核桃仁可水解丹寧成分研究（Ⅲ）

金哲雄， 曲中原

（哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150076）

核桃仁為胡桃科植物胡桃Juglans regiaL.的成熟種子。主產(chǎn)于我國河北、北京、山西、山東等地區(qū)。核桃仁性甘，溫，具有補(bǔ)腎溫肺，潤(rùn)腸通便之功效，用于腰膝酸軟，陽萎遺精，虛寒喘嗽，大便秘結(jié)［1］。核桃仁中除了含有豐富的不飽和脂肪酸和優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)外，其單寧類物質(zhì)含量達(dá)0.372% ～1.095%（以兒茶素為計(jì)量單位）［2］。作者對(duì)核桃仁可水解丹寧成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，曾從核桃仁中分離鑒定了12種化合物［3-4］，現(xiàn)又從該植物的種子中分離鑒定了6種化合物，均尚未見從該植物種子中分得的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。

1 材料

Bruker AM600型NMR測(cè)試儀;Shimadzu UV180型紫外測(cè)定儀;JEOL GE XHX100MS儀;自動(dòng)流分收集儀（HL-2）恒流泵產(chǎn)于上海市滬西機(jī)器廠;AFQ旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀，產(chǎn)于天津玻璃儀器廠。核桃仁購于哈爾濱市中藥材市場(chǎng)，由哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定教研室張德連教授鑒定為胡桃科Juglans regiaL胡桃的成熟種子，樣品現(xiàn)存于哈爾濱商業(yè)大學(xué)中藥標(biāo)本室內(nèi)。

2 提取分離

核桃仁10 kg，粉碎成細(xì)粉，用70%乙醇冷浸24 h，提取液于40℃真空濃縮后，用正己烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。得到正己烷提取物120 g，乙酸乙酯提取物20 g，正丁醇提取物30 g，水提取物270 g。取正丁醇提取物20 g，用Toyopearl HW-40、MCI gel CHP-20柱色譜反復(fù)分離，以甲醇-水（3∶7→4∶6→6∶4→7∶3）梯度洗脫，根據(jù)HPLC檢識(shí)，合并相同的部分，得化合物Ⅰ（14 mg），化合物Ⅳ（20 mg），化合物Ⅴ（30 mg）。取乙酸乙酯提取物20 g，用 Toyopearl HW-40（C）、sephadex LH-20柱色譜反復(fù)分離，以甲醇-水（3∶7→4∶6→6∶4→7∶3）梯度洗脫，根據(jù)HPLC檢識(shí)，合并相同的部分，得化合物Ⅱ（34 mg）、化合物Ⅲ（28 mg）、化合物Ⅵ（20 mg）。正相HPLC采用Waters M4液相色譜儀，柱Zorbax SIL（4.6 mm（150 mm，5 μm），檢測(cè)波長(zhǎng) 280 nm，室溫，體積流量:2.5 mL/min，流動(dòng)相:環(huán)己烷-甲醇-四氫呋喃-甲酸（55∶33∶11∶1）-草酸450 mg/L。反相HPLC采用Shimadzu LC-6A液相色譜儀，柱 Lichirospher Rp-18（4 mm（250 mm，5 μm），檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm，溫度:40℃，流動(dòng)相:磷酸緩沖液-乙醇-乙酸乙酯（85 ∶10 ∶5），體積流量:1.1 mL/min。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:淺棕色無定形粉末（丙酮），與三氯化鐵試劑反應(yīng)顯藍(lán)色，明膠試劑反應(yīng)陽性。FAB-MSm/z:657［M+Na］+;1H-NMR（600 Mz，Me2CO-d6+D2O）:譜中低場(chǎng)區(qū)顯示1個(gè)雙氫單峰δ 7.15，說明1個(gè)沒食子酰基（galloyl）存在，此外δ 6.70，6.55處顯示2個(gè)單氫單峰，說明1個(gè)逆沒食子酰基hexahydroxydiphenoyl（HHDP）存在。高場(chǎng)區(qū)出現(xiàn)5.71（1H，d，J=8.0 Hz，H-1），3.67（1H，dd，J=8.0，9.0 Hz，H-2），3.80（1H，dd，J=9.0，10.0 Hz，H-3），4.88（1H，t，J=10.0 Hz，H-4），4.08（1H，dd，J=6.5，10.0 Hz，H-5），5.30（1H，dd，J=6.5，13.5 Hz，H-6），3.75（1H，d，J=13.5 Hz，H-6）。13C-NMR（126 MHz，Me2CO-d6+D2O）δ:92.0（C-1），75.8（C-2），77.2（C-3），69.0（C-4），73.1（C-5），63.0（C-6），166.8，166.4，166.1，（ester carbonyl）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5-6］報(bào)道一致，故確定其為小木麻黃素（strictinin）。

化合物2:淺棕色無定形粉末（丙酮），與三氯化鐵試劑反應(yīng)顯藍(lán)色，明膠試劑反應(yīng)陽性。FAB-MSm/z:809（M+Na）+;1H-NMR（600 Mz，Me2CO-d6+D2O）:譜中低場(chǎng)區(qū)顯示2個(gè)雙氫單峰δ 7.29，7.09，說明2個(gè)galloyl基存在，此外δ 6.68，6.50處顯示2個(gè)單氫單峰，說明一個(gè)HHDP基存在。高場(chǎng)區(qū)出現(xiàn) 6.50（1H，d，J=4.0 Hz，H-1），4.19（1H，dd，J=4.0，10.0 Hz，H-2），5.60（1H，t，J=10.0 Hz，H-3），5.10（1H，t，J=10.0 Hz，H-4），4.60（1H，dd，J=7.0，10.0 Hz，H-5），5.24（1H，dd，J=7.0，14.0 Hz，H-6），3.77（1H，d，J=14.0 Hz，H-6），13C-NMR（126 MHz，Me2CO-d6+D2O）δ:93.2（C-1），71.3（C-2），73.9（C-3），71.1（C-4），70.9（C-5），62.9（C-6），167.4，166.2，168.7，169.3（ester carbonyl）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7-8］報(bào)道一致，故確定其為榛子素A（heterophylliin A）。

化合物3:淺棕色無定形粉末（丙酮），與三氯化鐵試劑反應(yīng)顯藍(lán)色，明膠試劑反應(yīng)陽性。FAB-MSm/z:959（M+Na）+;1H-NMR（600 Mz，Me2CO-d6+D2O）:譜中低場(chǎng)區(qū)顯示1個(gè)雙氫單峰 δ 7.07，說明1個(gè) galloyl基存在，此外 δ 6.81，6.52，6.48處顯示3個(gè)單氫單峰，說明2個(gè)HHDP基存在 。高場(chǎng)區(qū)出現(xiàn) 5.57（1H，d，J=5.1 Hz，H-1），4.61（1H，dd，J=2.1，5.1 Hz，H-2），5.41（1H，t，J=2.1 Hz，H-3），5.42（1H，dd，J=2.1，9.0 Hz，H-4），5.29（1H，dd，J=3.0，9.0 Hz，H-5），4.83（1H，dd，J=3.0，12.6 Hz，H-6），4.02（1H，d，J=12.6 Hz，H-6），13C-NMR（126 MHz，Me2CO-d6+D2O）δ:67.6（C-1），76.7（C-2），69.8（C-3），74.2（C-4），71.52（C-5），64.6（C-6），162.8，165.0，166.0，168.0，168.6（ester carbonyl）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9-10］報(bào)道一致，故確定其為沒食子酰基木麻黃素（casuarinin）。

化合物4:淺棕色無定形粉末（丙酮），與三氯化鐵試劑反應(yīng)顯藍(lán)色，明膠試劑反應(yīng)陽性。FAB-MSm/z:811［M+Na］+;1H-NMR（600 Mz，Me2CO-d6+D2O）:譜中低場(chǎng)區(qū)顯示4個(gè)雙氫單峰 δ 6.98，7.05，7.06，7.13，說明 4 個(gè) galloyl基存在。高場(chǎng)區(qū)出現(xiàn) 6.15（1H，d，J=8.0 Hz，H-1），5.46（1H，d，J=8.0，10.0 Hz，H-2），5.67（1H，t，J=10.0 Hz，H-3），4.08（1H，t，J=10.0 Hz，H-4），4.14（m，H-5），4.63（1H，dd，J=2.0，12.5 Hz，H-6），4.52（1H，dd，J=5，12.5 Hz，H-6）。13C-NMR（126 MHz，Me2CO-d6+D2O）δ:93.5（C-1），71.9（C-2），76.0（C-3），69.5（C-4），76.1（C-5），63.7（C-6），169.1，168.8，168.5，168.0（ester carbonyl）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道一致，故確定其為 1，2，3，4-四-O-沒食子酰基-β-D-葡萄糖（1，2，3，4-tetra-O-galloyl-β-D-glucose）。

化合物5:淺棕色無定形粉末（丙酮），與三氯化鐵試劑反應(yīng)顯藍(lán)色，明膠試劑反應(yīng)陽性。FAB-MSm/z:659［M+Na］+;1H-NMR（600 Mz，Me2CO-d6+D2O）:譜中低場(chǎng)區(qū)顯示3個(gè)雙氫單峰 δ 7.16，7.12，7.06，說明 3個(gè)galloyl基存在。高場(chǎng)區(qū)出現(xiàn) 5.50（1H，d，J=3.5 Hz，H-1），5.02（1H，dd，J=3.5，10.0 Hz，H-2），4.26（1H，t，J=10 Hz，H-3），3.83（1H，t，J=10.0 Hz，H-4），4.16（m，H-5），4.52（1H，dd，J=2.0，12.0 Hz，H-6），4.12（1H，dd，J=4.0，12.0 Hz，H-6）。13C-NMR（126 MHz，Me2CO-d6+D2O）δ:93.5（C-1），69.2（C-2），70.07（C-3），62.5（C-4），76.0（C-5），64.8（C-6），169.1，168.8，168.5，（ester carbonyl）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道一致，故確定其為 1，2，6-三-O-沒食子酰基-α-D-葡萄糖（1，2，6-tri-O-galloyl-α-D-glucose）。

化合物6:淺棕色無定形粉末（丙酮），與三氯化鐵試劑反應(yīng)顯藍(lán)色，明膠試劑反應(yīng)陽性。FAB-MSm/z:1 588［M+NH4］+;1H-NMR（600 Mz，Me2CO-d6+D2O）:譜中低場(chǎng)區(qū)顯示3個(gè)雙氫單峰δ 7.15，6.99，6.94，說明3個(gè)galloyl基存在，此外 δ 7.09，6.70，6.61，6.46，6.12 處顯示 5 個(gè)單氫單峰，說明1個(gè)HHDP基和橡碗酰基（valoneoyl）存在 。高場(chǎng)區(qū)出現(xiàn) 5.76（1H，d，J=8.5 Hz，H-1），3.66（1H，dd，J=8.5，10.0 Hz，H-2），3.84（1H，t，J=10.0 Hz，H-3），4.91（1H，t，J=10.0 Hz，H-4），4.11（1H，dd，J=10.0，6.0 Hz，H-5），5.22（1H，dd，J=6.0，13.0 Hz，H-6），3.79（1H，d，J=13.0 Hz，H-6），6.10（1H，d，J=8.5 Hz，H-1′），5.58（1H，dd，J=8.5，10.0 Hz，H-2′），5.83（1H，t，J=10.0 Hz，H-3′），5.20（1H，t，J=10.0 Hz，H-4′），4.45（1H，dd，J=6.5，10.0 Hz，H-5′），5.36（1H，dd，J=6.5，13.5 Hz，H-6′），3.87（1H，d，J=13.5 Hz，H-6′）。13C-NMR（126 MHz，Me2CO-d6+D2O）δ:95.5（C-1），74.7（C-2），75.6（C-3），72.8（C-4），73.4（C-5），63.8（C-6），93.8（C-1′），71.8（C-2′），73.3（C-3′），70.8（C-4′），73.1（C-5′），63.1，（C-6′）168.36，168.25，168.20，167.73，166.58 ，166.811，165.71，162.48（ester carbonyl）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道一致，故確定其為榛子素F（heterophylliin F）。

化合物1～6的結(jié)構(gòu)圖見圖1～2。

圖1 化合物1～2化學(xué)結(jié)構(gòu)

圖1 化合物3～6化學(xué)結(jié)構(gòu)

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