宮頸鱗癌及宮頸上皮內瘤變組織中PINCH、nm23-H1蛋白的表達及臨床意義

孟亞麗 張霞 王立芹 李學慧 朱振龍 張紅真

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，病因尚未完全明了，可能與多種致病因素作用有關，宮頸上皮內瘤變(CIN)是與宮頸癌密切相關的一組癌前病變［1］。PINCH蛋白是LIM(Lin-11、IsI-1和Mec-3蛋白)家族的成員之一，后來被證明該蛋白在多種腫瘤相關間質中表達顯著［2，3］，與多種腫瘤的轉移與侵襲有關。nm23-H1是一種腫瘤轉移抑制基因，抑制細胞的侵襲和轉移。本文對宮頸鱗癌及CIN組織中PINCH和nm23-H1的表達情況進行研究，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集河北醫科大學第一醫院2008至2010年各項臨床資料完整的宮頸鱗癌及CIN蠟塊90例(試驗組)，其中CIN 30例(CIN組)，(CINⅠ10例、CINⅡ8例、CINⅢ12例)，宮頸鱗癌60例。宮頸鱗癌患者病理組織分級，G1級20例，G2級17例，G3級23例;根據國際婦產科聯盟(FIGO，2000年)臨床分期，Ⅰ期26例，Ⅱ期23例;Ⅲ期11例。淋巴結轉移42例。取因子宮肌瘤而行子宮全切術，術后經病理檢查證實為正常宮頸上皮者20例(對照組)。

1.2 試劑與方法 石蠟包埋組織做5μm連續切片，常規HE染色和免疫組化SP法染色。所用兔抗人PINCH蛋白多克隆抗體由Prof.AnnRearden(Department of Pathology，University of California，U.S.A.)惠贈，二抗、三抗購自福州邁新生物技術開發有限公司，用已知陽性的乳腺癌組織作為陽性對照。鼠抗人nm23-H1抗體及SP試劑盒(即用型)購自北京中杉金橋公司，以已知陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。嚴格按SP試劑盒說明書操作，DAB顯色。

1.3 結果判斷標準 PINCH以組織間質中纖維母細胞及肌纖維母細胞的胞膜及胞質出現棕黃色顆粒為陽性細胞;nm23-H1蛋白陽性染色為腫瘤細胞質內出現明顯棕黃色細顆粒。每例隨機選出10個不重復、不重疊的高倍鏡視野(10×40)，計數陽性細胞數及所有細胞數，計算陽性細胞率=∑陽性細胞數/∑細胞數×100%。根據陽性細胞率進行分級，PINCH和nm23-H1陽性細胞率≤10%為陰性，陽性細胞率＞10%為陽性。

1.4 統計學分析 應用SPSS 13.0統計軟件，計數資料比較采用χ2檢驗、校正χ2檢驗及線性趨勢χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同宮頸組織中PINCH和nm23-H1的表達 正常宮頸組織、宮頸上皮內瘤變和宮頸鱗癌組織中，PINCH蛋白的表達呈逐漸增高的趨勢，nm23-H1蛋白的表達呈逐漸降低的趨勢，差異有統計學意義(P＜0.01)。見表1。

表1 不同宮頸組織中PINCH和nm23-H1的表達 例(%)

2.2 PINCH和nm23-H1表達與臨床病理特征的關系 PINCH蛋白和nm23-H1蛋白的表達均與患者的淋巴結轉移及FIGO分期有關(P＜0.01)，與患者年齡、腫瘤的組織病理分級及腫瘤大小無關(P＞0.05)。見表2。

2.3 PINCH和nm23-H1表達的相關性 在CIN組中，PINCH和 nm23-H1的表達有關聯(C=0.697，P＜0.01)。在宮頸癌組中，PINCH和 nm23-H1的表達有關聯(C=0.531，P＜0.01)。見表 3、4。

3 討論

腫瘤的發生、發展、浸潤和轉移是一個多階段、多基因參與的過程，既往對腫瘤的研究多集中于腫瘤細胞本身的變化，對腫瘤的間質研究較少，PINCH主要表達在多種腫瘤相關間質中。PINCH蛋白最早是在20世紀90年代由Rearden從人衰老紅細胞膜中發現的蛋白質［4］，是LIM(Lin-11、IsI-1和 Mec-3蛋白)家族的成員之一，含有5個LIM結構域(雙鋅指結構)，通過它特殊的結構域參與連接整合素和生長因子的信號傳導系統，在整合素和生長因子信號傳導通路中PINCH蛋白處于一個關鍵的“十字”交匯點處，相當于一個“三通管”的作用，所以在腫瘤的發生、發展中可能起著十分重要的作用［3］。本研究發現，正常宮頸、宮頸上皮內瘤變和宮頸鱗癌組織中，PINCH在組織間質中表達呈現逐漸增高的趨勢，差異有統計學意義(P＜0.01)，表明PINCH蛋白主要存在于正在增殖或具有增殖能力的細胞中，與宮頸癌的惡性程度密切相關，可能是宮頸癌的早期事件，與Zhang等［5］研究結果一致。本研究還發現，PINCH陽性表達與宮頸鱗癌的淋巴結轉移和FIGO分期有關，提示PINCH表達強的宮頸組織有較強的侵襲能力，預示預后不良。

表2 宮頸鱗癌組織PINCH和nm23-H1表達與其臨床病理特征的關系 例(%)

表3 CIN組中PINCH和nm23-H1表達的關系 例

表4 宮頸鱗癌組中PINCH和nm23-H1表達的關系 例

nm23-H1是一種腫瘤轉移抑制基因。nm23-H1編碼核苷二磷酸激酶NDPK，其基因的蛋白產物酶參與體內三磷酸核苷的生成，在細胞分化中參與微管的集合以及 G蛋白介導的信號傳遞過程，使肌球蛋白輕鏈磷酸化而抑制細胞遷移，誘導凋亡，抑制分化，影響細胞的活動、粘連和附著，從而抑制細胞的侵襲和轉移［6］。nm23-H1等位基因的突變、缺失、低表達與多種惡性腫瘤發生轉移的潛能密切相關［7］。目前普遍認為nm23-H1與腫瘤發生發展、轉移關系密切［8］。本研究結果顯示，正常宮頸、宮頸上皮內瘤變和宮頸鱗癌組織中，nm23-H1表達呈現逐漸降低的趨勢，差異有統計學意義(P＜0.01)，說明nm23-H1與宮頸鱗癌發生、發展密切相關，同時還發現臨床分期越晚，nm23-H1表達越低，淋巴結轉移組陽性表達率顯著低于無淋巴結轉移組。提示nm23-H1蛋白的表達缺失可能在宮頸上皮內瘤變發展為宮頸癌及宮頸癌繼續進展轉移過程中發揮著重要作用，表達降低預示預后不良。

本研究結果顯示，在宮頸上皮內瘤變和宮頸鱗癌組織中，PINCH和nm23-H1的表達相關(P＜0.05)。提示在宮頸癌發生和進展、侵襲轉移的生物學行為中，PINCH和nm23-H1可能起到協同作用，若明確其作用，從而阻斷宮頸上皮內瘤變向宮頸癌發展，為宮頸癌的早期治療和及早阻止宮頸癌的淋巴結轉移提供新途徑。

1 樂杰主編.婦產科學.第7版.北京:人民衛生出版社，2008.261-263.

2 閆寶勇，王大維，李慶星，等.COX-2及PINCH蛋白在口腔鱗狀細胞癌中的表達及其相關性.現代口腔醫學雜志，2009，23:55-57.

3 鄭燕，李學慧，孟亞麗，等.子宮內膜癌中PINCH蛋白的表達及臨床意義.中國綜合臨床，2010，26:912-915.

4 Rearden A.A new LIM protein containing an autoepitope homologous to“senescent cell antigen”.Biochem Biophys Res Commun，1994，201:1124-1131.

5 Zhang HZ，Li XH，Zhang X，et al.PINCH protein expression in normal endometrium，atypical endometrial hyperplasia and endometrioid endometrial carcinoma.Chemotherapy，2010，56:291-297.

6 范波，姚珍薇.宮頸癌中EphA2，nm23-H1蛋白的表達與淋巴結轉移的相關性研究.中華婦幼臨床醫學雜志，2008，4:15-18.

7 王從玉，鄧躍華，劉弋，等.nm23 VEGF-C及VEGFR-3在大腸癌中的表達及意義.中國腫瘤臨床，2008，35:1117-1120.

8 郭亮，張敏，高潔凡.轉移相關基因蛋白CD44v6和nm23在宮頸病變中的表達及意義.河北醫藥，2009，31:911-913.