早期宮頸癌組織中VEGF-A、VEGF-D的表達變化及意義

姚淑娟,崔秀娟,李 楠,張師前

(1滕州市中心人民醫(yī)院,山東滕州 277500;2山東大學(xué)齊魯醫(yī)院)

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是宮頸癌轉(zhuǎn)移的重要途徑,且直接與其預(yù)后相關(guān)。研究表明,血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)-A、VEGF-D在腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用,但VEGF-A、VEGF-D在早期宮頸癌組織中的表達變化及其在宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移中的作用研究較少。本研究通過觀察宮頸癌組織中VEGF-A、VEGF-D及淋巴管密度(LVD)的表達變化,判斷其在宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 滕州市中心人民醫(yī)院 2008年1月～2010年 9月收治的宮頸癌患者 50例,年齡 26～70歲。本組均行手術(shù)治療并留取宮頸癌組織,術(shù)前未行放化療。臨床分期(FIGO標準)Ⅰa期20例、Ⅰb期21例、Ⅱa期9例;組織學(xué)分型為鱗狀細胞癌40、腺癌10例;組織學(xué)分級為 G1級 13例、G2級 16例、G3級 21例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者 21例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者 29例。留取 15例子宮肌瘤手術(shù)患者的正常宮頸組織,患者年齡 37～43歲。

1.2 VEGF-A、VEGF-D及LVD檢測方法 采用免疫組化SP法。標本4%多聚甲醛固定,石蠟包埋,5 μm厚連續(xù)切片;二甲苯常規(guī)脫蠟、水化;微波抗原熱修復(fù),3%過氧化氫—甲醇溶液10 min,阻斷內(nèi)源性過氧化物酶;10%山羊血清封閉非特異性抗體;滴加一抗,孵育60min;滴加抗兔生物素化二抗,孵育30min;滴加辣根過氧化物標記鏈親和素,孵育 30 min;DAB顯色,蘇木素復(fù)染,中性樹膠封片。PBS緩沖液代替一抗作陰性對照,已知乳腺癌切片作陽性對照。VEGF-A、VEGF-D陽性染色為細胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色顆粒。參照Jüttner等[1]報道的判斷方法,無陽性細胞為陰性,陽性細胞0～5%為+、5%～50%為++、＞50%為+++,+、++、+++均為陽性。以D2-40標記淋巴管,LVD的測算參照Weidner等[2]報道的方法,低倍鏡下尋找陽性管腔密集區(qū)域,高倍鏡觀察并計數(shù),以 5個高倍鏡視野陽性管腔的平均數(shù)表示LVD。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計量資料比較用t檢驗,計數(shù)資料比較用 χ2檢驗,相關(guān)性分析用Spearman等級相關(guān)分析法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌組織中VEGF-A、VEGF-D的表達 宮頸癌組織中VEGF-A、VEGF-D的陽性表達率分別為66.0%(33/50)、56.0%(28/50),與正常宮頸組織的13.3%(2/15)、6.7%(1/15)相比,P均＜0.05。

2.2 VEGF-A、VEGF-D表達與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見表1。由表1可知,VEGF-A、VEGF-D表達與宮頸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P均＜0.05),與臨床分期、組織學(xué)分級、組織學(xué)類型無關(guān)(P均＞0.05)。

2.3 宮頸癌組織中VEGF-A與VEGF-D表達的關(guān)系 宮頸癌組織中VEGF-A與VEGF-D的表達有顯著的等級相關(guān)關(guān)系(P＜0.01),即隨著VEGF-A表達的增強,VEGF-D的表達也增強,見表2。

2.4 宮頸癌組織中VEGF-A、VEGF-D的表達與LVD的關(guān)系 宮頸癌組織中VEGF-A陽性(33例)與陰性(17例)者的LVD分別為(16.39±3.76)條 /HP、(8.97±2.37)條/HP,兩者相比,P＜0.05。宮頸癌組織中VEGF-D陽性(28例)與陰性(22例)者的LVD值分別為(15.31±4.26)條/HP、(7.97 ±2.67)條/HP,兩者相比,P＜0.05。

表1 VEGF-A、VEGF-D表達與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

表2 宮頸癌組織中VEGF-A與VEGF-D的表達關(guān)系(例)

3 討論

VEGF-A、VEGF-D都是VEGF家族成員。VEGF-A是由腫瘤細胞及炎癥浸潤細胞所分泌[3]的一種強有力的促腫瘤生長因子。生理情況下, VEGF-A及其受體的表達水平均很低,但在血供豐富、代謝旺盛的組織及多種腫瘤和血管內(nèi)皮細胞中均有高水平的表達。VEGF-A可通過樹突狀細胞上的VEGFR-1改變樹突狀細胞的功能,降低機體對腫瘤細胞的免疫力[3],還可以誘導(dǎo)腫瘤血管生成。VEGF-A在某種特定條件下也可介導(dǎo)淋巴管生成。VEGF-D是一種分泌型二聚體糖蛋白,它和VEGF-C被稱為淋巴管生長因子。VEGF-D可誘導(dǎo)多種實體瘤內(nèi)或瘤周的淋巴管生成和(或)淋巴管擴張,與惡性腫瘤的淋巴道轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示,宮頸癌組織中VEGF-A、VEGF-D的表達顯著高于正常子宮頸組織,提示二者的高表達可能與宮頸癌生物學(xué)行為有關(guān)。本研究結(jié)果還顯示,VEGF-A、VEGF-D的表達與宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān),且LVD與VEGF-A、VEGF-D的表達相關(guān),提示宮頸癌組織中VEGF-A、VEGF-D的高表達可能與腫瘤的淋巴管生成及淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。

Achen等[4]研究表明,VEGF-D由癌細胞分泌,并可在血管內(nèi)皮細胞中檢測到,但內(nèi)皮細胞的VEGF-D mRNA為陰性,所以推測VEGF-D可能是通過旁分泌模式促進了淋巴管的生成并介導(dǎo)了腫瘤的淋巴管擴散及轉(zhuǎn)移。Amioka等[5]報道,VEGF-A可能是通過激活VEGF-C/VEGF-D/VEGFR-3信號系統(tǒng)以間接的方式來實現(xiàn)促腫瘤淋巴管生成這一生物學(xué)效應(yīng);也有人[6,7]分析可能是 VEGF-A使促血管內(nèi)皮生長因子受體(VEGFR)-2高表達而發(fā)揮促淋巴管生成的作用。本研究結(jié)果顯示,在宮頸癌組織中隨著VEGF-A表達的增強,VEGF-D的表達也增強,提示VEGF-A參與腫瘤淋巴管生成可能與誘導(dǎo)VEGF-D的表達有關(guān)。

綜上所述,VEGF-A、VEGF-D在宮頸癌組織中表達增強,可能在宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要作用。

[1]Jüttner S,Wissmann C,J?ns T,et al.Vascular endothelial growth factor-D and its receptor VEGFR-3：two novel independent prognosticmarkers in gastric adenocarcinoma[J].JClin Oncol,2006,24 (2)：228-240.

[2]Weidner N,Semple JP,WelchWR,et al.Tumor angiogenesis and metastasis-correlation in invasive breast carcinoma[J].N Engl J Med,1991,324(1)：1-8.

[3]Laxmanan S,Robortson SW,Wang E,et al.Vascular endothelial growth factor impairs the functional ability of dendritic cells through Id pathways[J].Biochem Biophys Res Commun,2005,334(1)：193-198.

[4]Achen MG,Williams RA,Baldwin ME,et al.The angiogenic and lymphangiogenic factor vascular endothelial growth factor-D exhibits a paracrinemode of action in cancer[J].Growth Factors,2002,20 (2)：99-107.

[5]Am ioka T,Kitadai Y,Tanaka S,etal.Vascular endothelial growth factor-C expression predicts lymph nodemetastasis of human gastric carcinomas invading the submucosa[J].Eur J Cancer,2002,38 (10)：1413-1419.

[6]FengD,Nagy JA,Brekken RA,etal.Ultrastructural localization of the vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor (VPF/VEGF)receptor-2(FLK-1,KDR)in normalmouse kidney and in the hyperpermeable vessels induced by VPF/VEGF-expressing tumors and adenoviral vectors[J].J Histochem Gytochem, 2000,48(4)：545-556.

[7]Veikkola T,Lohela M,Ikenberg K,etal.Intrinsic versusm icroenvironmental regulation of lymphatic endothelial cell phenotype and function[J].FASEB J,2003,17(14)：2006-2013.