G-6608復方噴霧中氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定含量測定及穩定性研究

魏 麗，高永良，郝存江*

(1.天津中醫藥大學，天津 300193；2.軍事醫學科學院毒物藥物研究所，北京 100850)

G-6608復方噴霧中的主要成分為氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定,主要用于鎮痛消炎，既可治療口腔炎癥，亦可外用于一般割傷、擦傷等。采用高效液相法分別測定兩組分含量的文獻報道較多[1-3]，但尚未有同時測定兩藥含量的報道。為此筆者建立同時測定氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定的高效液相方法，并考察其穩定性，為該制劑進一步研發和質量評價提供科學依據。

1 儀器與試藥

安捷倫1100高效液相色譜儀；pH計(pHS-3B)；BT124S萬分之一電子分析天平(Sartorius)；BP211D十萬分之一電子分析天平(Sartorius)。 氫溴酸高烏甲素原料藥，批號：20090201L(陜西大河藥業有限責任公司)；醋酸氯己定原料藥，批號:081202(錦州九泰藥業有限責任公司)；G-6608復方噴霧劑(本室自行研制)；乙腈：色譜純(SK Chemicals)；磷酸二氫鉀：分析純(北京化學試劑公司)；三乙胺：分析純(北京化學試劑公司)；水：SCD-Ⅱ高純水裝置制得。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm)；流動相：乙腈-0.025 mol/L KH2PO4(33∶67)，加0.3%三乙胺并調pH至3.0；流速：1.0 mL/min；檢測波長：252 nm；進樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取氫溴酸高烏甲素標準品20 mg,醋酸氯己定標準品10 mg同時置于100 mL容量瓶中，流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備液。精密量取對照品儲備液1.0 mL置于10 mL容量瓶中，流動相稀釋定容至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密量取G-6608復方噴霧1.0 mL，置于50 mL容量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻。再量取1 mL稀釋液置10 mL容量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻,0.45 μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液 按處方比例制成不含氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定的陰性制劑,按“2.2.2”項下制備陰性對照溶液。

2.3 系統適用性 將“2.2”配置的對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，分別精密吸取20 μL進樣。結果表明，陰性對照無干擾，色譜圖見圖1。

A.對照品；B.供試品；C.陰性對照

2.4 破壞試驗 將氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定置于0.1 mol/mL鹽酸、0.01 mol/mL氫氧化鈉、3%雙氧水、(450 0±500)Lx光照和100 ℃高溫條件下加速破壞,于不同時間取樣測定，記錄色譜峰。考察分解產物對主藥測定的干擾情況，見圖2。

A.酸破壞;B.堿破壞;C.氧化破壞;D.高溫破壞;E.光照破壞1.氫溴酸高烏甲素；2.醋酸氯己定

結果顯示，本方法能有效檢出各破壞試驗產生的降解產物，且降解產物峰與兩主藥峰均能達到良好分離，故本色譜條件能夠滿足有關物質考察的要求。

2.5 線性關系考察 精密量取對照品貯備液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、5.0 mL，分別置于10 mL容量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項色譜條件進樣分析,記錄峰面積。以濃度(X)為橫坐標，峰面積(Y)為縱坐標，進行線性回歸，氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定的回歸方程分別為：Y=15.35X+3.416(r=0.999 96，n=3)、Y=47.19X+2.368(r=0.999 91，n=3)。結果顯示，二者檢測濃度的線性范圍分別為5～100 μg/mL、2.5～50 μg/mL。

2.6 精密度試驗 制備20 μg/mL氫溴酸高烏甲素和10 μg/mL醋酸氯己定的混合對照品溶液按“2.1”項色譜條件進樣20 μL,重復6次，記錄色譜峰面積，求得峰面積氫溴酸高烏甲素 RSD為0.31%、醋酸氯己定RSD為0.29%，表明精密度良好。

2.7 穩定性考察 配制高、中、低3個濃度的氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定混合溶液,按“2.1”項下色譜條件分別于0、2、4、6、8 h，進樣分析，以峰面積計算RSD值。結果,RSD均小于2%，表明供試品溶液在8 h內相對穩定。

2.8 回收率試驗 按處方比例的80%、100%、120%精密稱取氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定對照品，按處方比例加入輔料，按“2.2.2”項進行測定,計算加樣回收率,結果見表1。

2.9 最低檢測限考察 根據信噪比為3∶1時相應的濃度為最低檢測濃度，本方法氫溴酸高烏甲素、醋酸氯己定的最低檢測限分別為0.006 ng、0.002 ng。

2.10 含量測定 取G-6608復方噴霧劑3批，按“2.2.2”項制備供試品溶液，測定其含量，結果見表2。

2.11 每噴主藥含量的測定 本品為定量噴霧劑，依據藥典要求檢查每噴主藥含量。取G-6608復方噴霧劑3批，按噴霧劑每噴主藥含量測定法[4]測定，以水為吸收溶劑，將撳壓10次的溶液按“2.2.2”項制備供試品溶液,進樣20 μL，計算每噴主藥含量，結果見表2。

表1 回收率測定結果

表2 樣品含量和每噴主藥含量測定結果

2.12 穩定性研究 取同一批次(批號：20100301)G-6608復方噴霧劑，置于光照(450 0±500)Lx，高溫60 ℃條件下，于第5、10天取樣，以外觀性狀、pH值、含量和有關物質為指標，考察其穩定性。結果見表3。從數據可知，除光照條件不穩定外,其他各項指標均無明顯變化，提示在生產及運輸過程中應避光保存，其他試驗結果表明本品穩定性較好。

表3 G-6608復方噴霧穩定性試驗結果

3 討論

3.1 紫外光譜掃描結果表明，氫溴酸高烏甲素、醋酸氯己定的最大吸收波長分別為252 nm、260 nm，考慮同濃度下醋酸氯己定的吸收值約為氫溴酸高烏甲素3倍,氫溴酸高烏甲素和醋酸氯己定在制劑中的含量比為2∶1，因此選擇252 nm作為該制劑含量測定的檢測波長。

3.2 在堿破壞試驗中，在0.01 mol/mL氫氧化鈉中室溫放置2 h醋酸氯己定幾乎完全降解，說明醋酸氯己定在堿性環境中極不穩定。

[1]李軍,徐本明,郎躍武,等.HPLC法測定注射用氫溴酸高烏甲素的含量及其他生物堿[J].齊魯藥事,2006,26(10):1497-1499.

[2]劉秀花,史彥斌,管玉珠.氫溴酸高烏甲素原料藥的穩定性研究[J].藥物研究,2009,18(8):21-22.

[3]賈立華,潘強,高永良,等.復方醋酸氯己定洗液的制備及臨床療效[J].中國新藥雜志,2004,13(12):1347-1349.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:化學工業出版社,2010:附錄13.