豬藍耳病病毒的結構與相關抗體的分析

文│邢 剛 浙江大學農業(yè)部動物病毒學重點開放實驗室 上海海利生物藥品有限公司

豬繁殖和呼吸障礙綜合征 (簡稱：PRRS，俗稱：藍耳病) 是由豬繁殖和呼吸障礙綜合征病毒(簡稱：PRRSV，俗稱：藍耳病病毒) 引起的一種豬急性接觸性傳染病。

◎豬藍耳病病毒結構

藍耳病病毒（PRRSV）為單股正鏈RNA病毒，病毒粒子呈球形或卵圓形，直徑約為45～65納米，呈20面體對稱，有囊膜且囊膜表面有較小纖突。其基因組長度約為15000個堿基對，含有8個開放閱讀框（ORFs，Yuan，S.2001），其中，ORF1編碼病毒RNA復制酶，是病毒產生的惟一非結構性蛋白，參與病毒復制。ORF2～7編碼病毒的結構蛋白，ORF2～ORF5編碼的囊膜蛋白分別命名為GP2、GP3、GP4、GP5（Meulenberg, J.J，1997）。GP3由ORF3編碼，可能與誘導細胞免疫有關。GP5為糖基化囊膜蛋白，又稱E蛋白，由ORF5編碼，該蛋白含有6個抗原決定簇，其中決定簇B（第37～44位氨基酸殘基團）是主要的中和表位，抗體與之結合可以中和病毒的感染。因此，PRRSV新型疫苗設計時常以ORF5作為候選基因，或以GP5作為候選蛋白。ORF6編碼的膜基質蛋白又稱M蛋白， 它能刺激T淋巴細胞的增生，在細胞免疫中居主要地位。ORF7編碼核衣殼蛋白又稱N蛋白，N蛋白的保守性較好，ORF7可以用于臨床診斷的候選基因，N蛋白可以用于臨床診斷的候選蛋白。實驗證明，感染PRRSV后（約11天）首先產生該蛋白的抗體然后是其他蛋白的抗體，但該抗體無中和活性（Takikawa，N，1996）。

目前使用的藍耳病活疫苗免疫是在臨床上緩解癥狀、控制疫情的主要應對措施。但經PRRS疫苗免疫的豬群和野毒感染的豬群在抗體產生上存在很大的差異，目前學術界也存在很多不同的觀點。如果只從抗體水平來評估PRRSV疫苗的免疫效果就存在很大的弊端和誤區(qū)。

抗PRRSV抗體能夠促進巨噬細胞對PRRSV的吞噬作用，導致病毒復制增強（抗體依賴增強現象－ADE，Christianson et al.1993；Yoon et al. 1996）。PRRSV結構蛋白和非結構蛋白所產生抗體水平差異較小，強弱毒間所產生抗體水平差異顯著。但是抗體間的差異與其對異源高毒力毒株的保護卻無相關性。這些發(fā)現描述了特定PRRSV蛋白所產生抗體反應的特點——抗體反應與刺激保護間不呈相關性。

目前商品化的PRRS酶聯(lián)免疫 (ELISA) 檢測試劑盒主要有兩大類：一類是全病毒包被的酶聯(lián)免疫板，另一類是病毒的結構蛋白包被的酶聯(lián)免疫板。前者由于PRRSV存在抗原性差異顯著，不同毒株間的同源性很低，不適合做包被抗原用于ELISA診斷。不同毒株間N蛋白保守性很高，因此，N蛋白是ELISA包被抗原的最佳選擇。

N蛋白在病毒結構內部，且其產生的抗體不具有中和活性。因此，用該試劑盒檢測的抗體水平來評價疫苗免疫的效果并不科學。筆者認為只有當N蛋白暴露在細胞外的時候，機體才會產生針對N蛋白的抗體，而N蛋白又在病毒結構的內層，只有病毒在體內大量復制并破壞靶細胞時，N蛋白才會暴露在細胞的外面。所以，當N蛋白大量暴露在細胞外并產生N蛋白的抗體時，也是PRRSV對機體破壞最嚴重的時候。筆者認為，N蛋白抗體水平與病毒的致病性和毒力相關。

綜上所述，筆者認為N蛋白抗體水平越高，暗示PRRSV在體內的毒力越強。對病毒感染機體的不同時期來說，N蛋白抗體水平越高，病毒在機體內越活躍。N蛋白抗體水平也不代表疫苗免疫的保護水平，相反，對于弱毒苗來說，N蛋白抗體水平越低，疫苗株的毒力越低，越安全，對機體造成損傷越小。對于一個長期免疫弱毒苗的豬場來說，其群體的N蛋白抗體水平越整齊越低，該豬場越穩(wěn)定。