胃樂新顆粒中多糖的含量測定

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(1.白求恩醫科大學制藥廠，吉林 長春 130021;2.吉林大學公共衛生學院，吉林 長春 130021)

胃樂新顆粒是采用長白山珍貴野生資源小刺猴頭菌經深層發酵、培養、提取其有效成分制成的沖劑。猴頭多糖是猴頭菌中的主要活性成分，有保護胃黏膜，抗腫瘤作用，其含量在一定程度上反映了胃樂新顆粒的質量，特建立了測定胃樂新顆粒中多糖含量的方法[1-3]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 紫外-可見分光光度計(UV-2450島津公司)，低速自動離心機(LDZ5-2北京醫用離心機廠)，電子分析天平(AB104-N梅特勒-托利多儀器上海有限公司)。

1.2 試藥 D-無水葡萄糖對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110833-200503);胃樂新顆粒(白求恩醫科大學制藥廠，批號：100326;100415；100538；100607);蒽酮溶液：取蒽酮0.2 g，加硫酸溶解并稀釋至100 mL。此試劑應臨用新制。其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取D-無水葡萄糖對照品10 mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，既得0.1 mg/mL對照品溶液。

2.2 標準曲線的制備 精密量取對照品溶液0.0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 mL,各加水至2.0 mL，分別加入預先用冷水冷卻的蒽酮溶液4 mL，混勻，置沸水浴中加熱6 min，迅速冷卻至室溫，約20 min時，照分光光度法，在625 nm的波長處分別測定吸收度，以測得吸收度與其對應的濃度，計算回歸方程。回歸方程為:Y=8.245 21X-0.006 38。結果表明：葡萄糖溶液1.7～15.0 μg/mL與吸光度呈良好的線性關系。

2.3 供試品溶液的制備 精密稱取供試品2.5 g，溶于10 mL水中，時時振搖浸漬30 min，濾過，作為儲備液。精密量取儲備液1 mL，置10 mL離心管中，分4次加入無水乙醇，每次1 mL并搖勻，靜置5 min，4 000 r/min離心10 min，傾去上清液；沉淀加水0.2 mL振搖溶解，再分2次加入無水乙醇，每次1 mL，同法重復操作，離心，傾去上清液，沉淀加95%乙醇5 mL，振搖使成混懸液，離心，傾去上清液；沉淀再加無水乙醇5 mL，同法洗滌1次。取沉淀，用水溶解并稀釋至50 mL為供試品溶液。

2.4 測定法 精密吸取供試品2.0 mL,照標準曲線制備項下自“加入預先用冷水冷卻的蒽酮溶液4 mL起”依法操作，由回歸方程計算多糖含量。

2.5 精密度試驗 精密量取對照品溶液0.5 mL，加水至2.0 mL，加入預先用冷水冷卻的蒽酮溶液4 mL，混勻，置沸水浴中加熱6 min，迅速冷卻至室溫,約20 min時測定吸收度。平行6分，以純化水2 mL加相應的試劑做空白，計算其RSD為1.89%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩定性試驗 取樣品(批號:100326)新制得的供試品溶液2.0 mL，加入預先用冰水冷卻的蒽酮溶液4 mL,混勻，置沸水浴中加熱6 min，迅速冷卻至室溫，以純化水2 mL加相應的試劑做空白，在0、2、4、8、16、24 h時測定吸光度。計算其RSD為1.56%,表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.7 重復性試驗 取同一批號的樣品(批號:100326)6分，每分各2.5 g，精密稱定，按“2.3”項下方法制備溶液，測定。計算RSD為2.05%，表明重復性良好。

2.8 回收率試驗 精密吸取1 mL已知含量的供試品溶液6分,每2分分別精密加入0.2、0.4、0.6 mL的葡萄糖對照品溶液(0.1 mg/mL),照“2.2”項下方法測定其吸收度，并計算含量，結果見表1。

表1 加樣回收率測定結果

2.9 樣品測定 取4批樣品，按上述供試品溶液的制備方法制備供試品溶液,測定吸收度，并計算其多糖含量，結果見表2。

表2 硫酸-蒽酮法測定胃樂新顆粒多糖的含量結果

3 小結

3.1 制備供試品溶液的過程中，分4次加入無水乙醇，每次1 mL，比1次加入4 mL無水乙醇對供試品的溶解性要好[4]。

3.2 蒽酮溶液加得快慢不同，相當于在不同的溫度顯色，因此加入的速度應一致[5]。

3.3 因硫酸黏度高易產生氣泡影響吸收度，建議加熱顯色后趁熱充分振搖，一旦冰浴冷卻后不要再搖。

[1]中華人民共和國衛生部藥典委員會.藥品標準中藥成方制劑[S].第11冊,WS3-B-2182-96.

[2]徐增香,師健友.天南星中多糖的測定[J].華西藥學雜志,2010,25(2):208-209.

[3]鐘方曉,任海華,李巖.多糖含量測定方法比較[J].時珍國醫國藥,2007(8):218-219.

[4]楊瑞瑞,李國華,樊寶娟.靈芝多糖的含量測定方法探討及改進[J].陜西中醫學院學報,2009,32(5):223-224.

[5]許樂文,周林彬.胃樂新片中多糖的含量測定[J].中南藥學,2006,4(4):294-296.