RCAS1、Caspase-8在胃腺癌組織中的表達(dá)及意義

(河南省人民醫(yī)院，鄭州450003)

RCAS1是Sonoda等［1］在1996年新發(fā)現(xiàn)的一種 蛋白質(zhì)，在子宮癌、卵巢癌、乳腺癌等多種腫瘤組織中異常表達(dá)，并與腫瘤的分化、侵襲和惡性程度相關(guān)。Caspase家族的蛋白酶解級(jí)聯(lián)反應(yīng)控制著細(xì)胞凋亡的發(fā)生發(fā)展，是細(xì)胞凋亡的中心環(huán)節(jié)和執(zhí)行者。Caspase-8廣泛表達(dá)于各種成人組織，其中在血液淋巴細(xì)胞中表達(dá)尤為豐富［2］。研究發(fā)現(xiàn)，Caspase-8的低表達(dá)與人類多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及腫瘤的免疫逃逸有關(guān)［3］。但二者在胃癌組織中的表達(dá)情況尚未見報(bào)道。本研究采用免疫組化SP法檢測(cè)RCAS1、Caspase-8在胃腺癌組織中的表達(dá)，探討其表達(dá)與胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，為進(jìn)一步尋求胃癌等惡性腫瘤的發(fā)生機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料 選取河南省人民醫(yī)院和鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2007年1～12月手術(shù)切除的胃腺癌組織46例，其中男26例，女20例，年齡33～81歲，患者術(shù)前均未接受化療和放療，均經(jīng)常規(guī)病理證實(shí)。另選取手術(shù)切緣經(jīng)病理證實(shí)為正常胃黏膜組織46例作為對(duì)照。全部標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，以備常規(guī)HE染色和免疫組化使用。

1.2 主要試劑 羊抗人RCAS1單克隆抗體由美國(guó)Zymed公司提供;兔抗人Caspase-8多克隆抗體由美國(guó)Scbt公司提供;免疫組化SP檢測(cè)試劑盒及DAB顯色試劑盒均由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 免疫組化 參照免疫組化SP試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。主要操作步驟為:5 μm石蠟連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，10%蛋清封閉，滴加一抗(RCAS1抗體稀釋濃度為1∶200，Caspase-8多克隆抗體為即用型)，1%H2O2封閉內(nèi)源性過氧酶，滴加二抗及鏈霉親和素—過氧化物酶復(fù)合物，DAB-H2O2溶液顯色，蘇木素復(fù)染。每次實(shí)驗(yàn)均以PBS代替一抗作陰性對(duì)照，以已知RCAS1、Caspase-8蛋白陽(yáng)性表達(dá)的食管癌組織作陽(yáng)性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判斷 參照文獻(xiàn)［4］高倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比及著色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。陽(yáng)性細(xì)胞比例:≤10%為1分，11% ～50%為2分，＞50%為3分;按染色強(qiáng)弱:陰性為0分，淡黃色為1分，中度黃色為2分，棕黃色為3分。按照陽(yáng)性細(xì)胞得分×染色強(qiáng)弱得分計(jì)總分，總分＜3為陰性、≥3為陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，陽(yáng)性率之間的比較用χ2檢驗(yàn)，兩變量之間關(guān)系用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RCAS1、Caspase-8蛋白表達(dá) RCAS1蛋白定位于胃腺癌癌細(xì)胞及正常胃黏膜上皮細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜，呈棕黃色。Caspase-8免疫組化染色陽(yáng)性細(xì)胞定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒，顯色強(qiáng)時(shí)為棕褐色。陰性對(duì)照均無(wú)陽(yáng)性信號(hào)顯示，陽(yáng)性對(duì)照有明顯陽(yáng)性信號(hào)顯示。正常胃黏膜組織及胃腺癌組織中RCAS1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為60.87%(28/46)和84.78%(39/46)(P＜0.05)。正常胃黏膜組織及胃腺癌組織中Caspase-8蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為80.43%(37/46)和65.22%(30/46)(P＜0.05)。

2.2 RCAS1與Caspase-8表達(dá)的相關(guān)性分析RCAS1、Caspase-8蛋白在胃腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析，呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.298、P＜0.05)。

3 討論

RCAS1異常表達(dá)不但與一些惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，而且RCAS1陽(yáng)性病例臨床預(yù)后較差，可作為臨床預(yù)后判斷指標(biāo)，尤其是浸潤(rùn)性腫瘤［5，6］。本研究結(jié)果說(shuō)明RCAS1蛋白低表達(dá)與胃腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。RCAS1在腫瘤組織中過表達(dá)可以抑制自然殺傷細(xì)胞和T、B細(xì)胞的生長(zhǎng)，并介導(dǎo)其凋亡，因此RCAS1可能與腫瘤免疫逃避有關(guān)［1］。FAS系統(tǒng)是目前研究最清楚的介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，F(xiàn)AS與其天然配體或相應(yīng)膜抗體結(jié)合，通過激活Caspase家族完成細(xì)胞凋亡信號(hào)傳遞，是細(xì)胞凋亡的主要途徑之一［5］。Caspase-8是死亡受體介導(dǎo)的凋亡途徑中關(guān)鍵的啟動(dòng)子，主要以無(wú)活性的酶原形式存在于細(xì)胞中。有報(bào)道多種人類腫瘤在該區(qū)域雜合缺失，包括神經(jīng)母細(xì)胞瘤、肺癌、頭頸部癌、甲狀腺濾泡性癌等［2］。Caspase-8基因甲基化、基因突變及其他表達(dá)異常也與某些腫瘤、自身免疫性疾病有關(guān)。故從其結(jié)構(gòu)推測(cè)Caspase-8在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中可能起著重要作用［7，8］。本研究結(jié)果顯示，Caspase-8蛋白高表達(dá)與胃腺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。RCAS1、Caspase-8蛋白在胃腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明二者在胃癌等惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中存在某種聯(lián)系，但其機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

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