β2-興奮劑類藥物殘留檢測的研究進展

趙曉鳳，徐雪華，萬宇平 ，李 靜

（1.新疆獸藥飼料監察所，新疆 烏魯木齊 830000；2.烏魯木齊市農產品質量安全檢測中心，新疆 烏魯木齊 830000；3.北京勤邦生物技術有限公司，北京 102206）

β2-興奮劑類藥物（β2-腎上腺素受體激動藥，BAA）是一類與腎上腺素受體結合，激動受體，產生腎上腺素樣作用的藥物的總稱，又可稱為擬交感胺類藥物，基本化學結構為β-苯乙胺，一般可分為苯胺型（如克倫特羅，CL）、苯酚型（如沙丁胺醇，SAL）、苯二酚型（如特布他林）等3大類。由于β2-興奮劑類藥物具有降低脂肪含量，提高瘦肉率的作用，所以許多生產者就采用BAA作為飼料添加劑來提高瘦肉率和改善胴體品質。后來發現BAA對人體有潛在的危害，現已被世界各國列為禁止用于食品動物的化學物質。因此，研究BAA殘留對人類健康有著積極的意義。

1 檢測方法

目前對BAA類藥物殘留檢測的方法主要有高效液相色譜法（HPLC）、氣/質聯用分析法（GC/MS）、放射免疫分析法（IA）、氣相色譜法（GC）、高效薄層色譜法（HPTLC）、液/質聯用分析法（LC/MS）、酶聯免疫吸附測定法（ELISA）和放射受體分析法等。

1.1 高效液相色譜法（HPLC） HPLC是具有高效分離和檢測能力的方法，我國將其作為檢測瘦肉精的半確證性方法，其最低檢測限為0.05μg/kg，優點是精確度高，假陽性率低，缺點是檢測過程煩瑣，時間長，價格高，操作難度較大且只能用于單樣本檢驗。趙榕等運用反相高效液相色譜法測定豬肝中的鹽酸克倫特羅，在243 nm檢驗波長下，用Waters-alliance高效液相色譜系統進行檢測，流動相為甲醇和0.01mol/L磷酸二氫鈉（35∶65），最后根據保留時間定性，掃描光譜進一步確證，通過對試樣峰高或峰面積與標準峰高或峰面積進行比較定量，得出最低檢出濃度為0.25mg/kg，濃度在0.1～2.0μg/mL具有很好的線性關系，回收率達（101.2±9.75）%。

1.2 氣/質聯用分析法 （GC/MS） 氣/質聯用分析法（GC/MS）比HPLC靈敏度更高，假陽性率更低，在我國為確證性方法，其優點是可以對多種殘留物進行定性、定量分析，但要求樣品有較低的沸點且具有熱穩定性。而沙丁胺醇由于極性大、沸點高，不適宜直接用這種方法分析，往往需要衍生化后再作進一步檢驗。苗虹等人選用BSTFA-甲苯作衍生物，以弱極性或非極性的毛細管柱為氣相色譜柱，得出此法的檢測限為0.5g/kg，回收率為75.5%。

1.3 放射免疫分析法（IA） 放射免疫分析法（IA）的主要作用機理是對鹽酸克倫特羅殘留進行放射性免疫分析，用氚標抗原來測定抗體。但由于其分子量不大，不能成為抗原，故首先要把它與其他載體結合成半抗原再行檢測。這種方法靈敏度要比ELISA高，但由于實驗條件要求較高，目前不能廣泛應用，相關的報道也不多。用此技術檢測尿、肝中的瘦肉精殘留量，其檢測靈敏度尿樣為0.13mg/mL，肝臟為0.461g/kg。Normand Braulieu等（1985）首次用SAL-BSA作連接物免疫家兔，獲得了抗SAL多克隆抗體，用C14標記琥珀酸酐，建立了檢測SAL的放射免疫分析方法。Adam等（1990）用SAL-BSA連接物免疫小鼠，首次制備了抗SAL單克隆抗體，并用此單抗進行了SAL殘留的放射免疫分析。Delahaut等利用SAL抗血清研究出了可以進行多種BAA類藥物檢測的RIA試劑盒，該試劑盒和CL的交叉反應是118%，檢測限達1～4μg/kg。

1.4 酶聯免疫吸附測定法（ELISA） Bucknall等（1993）用CL-OA偶聯物免疫家兔獲得了抗CL多克隆抗體，并建立了CL的競爭ELISA檢測法，用于檢測牛肝中的CL殘留。其他研究者還分別用牛血清蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）連接CL免疫兔、羊獲得多克隆抗體，建立了ELISA、RIA等免疫檢測方法。Petruzzelli等（1996）用CL－BSA連接物作免疫原免疫Balb/c小鼠，用雜交瘤技術首次獲得CL的單克隆抗體，建立了檢測CL的競爭ELISA法，并對馬尿和人尿進行了分析，其靈敏度達1 μg/L。近幾年國內對CL、SAL殘留檢測的報道逐漸增多，多名研究者都建立了酶免疫分析方法用于檢測動物組織、飼料中的CL和SAL。王建平等在國內首次采用SAL-BSA免疫家兔制備SAL多克隆抗體，建立了檢測豬肝與豬尿中SAL與CL的ELISA法，得出檢測限為0.48μg/kg。

1.5 其他方法 除了以上提到的快速篩選方法和確證檢測方法外，還有其他用于檢測BAA殘留的分析方法。湯曉勤等（2004）建立了一種單極掃描極譜法來檢測豬肉中的CL，其檢測限為1.2 μg/kg，此方法無需昂貴的儀器，適于基層實驗室使用。胥傳來等（2005）曾報道采用間接競爭化學發光法檢測豬肉中的CL，檢出限可達0.01μg/L，檢測范圍為0.04～25.8μg/L。段建平等（2005）建立了一種可同時檢測飼料中SAL、CL和西馬特羅的毛細管區帶電泳法，檢測限達20μg/kg，該方法可直接用于對飼料樣品的檢測。戴華等（2003）建立了一種HPLC法用于檢測飼料中的SAL和CL，使用二極管陣列檢測器檢測，檢測限分別為0.36 μg/g和0.1 μg/g。張素霞（2005）曾報道了一種檢測豬飼料中RAC的HPLC法，用熒光檢測器檢測，檢測限達0.48 μg/g。近幾年，國內有多名研究者都建立了儀器分析方法用于對此類藥物的殘留檢測。

2 分析比較

目前，國內外的食品安全事件之所以接連發生，除了有關食品質量安全的法律法規不健全之外，食品檢測技術不過關、檢測儀器使用不方便也是很重要的原因。因此為保護人類健康，進行有效的監管，盡快建立一種實用、快捷、準確可靠的檢測技術至關重要。

由于各種檢測方法都存在自身的優點和缺點，故對各類檢測方法要進行合理運用。對于BAA類藥物殘留檢測來說，雖然高效液相色譜法、GC/MS法等具有精確可靠、靈敏度高、重復性好以及假陽性少等優點，但需要昂貴的儀器設備，而且要選擇出合理的前處理條件和色譜條件，單位時間內能處理樣品的能力有限。酶聯免疫測定法適合于對藥物殘留的初步篩選，它能在短短的幾個小時內檢測幾十上百個試樣，屬于快速檢測方法。它不需要復雜的儀器設備，而且由于抗體對抗原有高度的特異性，因此檢測靈敏度較高；同時由于抗原抗體發生反應的條件比較簡單，所以樣品前處理可以簡化，使得整體操作簡單；通過酶顯色，用酶標儀直接讀數判定結果，速度快，檢測成本低，非常適合在基層檢測部門應用。

近幾年國內對BAA類藥物殘留的免疫法檢測報道逐漸增多，但大多是針對CL，雖然也制備出SAL單克隆抗體，但對SAL的免疫研究和殘留檢測還處于起步階段。因此，盡快建立一套完整的BAA類藥物殘留檢測方法，對于進一步健全和完善我國食品安全保障體系，維護社會穩定，促進經濟發展和國際貿易市場競爭力具有十分重要的理論意義和現實意義。

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