粒大、中和小劑量組使大鼠前列腺的腫脹度明顯降低，腫脹抑制率分別達到62.8%、54.2%和42.7%，具有明顯的劑量關系(表1)。

表1 前攝寧顆粒對消痔靈致前列腺炎大鼠前列腺重量的影響 (±s，n=10)

表1 前攝寧顆粒對消痔靈致前列腺炎大鼠前列腺重量的影響 (±s，n=10)

和假手術組比較，##P＜0.01;和模型組比較，*P＜0.05;和模型組比較，**P ＜0.01。

組別 劑量/(g/kg)前列腺體質(zhì)量/g前列腺指數(shù)/(g/100 g)體質(zhì)重腫脹率/%腫脹抑制率/%假手術組 1.58±0.29 0.396±0.067—18.4 56.1模型組 2.05±0.29##0.562±0.073## 41.9 0前攝寧組 6.0 1.66±0.11**0.458±0.041**15.6 62.8 3.0 1.75±0.31*0.472±0.070**19.2 54.2 1.5 1.85±0.13 0.492±0.039* 24.0 42.7前列通片 2.0 1.73±0.32*0.469±0.069**

2.2 前攝寧顆粒對血液和前列腺液內(nèi)白細胞數(shù)量及前列腺液卵磷脂小體密度的影響 和假手術組比較，消痔靈模型大鼠血液白細胞數(shù)量無明顯變化，但前列腺液內(nèi)白細胞數(shù)明顯增加，卵磷脂小體密度則顯著降低。前攝寧顆粒各劑量組及陽性藥對照組血液白細胞數(shù)量無明顯變化，但明顯降低前列腺液內(nèi)的白細胞數(shù)，并使前列腺液內(nèi)的卵磷脂小體密度顯著增加，有明顯的劑量關系(表2)。

表2 前攝寧顆粒對消痔靈致前列腺炎大鼠前列腺液和血液白細胞數(shù)及卵磷脂小體密度的影響 (±s，n=10)

表2 前攝寧顆粒對消痔靈致前列腺炎大鼠前列腺液和血液白細胞數(shù)及卵磷脂小體密度的影響 (±s，n=10)

和假手術組比較，##P＜0.01;*和模型組比較，P＜0.05;和模型組比較，**P ＜0.01。

卵磷脂小體密度假手術組組別 劑量//(g/kg)血液白細胞數(shù)109個/dL前列腺液白細胞108個/dL 17.2±7.3 14.5±2.9 3.67±0.50模型組 18.6±3.9 23.6±5.4## 1.30±0.48##前攝寧組 6 21.5±6.7 17.4±3.9* 2.10±0.74*3 28.1±12.2 17.6±4.2* 1.50±0.71 1.5 16.7±2.1 21.8±3.5 1.40±0.70前列通片 2.0 21.3±7.1 17.5±4.4* 2.30±0.67**

2.3 前攝寧顆粒對前列腺形態(tài)結(jié)構的影響 假手術對照組大鼠前列腺組織柔軟有光澤，彈性好，與周圍組織無黏連，易分離;模型組腺體稍大，部分與周圍組織黏連，部分組織表面可見纖維化;陽性藥對照組前列腺大;中劑量組腺體相對較柔軟，表面有光澤，但腺體也有不同程度的腫脹;小劑量組前列腺組織外觀改善并不很明顯。

組織形態(tài)學分析顯示，和假手術組比較模型組大鼠前列腺組織中每一視野內(nèi)(4 mm2)間質(zhì)組織面積比例明顯增加，提示間質(zhì)組織增生，而每個腺管的平均面積和周長均無明顯變化，提示模型對前列腺組織中腺管上皮細胞并無明顯促增殖作用。和模型組比較，前攝寧顆粒大、中劑量組的間質(zhì)面積均明顯降低，小劑量組則有一定的降低趨勢，提示能明顯抑制消痔靈引起的前列腺間質(zhì)組織增生，而對腺管的平均面積等均無明顯影響(表3，圖1)。

表3 前攝寧顆粒對前列腺組織間質(zhì)增生和腺體形態(tài)的影響 (n=10)

圖1 前攝寧顆粒對消痔靈致大鼠慢性前列腺炎的抑制作用

3 討論

國內(nèi)外相關研究發(fā)現(xiàn)，慢性前列腺炎患者的前列腺內(nèi)可以檢測出革蘭氏陰性桿菌、沙眼衣原體、支原體、人乳頭狀瘤病毒、真菌、滴蟲等。前列腺組織因感染細菌而產(chǎn)生的黏性物質(zhì)抗吞噬和抗趨化作用，可影響白細胞浸潤、淋巴細胞增殖。若前列腺組織中細菌對抗生素產(chǎn)生耐藥性，將導致前列腺感染難以治愈且易復發(fā)［7］。病理觀察表明，慢性前列腺炎的前列腺組織中炎性細胞浸潤上皮細胞導致阻塞、變性，而前列腺腺體間質(zhì)發(fā)生水腫、腺管阻塞、炎性膿液。CP感染多發(fā)于間質(zhì)，并因與腺體慢性充血相互影響，導致CP的病理改變加重，遷延難愈。前攝寧顆粒6 g和3 g/kg明顯抑制由消痔靈誘導的大鼠慢性前列腺炎，使前列腺組織增生程度明顯降低，前列腺(重量)腫脹度抑制率達到43% ～63%，前列腺液內(nèi)白細胞數(shù)降低，而磷脂小體密度則明顯恢復。組織形態(tài)學分析顯示，前攝寧顆粒6 g和3 g/kg使前列腺間質(zhì)增生程度明顯減輕，1.5 g/kg也有相似的趨勢，劑量關系明確。但前攝寧顆粒不同劑量組對腺管大小無明顯影響，提示前攝寧顆粒對前列腺組織中腺管上皮細胞無明顯作用。

劉明等報道純中藥滴丸劑-飛龍前列爽滴丸能抗炎、鎮(zhèn)痛，有明顯的抗慢性前列腺炎作用，有抑制早期炎癥和晚期炎癥的作用［8-9］;李占玲等觀察了前康寧顆粒對大鼠慢性非細菌性前列腺炎模型前列腺組織病理學的影響，發(fā)現(xiàn)前康寧有抗炎、消腫作用，可改善局部血運，使前列腺組織形態(tài)恢復正常，相關抗炎實驗也表明前康寧顆粒具有明顯的抗炎作用，臨床療效觀察揭示該藥對慢性前列腺炎治療作用顯著［10-11］。眾多研究表明中醫(yī)藥治療CP較西醫(yī)治療效果好，因此，研制療效佳的前攝寧顆粒治療易反復發(fā)作的CP有著良好的應用前景。

此外，我們在前期研究中發(fā)現(xiàn)，前攝寧對大腸桿菌引起的細菌性前列腺炎大鼠模型具有與消痔靈模型類似效應，對角叉菜膠引起的急性前列腺腫大(以水腫為主)療效相對較弱，但也能明顯減少該模型前列腺液內(nèi)的白細胞數(shù)，能夠抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹和醋酸引起的小鼠扭體反應，減輕大鼠異物(棉球)刺激引起的肉芽組織形成，預防和治療給藥對金黃色葡萄球菌感染引起的小鼠死亡有一定的抑制作用，但作用強度較弱。上述結(jié)果提示:前攝寧顆粒能明顯抑制大鼠慢性前列腺炎，抑制前列腺間質(zhì)組織的增生，并具有一定的抗炎和鎮(zhèn)痛作用。

［1］戚廣宗.中國首屆男科學術大全述要［J］.中醫(yī)雜志，1996，37(1):11-14.

［2］沈先榮，李水軍，蔣定文，等.前攝寧顆粒對SD大鼠前列腺炎的抗炎作用［J］. 中成藥，2008，30(6):808-812.

［3］趙廣明，趙連華，韓貴夫，等.前列腺液白細胞定量計數(shù)及參考值測定［J］. 中華男科學，2002，8(2):209.

［4］孫明杰，賈玉森，李 軍，等.前列腺炎栓藥理學實驗研究［J］. 中國中藥雜志，2000，25(4):233-238.

［5］谷現(xiàn)恩，潘柏年.現(xiàn)代前列腺疾病［M］.北京醫(yī)科大學中國協(xié)和醫(yī)科大學聯(lián)合出版社，1996:17.

［6］張亞強，于靈惠.中藥前列腺湯對實驗性前列腺炎病理模型的影響［J］. 中西醫(yī)結(jié)合雜志，1991，11(8):480-481.

［7］陳志強.男科專病中醫(yī)臨床診治［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:1-7.

［8］劉 明，張永萍，邱德文，等.飛龍前列爽滴丸抗前列腺炎的實驗研究［J］.貴陽中醫(yī)學院學報，2006，28(2):58-60.

［9］劉 明，張永萍，羅春麗，等.飛龍前列爽滴丸對慢性前列腺炎的抗炎作用［J］. 中南藥學，2006，4(3):169-171.

［10］李占玲，吳春芳，李國信，等.前康寧顆粒對前列腺組織病理學的影響［J］. 中國醫(yī)藥學報，2003，18(10):632-633.

［11］李占玲，李國信，吳春芳，等.前康寧治療慢性前列腺炎動物實驗及臨床療效觀察［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2003，9(5):391-395.