蛹蟲草與冬蟲夏草的含量測定研究

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(1.白求恩醫科大學制藥廠，吉林 長春 130021；2.長春中醫藥大學，吉林 長春 130117)

冬蟲夏草為麥角菌科真菌冬蟲夏草Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.寄生在鱗翅目蝙蝠蛾科昆蟲蝙蝠蛾幼蟲上的子座及幼蟲尸體的復合體[1]。蛹蟲草Cordyceps militaris(L.ex Fr.)Link生于半埋伏于林地土壤中的鱗翅目昆蟲的死蛹上[2]，又名北冬蟲夏草、北蟲草、蛹草。主要成分為多糖、蟲草素、蟲草酸等，富含人體必需的多種氨基酸和微量元素,世界各地分布廣泛,我國的吉林、河北、四川、湖南、湖北、山西等省均有生長。目前蛹草商品主要是人工培養品。蛹蟲草與冬蟲夏草相比，無論是在化學成分還是在藥效上兩者都有許多相似之處。在某些方面蛹蟲草已經成為冬蟲夏草的主要代用品。

1 材料與儀器

1.1 材料 冬蟲夏草(購于吉林宏檢大藥房)；蛹蟲草(人工培養品，產地為吉林)。

1.2 儀器及試藥 101-1A型數顯電熱鼓風干燥箱(上海瀘南科學儀器聯營廠);超聲波清洗器AS3120A(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；AB1235-S型電子天平；TU-1810紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)。無水葡萄糖：中國藥品生物制品檢驗所提供；鹽酸、氫氧化鈉、水合氯醛等均為分析純(北京化工廠生產)。

2 含量測定[3-5]

2.1 顯示劑與測定波長的選擇 3、5-二硝基水楊酸法，選擇顯色劑為3、5-二硝基水楊酸試液。葡萄糖顯色后在525 nm處紫外掃描譜吸收較大，吸收度較為穩定，故選擇525 nm為其測定波長。

2.2 對照品溶液的制備 取于105 ℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品約100 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液制備 總糖供試液的制備取本品粉末約0.5 g，精密稱定，置磨口錐形瓶中，精密加入水25 mL，加蓋，水浴30 min，取出，濾過，精密量取續濾液5 mL置25 mL量瓶中，加8 mL 6N鹽酸溶液，沸水浴30 min，取出，冷卻后用20% NaOH調pH至7，放冷，定容至刻度，搖勻即得。還原糖供試液的制備精密量取供試品溶液制備項下的續濾液5 mL，置10 mL量瓶中，加水定容至刻度，搖勻即得。

2.4 測定法 精密量取總糖和還原糖供試液各1 mL，分別置25 mL量瓶中,分別加入1 mL水和1.5 mL 3、5-二硝基水楊酸試液(DNS),照標準曲線方法，測定吸收度，據稀釋倍數分別計算總糖和還原糖的量，以總糖的量減去還原糖的量即為多糖的量。

2.5 方法學考察

2.5.1 線性關系的考察 標準曲線的制備精密量取對照品溶液0、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 mL分別置于25 mL量瓶中，加水至2.0 mL，分別精密加入3、5-二硝基水楊酸試液(DNS)1.5 mL，混勻，沸水浴5 min,取出，立即冷卻至室溫，加水定容至刻度，搖勻，以2.0 mL水顯色后的溶液做空白,照分光光度法，在525 nm的波長處測定吸收度，繪制標準曲線。結果見表1。

表1 線性關系考察結果

以吸收度為縱坐標，以取樣量為橫坐標(mg)，得回歸方程：Y=0.715 2X-0.035 9，r=0.999 2，線性范圍在0.300 06～0.900 18之間。

2.5.2 精密度實驗 取蛹蟲草總糖供試液，照測定法重復測定吸光度6次,結果見表2。

表2 精密度實驗測定結果

表2結果表明儀器具有良好的精密度。

2.5.4 回收率實驗 采用加標回收率實驗，取已知含量蛹蟲草樣品6分，每分0.5 g，精密稱定，據供試液制備方法得續濾液，精密量取續濾液2.5 mL于25 mL量瓶中，精密加入對照品溶液5 mL(1.000 2 mg/mL)，依法測定總糖供試液吸收度；精密量取續濾液2.5 mL置10 mL量瓶中，依法測定還原糖供試液吸收度，計算回收率，結果回收率RSD=1.4%，<2%，說明該方法測定蟲草多糖含量穩定可靠。

2.5.5 樣品依法測定 結果見表3。

表3 樣品多糖含量測定結果

3 小結

利用紫外分光光度法測定蟲草主要成分多糖含量，冬蟲夏草及蛹蟲草多糖含量分別為32.37%及6.32%，冬蟲夏草多糖含量較高。

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