魚金注射液被動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn)及對(duì)血清IgE的影響

高天紅， 樸晉華， 王婷婷 (山西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室， 太原 03000;山西省藥品檢驗(yàn)所;通訊作者，E-mail:marypiao@6.com)

魚金注射液是魚腥草與金銀花提取物精制而成的純中藥注射劑，有清熱解毒功效，用于熱毒內(nèi)盛而致的上呼吸道感染、支氣管肺炎、病毒性肺炎、化膿性疾病、婦科炎癥與術(shù)后發(fā)熱［1］。但中藥注射劑成分復(fù)雜，且多與其他藥物聯(lián)合應(yīng)用，增加了不良反應(yīng)的發(fā)生率。近年有文獻(xiàn)報(bào)道靜脈滴注魚金注射液能引起變態(tài)反應(yīng)［2，3］，引發(fā)了人們對(duì)魚金注射液安全性再評(píng)價(jià)的關(guān)注。本試驗(yàn)重點(diǎn)考察了魚金注射液、魚金蒸餾液及吐溫80對(duì)大鼠被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng)與血清IgE的影響，以期確定過敏反應(yīng)的來源。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物與試劑 魚金蒸餾液(070511，萬榮三九藥業(yè)有限公司);魚金注射液(0604032，2 ml/支，萬榮三九藥業(yè)有限公司);吐溫80(061219，藥用，上海申宇醫(yī)藥化工有限公司)，臨用前以氯化鈉注射液稀釋至所需濃度;牛血清白蛋白(051201，上海伯奧生物科技有限公司);氯化鈉注射液(A07011402，山東華魯制藥有限公司);IgE測定試劑盒(美國Bethyl公司)。

1.1.2 儀器 酶標(biāo)儀(芬蘭 Thermo，DENLEY DRAGON Wellscan MK3);洗板機(jī)(芬蘭 Thermo，Wellwash 4 MK2)。

1.1.3 動(dòng)物 SD 大鼠，64只，體重200－280 g，北京市海淀興旺動(dòng)物養(yǎng)殖場提供，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(京)2006－0006，使用許可證號(hào):SYXK(晉)2003－0005。所有動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)試驗(yàn)室環(huán)境至少3 d，期間進(jìn)行檢疫。在適應(yīng)環(huán)境及實(shí)驗(yàn)期間，動(dòng)物分籠群養(yǎng)，給予大鼠顆粒飼料，自由飲水。動(dòng)物室維持12 h照明，室溫17－25℃，相對(duì)濕度30% －70%，檢疫期間，進(jìn)行外觀及一般臨床癥狀的觀察，包括:動(dòng)物的外形、體形、行動(dòng)、呼吸、被毛、鼻、口、眼、耳、生殖器、尿、糞便等。

1.2 方法［4，5］

1.2.1 抗血清制備 取雄性大鼠16只，260－280 g，隨機(jī)分為 8 組:魚金蒸餾液 2.65 ml/kg，1.32 ml/kg 組、魚金注射液 2.67 ml/kg，1.33 ml/kg 組、0.02 ml/kg，0.01 ml/kg吐溫80 組、陰性抗原組(0.9%氯化鈉注射液0.5 ml/只)、陽性抗原組(牛血清白蛋白0.5 mg/只)，每組2只。分別給大鼠腹腔注射相應(yīng)劑量的抗原，隔日一次，共4次，末次致敏后14 d，腹主動(dòng)脈采血，以3 000 r/min離心10 min，取上層血清即得8種抗血清。

1.2.2 被動(dòng)皮膚致敏 取大鼠48只，雌雄各半，體重200－220 g，隨機(jī)分為8組:魚金蒸餾液2.65 ml/kg，1.32 ml/kg 組，魚金注射液 2.67 ml/kg，1.33 ml/kg組，0.02 ml/kg，0.01 ml/kg 吐溫 80 組，陰性抗原組(0.9%氯化鈉注射液0.5 ml/只)，陽性抗原組(牛血清白蛋白0.5 mg/只)，每組6只。將各組大鼠背部脫毛，脊柱兩側(cè)距中線1.5 cm，各取兩點(diǎn)，每點(diǎn)間隔2 cm，面積約1 cm×1 cm，共4點(diǎn)。分別在背部皮膚內(nèi)注射相應(yīng)抗血清的4種不同稀釋度(1∶2，1∶4，1∶8，1∶16)0.1 ml，進(jìn)行被動(dòng)致敏。

1.2.3 激發(fā) 被動(dòng)致敏48 h后，各組尾靜脈注射與致敏劑量相同的激發(fā)抗原的1%依文思藍(lán)溶液1 ml/只，進(jìn)行激發(fā)。

1.2.4 結(jié)果評(píng)價(jià) 激發(fā)后20 min，各組動(dòng)物腹主動(dòng)脈采血，離心取血清測定血清IgE含量，采血后即刻處死動(dòng)物，剪取背部皮膚，測量皮膚內(nèi)層的斑點(diǎn)大小，直徑大于5 mm者判為陽性。

2 結(jié)果

由表1 可見，2.65 ml/kg，1.32 ml/kg 魚金蒸餾液組，1.33 ml/kg魚金注射液組，陰性對(duì)照組激發(fā)20 min后，皮膚內(nèi)層的藍(lán)色斑點(diǎn)直徑均不大于5 mm，未發(fā)生過敏反應(yīng)。2.67 ml/kg魚金注射液組、0.02 ml/kg，0.01 ml/kg吐溫 80 組激發(fā) 20 min 后，每組均有動(dòng)物皮膚內(nèi)層的藍(lán)色斑點(diǎn)直徑大于5 mm，發(fā)生過敏反應(yīng)。陽性組給予5 mg/ml牛血清白蛋白激發(fā)后，5只大鼠皮膚內(nèi)層的藍(lán)色斑點(diǎn)直徑大于5 mm，呈陽性反應(yīng)。魚金注射液2.67 ml/kg組、吐溫80 0.02 ml/kg，0.01 ml/kg 組和陽性組動(dòng)物血清IgE含量升高，與陰性對(duì)照相比有顯著性差異。

3 討論

魚金注射液由魚腥草(4 000 g)、金銀花(2 000 g)蒸餾水潤濕后，加蒸餾水6－8倍，經(jīng)水蒸氣蒸餾得初餾液，再進(jìn)行重蒸餾，收集餾液1 000 ml，加入8.5 g氯化鈉、8 ml吐溫80攪勻、濾過、灌封、滅菌后制得［1］。其中吐溫80是中國藥典收載的藥用輔料，正名為聚山梨酯80，用于藥品的增溶、乳化等［6］。在魚金注射液中用于形成穩(wěn)定溶膠來提高其澄明度并保留有效成分。避免因中藥成分復(fù)雜和某些有效成分溶解度小，經(jīng)加熱滅菌或放置一段時(shí)間后，藥液變色、渾濁和沉淀;同時(shí)避免因單純使用超濾方法凈化藥液可能丟失注射液有效成分。國外對(duì)吐溫80的安全性進(jìn)行了深入研究，已積累了大量資料［7］;國內(nèi)也有研究證實(shí)吐溫80可引起犬過敏，并有體溫下降，心率增快［8］。但對(duì)吐溫80引起的被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng)未見報(bào)道。

被動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn)是一種較為敏感的測試特異抗體滴度的方法。將受試物致敏動(dòng)物的血清予正常動(dòng)物皮內(nèi)注射，IgE Fc端與皮膚肥大細(xì)胞表面特異受體結(jié)合，形成IgE復(fù)合物，使肥大細(xì)胞致敏。當(dāng)抗原攻擊時(shí)，抗原與肥大細(xì)胞表面上IgE Fab端結(jié)合，導(dǎo)致IgE分子結(jié)構(gòu)改變，引起肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放組胺、慢反應(yīng)物質(zhì)等過敏介質(zhì)，致皮膚局部血管通透性增加，使抗原激發(fā)時(shí)同時(shí)注入的伊文思藍(lán)染料在該皮膚處滲出著色。根據(jù)局部皮膚藍(lán)染范圍或程度，可判定血管通透性變化的大小，繼而判定皮膚過敏反應(yīng)的程度［4］。IgE是引起Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的主要原因，檢測血清或體液中IgE水平對(duì)明確是否存在Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)和認(rèn)識(shí)藥物誘發(fā)變態(tài)反應(yīng)機(jī)制具有重要意義。

表1 魚金注射液對(duì)SD大鼠被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng)及血清IgE的影響Tab 1 Results of the passive cutaneous anaphylaxis test for Yujin injection and the influence on serum IgE in SD rats

試驗(yàn)結(jié)果顯示，魚金注射液2.67 ml/kg、吐溫80 0.02 ml/kg，0.01 ml/kg 劑量組血清 IgE 含量升高(P＜0.05)，致敏反應(yīng)陽性率分別為33%，50%，33%，表明上述劑量組分別引起了SD大鼠的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，提示魚金注射液誘發(fā)的過敏陽性反應(yīng)和血清IgE含量升高可能與吐溫80有關(guān)。值得注意的是魚金注射液1.33 ml/kg劑量組所含吐溫80劑量與吐溫80 0.01 ml/kg劑量組一致，未引起過敏陽性反應(yīng)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，有企業(yè)發(fā)現(xiàn)同一種中藥注射劑使用不同產(chǎn)地的吐溫80，其成品溶血性試驗(yàn)差異很大，在生產(chǎn)中須慎重選擇［9］。是否不同來源的吐溫80對(duì)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的影響同樣存在差異，這有待于進(jìn)一步探討。

［1］ 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十七冊［S］.1998:169－170.

［2］ 劉春梅，元彩.靜脈滴注魚金注射液致過敏反應(yīng)一例［J］.醫(yī)療裝備，2006，19(10):19.

［3］ 劉云芳，陳華.魚金注射液致變態(tài)反應(yīng)2例［J］.藥物流行病學(xué)雜志，2004，13(2):108.

［4］ 國家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物免疫毒性(過敏性、光過敏反應(yīng))研究的技術(shù)指導(dǎo)原則［S］.2005:5－7，18－19.

［5］ 徐淑云，卞如濂，陳修，等.藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法［M］.3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:1408.

［6］ 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版二部［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:1246－1247.

［7］ 王慶利，彭健.吐溫80的安全性研究進(jìn)展［J］.毒理學(xué)雜志，2006，20(4):262 －264.

［8］ 何永亮，易勇，王紅星，等.含吐溫80中藥注射液對(duì)犬致過敏的研究［J］.中藥藥理與臨床，2005，21(1):55 －56.

［9］ 費(fèi)建，軍周麗，崔友，等.兩種吐溫－80的溶血性試驗(yàn)觀察［J］.黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2001，24(4):40.