HPLC法測(cè)定葛蒡合劑中葛根素的含量

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(1.吉林大學(xué)第三醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130021；2.吉林省人民醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130021)

葛蒡合劑是由葛根、牛蒡子、荊芥、薄荷等5味中藥組成的復(fù)方制劑[1]。具有辛涼透表的功效，用于風(fēng)熱感冒，頭痛發(fā)熱，咳嗽咽痛及麻疹初期或出疹不透等癥。本文選擇葛根中葛根素含量作為指標(biāo)成分，建立了葛蒡合劑中葛根素的HPLC測(cè)定法，為該藥的質(zhì)量控制提供了定量評(píng)價(jià)方法，以便更好地控制產(chǎn)品的質(zhì)量，保證安全及療效。

1 儀器與試藥

島津LC-20A高效液相色譜儀；紫外檢測(cè)器，CLASS-VP工作站，色譜柱:Agilent C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)。芍藥苷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)0736-9913,供含量測(cè)定用。葛蒡合劑為通化鴻茂有限公司提供樣品，批號(hào)：20090105、20090106、20090107，甲醇為優(yōu)級(jí)純，水為純化水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用Agilent C18，4.6 mm×150 mm，5 μm色譜柱，以甲醇-水(25∶75)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm。理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 取葛根素對(duì)照品的甲醇溶液，經(jīng)UV-2201紫外分光光度計(jì)200 nm～320 nm范圍內(nèi)掃描，葛根素在250 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇250 nm為本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定波長(zhǎng)。

2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取葛根素對(duì)照品適量，加甲醇溶解,并配制成每1 mL含0.07 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備 精密量取本品1.5 mL，置50 mL量瓶中，加60%甲醇適量,超聲處理(功率250 W,頻率33 kHz)20 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，取上清液，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5 陰性對(duì)照液制備及干擾試驗(yàn) 按處方取去除葛根藥材的其它藥材，按樣品工藝同法制備，制得陰性對(duì)照樣品，再按供試品溶液的制備方法操作，制成陰性對(duì)照溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液，供試品溶液，陰性對(duì)照溶液各10 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，繪制色譜圖，測(cè)定結(jié)果表明：供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，具有相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性對(duì)照色譜中無干擾。

2.6 線性關(guān)系 精密稱取葛根素對(duì)照品溶液4、8、12、16、20 μL，分別注入液相色譜儀，按前述色譜條件測(cè)定，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求出回歸方程為Y=220 696 1.313X+402 97.677，相關(guān)系數(shù)r=0.999 7,線性范圍為進(jìn)樣量在0.28 μg～1.40 μg范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，依法連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10 μL,在上述色譜條件下，測(cè)定色譜峰面積，測(cè)定結(jié)果峰面積平均值為160 928 4.125，RSD=0.54%，表明精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液10 μL，按上述條件進(jìn)行分析,測(cè)定時(shí)間為0、2、4、6、8 h，測(cè)定色譜峰面積，結(jié)果表明供試品溶液的8 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD=0.76%。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次樣品5份,按2.4項(xiàng)下的方法制備供試品溶液。按前述色譜條件進(jìn)行分析，測(cè)定結(jié)果表明樣品中葛根素含量(mg/10 mL)分別為25.401 5、25.103 6、25.601 7、25.006 8、24.986 1，平均25.219 9 mg/10 mL，RSD為1.07%。結(jié)果表明重復(fù)性好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知葛根素含量的樣品(批號(hào)：20090105,每10 mL葛根素含量為25.219 9 mg)1.0 mL，5份，分別精密加入葛根素對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法操作，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表1結(jié)果表明方法的回收率較好。

2.11 樣品的含量測(cè)定 按上述方法，制備供試品溶液，測(cè)定3批葛蒡合劑中葛根素的含量，結(jié)果見表2。

表2 3批樣品中葛根素含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

在實(shí)驗(yàn)過程中,曾選用甲醇-水-冰醋酸(25∶64∶1)、甲醇-0.5%醋酸(25∶75)等多種流動(dòng)相，因其色譜峰分離效果不好，而未被應(yīng)用。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明,確定甲醇-水(25∶75)為流動(dòng)相，其色譜峰得到較好分離，而被采用[2-3]。

本文采用高效液相色譜法，測(cè)定了葛蒡合劑中葛根素的含量，其方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，靈敏，回收率較好，可為該制劑的質(zhì)量控制提供一個(gè)有效內(nèi)在質(zhì)量控制指標(biāo)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn):第5冊(cè)[S].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:173.

[2]楊翠微,張俊瑋.HPLC測(cè)定參蘇丸中葛根素的含量[J].湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2000,6(10):36.

[3]黃亞非,張永明,何翱,等.采用高效液相色譜法測(cè)定心脈通口服液中葛根素含量[J].中國(guó)中藥雜志,2001,26(11):760.