復方補骨脂顆粒對維甲酸致骨質疏松癥大鼠的影響研究

張茹 秦莉偉 陳軍麗 許宏斌

骨質疏松(osteoporosis)是由于骨量減少，骨的微觀結構退化，致使骨的脆性增加，并且易于發生骨折的一種全身性骨骼疾病。中藥治療、預防骨質疏松是目前臨床治療的重要手段之一。復方補骨脂方劑為我院多年協定處方，對改善骨質疏松患者的癥狀取得了明顯療效［1-3］。本實驗觀察了復方補骨脂顆粒對維甲酸致骨質疏松大鼠的影響，為臨床使用該顆粒劑提供客觀理論依據。

1 材料與方法

1.1 藥物與儀器 復方補骨脂顆粒(石家莊市第三醫院，批號:060215);仙靈骨葆膠囊(貴州同濟堂制藥有限公司，批號: 040711，規格0.5g/粒);鈣測試盒、磷測試盒、堿性磷酸酶測試盒(均為南京建成生物工程研究所產品);維甲酸原料(上海南翔試劑有限公司);儀器:5000型火焰原子吸收分光光度計(美國)、自動生化分析儀。

1.2 實驗動物 SD大鼠(二級)，雄性，體重200～220 g，由河北省實驗動物中心提供，許可證號為SCXK(冀)2003-1-003。

1.3 實驗方法 將大鼠隨機分為6組，每組10只，分別為正常對照組(純化水1 ml/100 g)、模型對照組(維甲酸70 mg/kg +純化水1 ml/100 g)、復方補骨脂顆粒小劑量組(維甲酸70 mg/kg+復方補骨脂顆粒0.35 g/kg)、復方補骨脂顆粒中劑量組(維甲酸70 mg/kg+復方補骨脂顆粒0.7 g/kg)，復方補骨脂顆粒大劑量組(維甲酸 70 mg/kg+復方補骨脂顆粒

1.4 g/kg)及陽性藥仙靈骨堡膠囊組(維甲酸70 mg/kg+仙靈骨葆膠囊0.7 g/kg)，連續2周。2周后6組大鼠均停服維甲酸，繼續給藥2周。末次給藥后40 min，將大鼠用乙醚麻醉，腹主動脈取血，分離血清，采用化學法測定血清鈣、磷含量，堿性磷酸酶(ALP)活性;處死大鼠，剖取睪丸、前列腺+精囊腺稱重，計算臟器系數;迅速小心剖取左側股骨，并鈍性剝離所有軟組織，將左側股骨以氯仿∶甲醇混合液(2∶1)脫脂72 h，置烘箱中120℃干燥6 h，在將干骨置800℃馬福爐內灰化6 h，冷卻后稱重。取灰分精密稱定適量，加6 mol/L稀鹽酸溶解成無色透明液體，定容10 ml，使用火焰原子吸收分光光度計測定骨鈣含量，采用鉬蘭法測定骨鈣含量。

1.4 統計學分析 計量資料以 ˉx±s表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對骨質疏松大鼠體重及一般情況的影響 模型對照組大鼠活動緩慢，反應遲鈍，倦縮，拱背，豎毛，毛色枯槁，食量減少，體重明顯減輕(P＜0.01)。復方補骨脂顆粒(0.35 g/kg、0.7 g/kg、1.4 g/kg)組大鼠一般狀況明顯較模型對照組大鼠改善，體重明顯增加(P＜0.01)。見表1。

表1 復方補骨脂顆粒對骨質疏松大鼠體重的影響n=10，g，±s

表1 復方補骨脂顆粒對骨質疏松大鼠體重的影響n=10，g，±s

注:與模型對照組比較，*P＜0.01

組別 劑量(g/kg)體重(g)實驗前 實驗后正常對照組 - 216±9 265±16*模型對照組 - 218±17 209±14復方補骨脂顆粒 0.35 211±9 232±13* 0.7 215±14 249±14* 1.4 207±12 248±13*仙靈骨葆膠囊 0.7 213±15 241±18*

2.2 對骨質疏松大鼠股骨骨灰重的影響 模型對照組大鼠骨灰重明顯較正常對照組大鼠降低(P＜0.01)。復方補骨脂顆粒(0.35 g/kg、0.7 g/kg、1.4 g/kg)組大鼠骨灰重均較模型對照組大鼠明顯增高(P＜0.05或＜0.01)。見表2。

表2 復方補骨脂顆粒對骨質疏松癥大鼠骨灰重的影響n=10，g，±s

表2 復方補骨脂顆粒對骨質疏松癥大鼠骨灰重的影響n=10，g，±s

注:與模型對照組比較，*P＜0.05，#P＜0.01

組別 劑量(g/kg)灰重正常對照組 - 0.352±0.029#模型對照組 - 0.207±0.026復方補骨脂顆粒 0.35 0.251±0.048* 0.7 0.268±0.026# 1.4 0.287±0.042#仙靈骨葆膠囊 0.7 0.304±0.039#

2.3 復方補骨脂顆粒對大鼠骨鈣、磷含量的影響 模型對照組大鼠骨鈣含量明顯較正常對照組大鼠降低(P＜0.01)。復方補骨脂顆粒(0.35 g/kg、0.7 g/kg、1.4 g/kg)組大鼠骨鈣含量明顯較模型對照組大鼠升高(P＜0.01)，但6組大鼠骨磷差異無統計學意義(P＞0.05)。見表3。

表3 復方補骨脂顆粒對骨質疏松大鼠骨鈣、磷含量的影響n=10，ng/g，±s

表3 復方補骨脂顆粒對骨質疏松大鼠骨鈣、磷含量的影響n=10，ng/g，±s

注:與模型對照組比較，*P＜0.01

組別 劑量(g/kg)鈣含量 磷含量正常對照組 - 202±14*133±12模型對照組 - 168±9 124±12復方補骨脂顆粒 0.35 189±11* 130±9 0.7 189±8* 137±17 1.4 183±14* 129±9仙靈骨葆膠囊 0.7 197±8*131±8

2.4 對骨質疏松大鼠性腺指數的影響 模型對照組大鼠睪丸指數、前列腺+精囊指數均較正常對照組顯著降低(P＜ 0.01)，表明大鼠灌服維甲酸已造成性腺器官萎縮。復方補骨脂顆粒(0.35 g/kg、0.7 g/kg、1.4 g/kg)組大鼠睪丸指數、前列腺+精囊腺指數顯著高于模型對照組(P＜0.05或＜0.01)。見表4。

表4 復方補骨脂顆粒對骨質疏松大鼠性腺器官重量的影響n=10，±s

表4 復方補骨脂顆粒對骨質疏松大鼠性腺器官重量的影響n=10，±s

注:與模型對照組比較，*P＜0.05，#P＜0.01

組別 劑量(g/kg)睪丸指數(g/100 g)前列腺+精囊指數(g/100 g)正常對照組 - 1.240±0.169# 0.434±0.056#模型對照組 - 0.818±0.172 0.269±0.085復方補骨脂顆粒 0.35 1.051±0.199* 0.348±0.042* 0.7 0.994±0.0843# 0.330±0.067* 1.4 0.957±0.133 0.345±0.086*仙靈骨葆膠囊 0.7 1.154±0.189#0.326±0.075

2.5 對骨質疏松大鼠血液生化指標變化 6組大鼠血鈣、血磷含量無明顯變化(P＞0.05)，但堿性磷酸酶(ALP)活性較正常對照組明顯升高(P＜0.01)，復方補骨脂顆粒(0.35 g/kg、0.7 g/kg、1.4 g/kg)組大鼠堿性磷酸酶(ALP)活性均明顯較模型對照組降低(P＜0.05或＜0.01)。見表5。

表5 對骨質疏松大鼠血液生化指標的影響 n=10，±s

表5 對骨質疏松大鼠血液生化指標的影響 n=10，±s

注:與模型對照組比較，*P＜0.05，#P＜0.01

組別 劑量(g/kg)血鈣含量(mmol/L)血磷含量(mg/dl)堿性磷酸酶(U/dl)正常對照組 - 2.61±0.23 5.6±0.7 9.1±2.4#模型對照組 - 2.20±0.24 4.5±0.7 15.9±4.3復方補骨脂顆粒 0.35 2.49±0.41 5.0±0.7 12.6±4.4 0.7 2.50±0.30 5.2±1.3 10.1±3.2# 1.4 2.81±0.33 5.3±0.9 10.8±3.6#仙靈骨葆膠囊 0.7 2.53±0.29 5.3±0.7 11.4±3.0*

3 討論

骨質疏松癥是一種全身性代謝性骨骼疾病，以骨量減少，骨的微細結構破壞為特征，導致骨脆性增加，容易發生骨折，其發病率和死亡率都較高。骨質疏松癥可分為原發性和繼發性兩類，其中原發性骨質疏松癥占骨質疏松癥的90%［4］。它又可分為2種亞型，即Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型又稱絕經后骨質疏松癥，Ⅱ型為老年性骨質疏松癥。繼發性骨質疏松癥可繼發于其他疾病或由藥物引起。中醫把骨質疏松癥歸屬“骨痿、骨枯、骨痹”范疇，認為其發病機理為腎虛及脾虛，故針對病機而采用補腎壯骨、益氣健脾的治療法則。治療骨質疏松的中藥盡管在臨床上顯示了良好的療效，但需要進行大量系統的試驗研究工作，如臨床前藥理、毒理試驗，動物脫毒試驗等。

本實驗結果表明:復方補骨脂顆粒可明顯改善維甲酸致骨質疏松大鼠的一般狀況，減緩體重的減輕和性腺器官的萎縮，降低血清堿性磷酸酶活性，增加骨質疏松大鼠骨灰重及骨鈣含量。研究結果為臨床用藥提供了必要的理論依據。

1 吳波，徐冰，黃添友，等.抗骨松沖劑對維甲酸所致大鼠骨質疏松的防治作用.中國中西醫結合雜志，1996，16:32-36.

2 陳奇主編.中藥藥理實驗方法學.第1版.北京:人民衛生出版社，1996.217.

3 徐叔云主編.藥理實驗方法學.第2版.北京:人民衛生出版社，1991.136.

4 白新明.椎體成形術治療老年骨質疏松性椎體壓縮骨折體會.河北醫藥，2010，32:1928-1929.