硒形態分析研究進展

摘要：綜述了近年來關于微量元素硒形態分析領域取得的最新研究成果，尤其是聯用技術在硒形態分析中的應用，主要包括不同的樣品前處理方法以及形態分析所取得的結果。

關鍵詞：硒；形態分析；聯用技術

中圖分類號：Ｓ１３２文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）03－0437-05

Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ Ｓｅｌｅｎｉｕｍ Ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ

ＬＩ Ｎａ1，ＷＡＮＧ Ｘｕ2，ＳUN Fａｎｇ－ｆａｎｇ2，ＨE Wｕ2，ＬI Lｉ2，ＹANG Hｕｉ2，ＷAN Kａｉ2，ＷＡＮＧ Ｆｕ－ｈｕａ2

（1.Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Wuhan 430070，China；

2.Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ａｎｄ Ｆｒｕｉｔｓ Ｑｕａｌｉｔｙ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６４０，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｉｓ ａｒｔｉｃｌｅ ｇａｖｅ ａ ｒｅｖｉｅｗ ａｂｏｕｔ ｔｈｅ ｌａｔｅｓｔ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｎ ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏｅｌｅｍｅｎｔ—Ｓｅｌｅｎｉｕｍ（Ｓｅ）， ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｐｈｅｎａｔｅｄ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，ｍａｉｎｌｙ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Sｅｌｅｎｉｕｍ； ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ； ｈｙｐｈｅｎａｔｅｄ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ

硒是人體必需的微量元素。人體內含有多種以硒化合物為活性中心的酶，如紅細胞谷胱甘肽過氧化物酶（ＲＢＣ ＧＳＨ－ＰＸ）、磷脂氫過氧化物谷胱甘肽過氧化物酶（ＰＨＧ－ＰＸ）、血漿谷胱甘肽過氧化物酶（ＰＧＳＨ－ＰＸ）。這些酶具有抗氧化作用、提高紅細胞的攜氧能力、提高人體免疫機能等重要的生物功效。人體缺硒會導致克山病、大骨節病等地方病，血硒水平偏低會引起癌癥死亡率升高，因此硒享有“生命的火種”“具有保健作用的神奇礦物”的美譽。

但硒同時也是一個典型的雙功能元素。適量的硒有利于人體健康，但攝入硒過量會導致人體多種中毒癥狀。１９６０年，在湖北恩施發現一種臨床表現為“毛發脫落，指（趾）甲損害，皮膚損害，神經系統損害”的癥狀，現在已經確認該病為地方性硒中毒，是當地自然環境和農作物含硒量過高所引起的。美國生物學家Ｊｏｓｅｐｈ認為，“硒在所有具有毒性的化學制品中具有最狹窄的安全和危險界限”。

硒所具有的重要生物功能使其成為功能性食品的青睞元素，但由于硒的攝入量存在限值，比如英國規定人體每日的硒攝入量不能超過７０ μｇ，而中國營養學會推薦的日攝入量為１００～２４０ μｇ，所以對食品和營養強化劑中硒含量的檢測是食品安全領域的熱點。但是研究表明，硒的營養性和毒性、在環境中的遷移轉化規律，不僅取決于硒的總量，同時更取決于它的形態。但是形態分析比傳統的總量分析復雜很多，因為大多數食品中硒含量比較低，而且在前處理的過程中硒容易揮發和轉化。為了克服這些難題，近些年來，科技工作者從新技術手段的引用（主要表現為分析儀器的聯用技術）、前處理的改進等方面對食品中硒的形態分析做了大量工作，以實現對不同基質的食品進行準確、高效的定量和定性分析。

１不同基質樣品的前處理

對于生物體樣品，前處理方法相對比較簡單。血漿、乳清和尿液等樣品經過過濾和稀釋可直接進入色譜柱。含硒的氨基酸多為水溶性，用熱水可浸取出與大分子結合的硒化合物。樣品用水攪勻，經超聲振蕩加熱處理和超聲離心，硒浸取率約為９０％。含硒氨基酸還可用超濾或透析分離。在實驗中發現，某些含硒氨基酸容易氧化降解，用羥甲基衍生物可以對其加以穩定，以防降解。在分析鼠尿樣品中的硒含量時，Ｙａｓｕｍｉｔｓｕ等［１］指出必須對樣品進行純化，去除ＮａＣｌ和脲以滿足ＥＳＩ–ＭＳ的測定要求。

在對植物性樣品進行分析時，根據不同的分離、檢測目的，所采用的前處理方法也有差異。Ｅｍｅｓｅ等［２］用酶水解胡蘿卜樣品以提取蛋白硒和非蛋白硒，離心分離測定硒的各種形態。實驗表明，胡蘿卜的葉子和根中硒的提取率分別是（７５±２）％和（７８±３）％（ｎ＝３），檢測限是４５ ｎｇ／ｇ（８０Ｓｅ）。Ｓａｓｉ等［３］在測定巴西干果中的硒形態時，采用了先去除脂肪，然后利用蛋白酶進行水解的方法，提取效率達到了８９％，檢測到多種含硒氨基酸。

Ｍａｒｉａ等［４］用含Ｎａ２ＳｅＯ３的營養液培養大蒜和芥菜，用微波消解（１．５ ｍＬ ＨＮＯ３，１．５ ｍＬ Ｈ２Ｏ２）的方法作為測總硒的預備試驗；在做硒的形態分析時，前處理中該試驗比較了３種提取液（０．１ ｍｏｌ／Ｌ鹽酸，２５ ｍｍｏｌ／Ｌ醋酸銨緩沖液，蛋白酶水溶液）對硒的浸提效果，發現當用０．１ ｍｏｌ／Ｌ的鹽酸作浸提劑時，硒的形態分析進行得比較好。同時發現用鹽酸或者醋酸銨作提取劑時，超聲波探測器能快速提取含硒物質，由此帶來的形態降解可以忽略不計。

Ｇｅｒｇｅｌｙ等［５］分析雙孢蘑菇（Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓ）、香菇中的硒形態時，比較了３種蛋白質提取方案（０．１ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ，３０ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩沖液，酶消解）的效果，發現２４ｈ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩沖液提取，加入丙酮的方法提取水溶態的含硒蛋白質效果最好；在利用酶體系進行消解時，胰蛋白酶在５０℃的條件下處理２４ ｈ可以達到比較高的降解和提取效率。

同樣是分析富硒雙孢蘑菇（Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓ）中的硒形態，Ｓｔｅｆａ′ｎｋａ等人［６］采用三步提取法（水提取，胃蛋白酶提取，胰蛋白酶提取）對樣品中的硒進行浸提，提取效率達到７５％；用高效液相色譜和水力高壓霧化器連用對浸提液進行分析，成功檢測出ＳｅＣｙｓ２和Ｓｅ（Ⅳ），檢出限達到０．２５ mg／Ｌ。

在對細香蔥進行分析時，不同的提取劑得到的含硒物質并不相同。Ｅｍｅｓｅ等［７］用三種不同的硒營養液（Ｓｅ（Ⅳ），Ｓｅ（Ⅵ），硒蛋氨酸）培養細香蔥，分別用高氯酸—乙醇和酶提取細香蔥中的含硒物質，分析結果表明高氯酸—乙醇提取液中主要含Ｌ－硒甲基硒半胱氨酸，而酶提取液中檢測到Ｌ－硒蛋氨酸。

Ｇóｍｅｚ－Ａｒｉｚａ等［８］對酵母進行硒的形態分析時比較了４種不同的提取方法的效果，包括加壓液相提取法（ＰＬＥ）、機械攪拌法、聲波降解法和索氏抽提器法。試驗發現ＰＬＥ法能夠更高效率地提取硒半胱氨酸、硒蛋氨酸和Ｓｅ（Ⅳ）。同時對酵母的提取條件進行優化，認為１１ ｍＬ的ＰＬＥ槽、硅藻土作分散劑、１∶１ （V∶V） Ｈ２Ｏ∶ＭｅＯＨ是比較優化的提取條件。在測定自然水樣中的硒物質含量時， Ｂｕｅｎｏ等［９］ 用Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲＡ－７４３ 樹脂濃縮水樣，成功檢測出Ｓｅ（Ⅳ）、Ｓｅ（Ⅵ）、 硒胱氨酸。試驗證明該方法的準確性適于檢測環境水平的硒濃度（１０ ｎｇ／Ｌ）。

張玲金等［１０］建立微波密閉Ｈ２Ｏ２－ＨＮＯ３消解、分離、測定植物樣品中不同形態硒，以差減法獲得了5種不同形態硒化合物的含量，包括可溶態硒、不溶態硒、四價硒、六價硒、有機硒，該方法的回收率達到９５％～１０５％。

２分離與檢測

在近些年的研究中，硒的分離和檢測主要是利用各種聯用技術實現的。氣相色譜、液相色譜的迅速發展，原子熒光、原子吸收、等離子體質譜的技術更新，以及各種連接技術的陸續發現，為硒的形態分析提供了技術支持。根據各種含硒化合物的不同性質，采用不同的聯用技術進行分析。

２．１氣相色譜分離與檢測

氣相色譜可以用來分離揮發性的二甲基硒、二甲基二硒；如果分離硒氨基酸需要用衍生法增加其揮發性。Ｂｅｒｉｌ等［１１］用ＧＣ－ＭＳ進行硒酵母中硒的形態分析時，用氯甲酸乙酯衍生法分離、測定富硒酵母中的硒蛋氨酸、硒半胱氨酸，試驗證明該法能夠迅速、有效地分離、測定兩種氨基酸。目前已用于食品強化劑中硒化合物的測定。

２．２毛細管電泳分離和檢測

毛細管電泳與紫外和可見光檢測已用于金屬硫蛋白的分離。Ｓａｓｉ［３］等用毛細管電泳的方法分離巴西干果提取液中的各種含硒物質，ＩＣＰ－ＭＳ檢測，在７ ｍｉｎ內分離出亞硒酸、硒酸、硒胱氨酸和硒蛋氨酸。計算各種硒的相對含量，認為硒代蛋氨酸是巴西干果中硒的主要形式。

２．３高效液相色譜分離與檢測

２．３．１體積排阻色譜（ＳＥＣ）ＳＥＣ是按溶質分子的大小來分離混合物的，是一種比較溫和的分離技術，通常不會引起元素形態的丟失，適用于不穩定或與金屬絡合較弱的生物大分子。Ｋａｔａｒｚｙｎａ等［１２］用含硒標準溶液培養洋蔥一周，將其分為葉和鱗莖，用０．１ ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ提取液，用ＳＥＣ－ＭＳ分析，結果證實硒與高分子部分的結合在葉子中比在鱗莖中多；去除低分子化合物和無機硒后，用離子對高效液相色譜進行硒的形態分析，證實其葉的提取物中主要的有機硒是硒甲基硒半胱氨酸；用酶水解富硒洋蔥，發現鱗莖中的主要有機硒是γ－谷胺酰基硒甲基硒半胱氨酸。

Ｍｏｒｅｎｏ等［１３］用ＳＥＣ與ＩＣＰ－ＭＳ和ＵＶ檢測器聯用對冷凍干燥的生物樣品（魚類、甲殼類、蔬菜類、酵母）進行分析；對生物樣品的水溶部分和殘渣態進行酶消解，用陽離子交換色譜連接ＩＣＰ－ＭＳ進行分析，用Ｈａｍｉｌｔｏｎ ＰＲＰ－Ｘ２００柱和不同ｐＨ條件下的４ ｍｍｏｌ／Ｌ吡啶（１ ｍＬ／ｍｉｎ）作流動相。結果只在蔬菜樣品中檢測到硒胱氨酸（０．１～０．７ mg/kg）；在牡蠣、蛤貝、鮭魚、白三葉草中檢測到三甲基硒（０．１～０．３ mg/kg）；在硒化酵母、磷蝦、白三葉草中檢測到亞硒酸（０．２～３.0 mg/kg）；硒酸鹽只存在于酵母中，含量為８ mg/kg。

２．３．２離子交換色譜（ＩＥＣ）與ＳＥＣ相比，ＩＥＣ的優點是分離效率高，應用范圍廣。其分離過程是基于帶電溶質離子與固定相的反電荷表面的交換平衡。Ｅｍｅｓｅ等［７］在種植胡蘿卜時施葉面肥１００ mg／Ｌ

Ｓｅ（Ⅳ），陰離子交換和陽離子交換ＨＰＬＣ法與ＩＣＰ-ＭＳ聯用檢測根部提取液，檢測到硒蛋氨酸、γ－Ｇｌｕ－ＭｅＳｅＣｙｓ、Ｓｅ（Ⅳ）；實驗表明γ－Ｇｌｕ－ＭｅＳｅＣｙｓ、硒蛋氨酸是胡蘿卜根中硒的主要有機形態，檢測限是４５ ｎｇ／ｇ（８０Ｓｅ）。Ｆａｎｇｓｈｉ等［１４］用ＨＰＬＣ柱子（２５ ｃｍ×４ ｍｍ×５ μｍ），陰離子交換ＥＳＡ Ａｎｉｏｎ Ⅲ進行硒的形態分析，檢測到Ｓｅ（Ⅳ）、Ｓｅ（Ⅵ）、三甲基硒離子、硒蛋氨酸。使用ｐＨ５．５的０．００５５ ｍｏｌ／Ｌ醋酸銨作流動相，流速為１．５ ｍＬ／ｍｉｎ，在ｍ／ｚ為７８時用ＩＣＰ－ＭＳ測量硒，用超聲波霧化提高霧化的效率。此方法中各種硒的檢測限（μｇ／Ｌ）：三甲基硒離子，０．０８；Ｓｅ（Ⅳ），０．３４；硒蛋氨酸，０．１８；Ｓｅ（Ⅵ），０．０７。Ｚｈｅｎｇ等［１５］用混合離子對試劑分離了８種含硒化合物：Ｓｅ（Ⅳ）、Ｓｅ（Ⅵ）、硒胱氨酸，硒脲、硒蛋氨酸、硒乙基硫氨酸、硒胱胺、三甲基硒離子，所使用的流動相是２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ丁烷磺酸鈉和８ ｍｍｏｌ／Ｌ羥化四甲胺，使用ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ ＲＰ１８反相柱，耗時１８ ｍｉｎ。

Ｚｈａｎｇ等［１６］用陰離子交換樹脂Ｄｏｗｅｘ １－１０Ｘ

對長藥芥屬（Ｓｔａｎｌｅｙａ ｐｉｎｎａｔａ）的提取液進行分析，ＨＧ－ＡＡＳ檢測。結果表明硒化合物可以被樹脂柱定量分離；５種硒化合物（三甲基硒離子、二甲基硒氧化物、硒蛋氨酸、Ｓｅ（Ⅳ）、Ｓｅ（Ⅵ））的回收率范圍是９２．９％～１０３．０％；植物中可溶態硒化合物：硒氨基酸占７３．０％～８５．５％，Ｓｅ（Ⅵ）占７．５％～１９．５％，非氨基酸有機硒＜７％。實驗表明，植物生長過程中積累的大量Ｓｅ（Ⅵ）被代謝為含硒氨基酸。本方法的檢出限為１ mg/kg。Ｌｉｎ［１７］用Ｄｏｗｅｘ １Ｘ２樹脂和ＡＡＳ檢測系統對地下水中的Ｓｅ（Ⅳ）和Ｓｅ（Ⅵ）進行了分析，分別用０．１和１.0 ｍｏｌ／Ｌ的硝酸作淋洗液，測得溶解態硒的平均濃度是（３２．１±１７．６）ｎｇ／Ｌ，Ｓｅ（Ⅵ）占總可溶態硒的４７．６％～６１．２％，平均為５３．８％，檢測限為５．６ ｎｇ／Ｌ。

Ｇｏｓｅｔｔｉ等［１８］用離子交換色譜和離子阱質譜對食品增補劑中的含硒物質進行形態分析；用甲醇、水混合物作流動相對含硒有機物進行梯度淋洗；用含甲醇、四丁基氨的水溶液對含硒無機物進行梯度淋洗；色譜分析中使用Ｌｕｎａ Ｃ１８固定相。該實驗得到的硒形態有：硒－Ｌ－蛋氨酸、Ｌ－硒胱氨酸、苯基－Ｌ－硒半胱氨酸、甲基－硒－Ｌ－半胱氨酸、甲烷硒酸、硒氰酸鹽、硒酸、亞硒酸。Ｎｉｅｄｚｉｅｌｓｋｉ［１９］用ＨＰＬＣ–ＨＧ–ＡＡＳ法對地下水進行形態分析，實驗中用到了Ｓｕｐｅｌｃｏ ＬＣ－ＳＡＸ１陰離子交換柱（２５０ mm×４．６ mm×５ μｍ）同時檢測到Ａｓ（Ⅲ），Ａｓ（Ⅴ），Ｓｅ（Ⅳ）和Ｓｅ（Ⅵ），其中Ｓｅ（Ⅳ）和Ｓｅ（Ⅵ）的檢測限分別為２．４ μｇ／Ｌ和１８．６ μｇ／Ｌ。

王振華等［２０］用ＰＲＰ－Ｘ１００陰離子交換柱和保護柱同時進行了砷和硒的形態分析，流動相為ｐＨ值５．６的１０ ｍｍｏｌ／Ｌ ＮＨ４Ｈ２ＰＯ４溶液（添加２．５％的甲醇），在１２ ｍｉｎ內同時分離了Ａｓ（Ⅲ）、ＭＭＡ、ＤＭＡ、Ａｓ（Ⅴ）、ＳｅＣｙｓ２、ＳｅＭｅｔ和Ｓｅ（Ⅳ）等化合物，實驗中的相對標準偏差為１．９％～６．１％。

韋昌金等［２１］建立了離子交換色譜－氫化物發生雙道原子熒光聯用同時測定４種Ａｓ形態和３種Ｓｅ形態的方法，采用ＰＲＰ－Ｘ１００陰離子交換分析柱可以在１０ ｍｉｎ內同時分離、檢測Ａｓ和Ｓｅ形態，各種硒化合物的檢測限為：ＳｅＣｙｓ2 ０．６ μｇ／Ｌ、Ｓｅ（Ⅳ）０．５ μｇ／Ｌ、ＳｅＭｅｔ ３ μｇ／Ｌ。各形態的精密度ＲＳＤ（ｎ＝７）均小于５％，用此方法測定了富硒營養品中的Ａｓ和Ｓｅ形態，加標回收率在９１％～１１５％之間。

２．３．３反相高效液相色譜（ＲＰ－ＨＰＬＣ）ＲＰ－ＨＰＬＣ利用極性比流動相弱的固定相來分離分析物。保留機制是基于分析物的憎水性。該方法的應用范圍廣，對不同形態的分辨率高。用多種流動相可以提供分離的多樣性，另一優點是重復性好。Ｉｐｏｌｙｉ等［２２］用反相液相色譜直接氫化物發生原子熒光光度法進行硒的形態分析；用ｐＨ為４的０．０１ ｍｏｌ／Ｌ的醋酸銨溶液作淋洗液，其中含有０．５％的甲醇、０．１ ｍｏｌ／Ｌ的ＤＤＡＢ；各種硒化物的檢測限（μｇ／Ｌ）為：硒蛋氨酸，７０；硒乙基硫氨酸，９６；Ｓｅ（Ⅳ），１６。

彭嵐等［２３］用 Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ－３反相色譜柱（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ×５ μｍ）對底泥中的硒進行了形態分析，試驗中優化的流動相條件：濃度為 ５ ｍｍｏｌ／Ｌ的四丁基硫酸氫銨（ｐＨ６．０）、２．５ ｍｍｏｌ/Ｌ磷酸二氫銨、體積分數５％甲醇、流速１．５ ｍＬ／ｍｉｎ；實驗中檢測到Ｓｅ（Ⅳ）、Ｓｅ（Ⅵ）、ＳｅＭｅｔ和ＳｅＣｙs2等４種不同的硒形態，檢測限為０．５～１．９ μｇ／Ｌ。

張濤等［２４］用ＲＰＬＣ－ＩＣＰ－ＭＳ法對富硒大米的酶解液中的硒代氨基酸含量進行分析，色譜柱為Ｗａｔｅｒｓ ＲＰ１８反相柱（（１５０ ｍｍ×３９ ｍｍ×５ μｍ），并聯有ＲＰ１８保護柱（２０ ｍｍ×３９ ｍｍ×５ μｍ），流動相為０．１％七氟丁酸，含甲醇０．３％，流速為０．８ ｍＬ／ｍｉｎ，實驗結果發現，大米中的硒主要以硒代半胱氨酸的形式存在。

２．３．４離子對色譜（ＩＰ－ＨＰＬＣ）ＲＰ－ＨＰＬＣ僅能分離非極性不帶電的分析物，在分離帶電的極性分析物時需要用離子對試劑。固定相是標準硅烷化的硅膠填料如Ｃ８、Ｃ１８，流動相是由磷酸鹽或醋酸鹽、有機改進劑甲醇或乙腈和離子對試劑組成的水溶液緩沖體系。離子對試劑與分析物生成離子對保留在反相柱上。離子對試劑參與流動相中分析物與非極性固定相之間的平衡。

Ｚｈｅｎｇ等［２５］用兩相離子對反相色譜對硒營養強化劑進行分離，ＩＣＰ－ＭＳ檢測，得到９種含硒物質：亞硒酸、硒酸、硒脲、三甲基硒離子、硒胱胺、硒胱氨酸、硒半胱氨酸、硒蛋氨酸、硒乙基硫氨酸，檢測限為１ μｇ／Ｌ，達到了很好的分離效果。Ｗａｎｇ等［２６］用ＩＣ－ＩＣＰ－ＤＲＣ－ＭＳ對環境和生物樣品進行分析。ｐＨ為９時（ＮＨ４）２ＣＯ３和ＣＨ３ＯＨ進行梯度淋洗，在１２ ｍｉｎ內色譜分離所有的物質，離子色譜柱上的洗脫液輸送至ＩＣＰ－ＤＲＣ－ＭＳ的霧化系統中，檢測砷和硒的化合物。用峰高作定量研究，硒的檢測限是０．０１～０．０２ μｇ／Ｌ。

２．３．５多維色譜聯用技術為了更好地分離各種硒化合物以利于后續檢測，多維色譜聯用技術方興未艾。Ｍａｒｉａ等［４］用鹽酸浸提富硒植物大蒜和芥菜，用離子對反相色譜和體積排阻色譜／離子交換液相色譜與ＩＣＰ－ＭＳ方法聯用對浸提液進行形態分析，發現硒的主要形態是硒甲基硒半胱氨酸和硒蛋氨酸。

Ｇｅｒｇｅｌｙ等［５］用ＲＰ－ＩＰ－ＨＰＬＣ－ＩＣＰ－ＭＳ測定雙孢蘑菇和香菇的蛋白質酶提取液中的硒物質，鑒別出3種含硒氨基酸：硒胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、硒蛋氨酸，檢測限為１２ μｇ／Ｌ。Ｓｍｒｋｏｌ等［２７］用ＨＰＬＣ－ＵＶ－ＨＧ－ＡＦＳ對噴灑了硒酸鈉溶液的苦蕎麥進行硒的形態分析，其中液相色譜部分用了Ｈａｍｉｌｔｏｎ ＰＲＰ Ｘ－１００陰離子交換柱和Ｈａｍｉｌｔｏｎ ＰＲＰ Ｘ－２００陽離子交換柱，分別用４０ ｍｍｏｌ／Ｌ的ＮＨ４Ｈ２ＰＯ４溶液 （ｐＨ ６）和１０ ｍｍｏｌ／Ｌ的吡啶溶液（ｐＨ １．５）作流動相，采用酶水解的方法，發現蕎麥種子提取物中（９３±５）％的硒為硒蛋氨酸。

Ｚｏｙｎｅ等［２８］用１ ｍｇ／Ｌ的Ｎａ２ＳｅＯ３溶液培養富硒花椰菜，陰離子交換柱（ＰＲＰ－Ｘ１００）和體積排阻／離子交換色譜柱對花椰菜的酶提取液進行分析，發現硒蛋氨酸是根中主要氨基酸，而硒甲基硒半胱氨酸是花椰菜果實的主要氨基酸。Ｔｙｒｅ等［２９］以硒蛋氨酸為硒源培養印度芥菜，用液相色譜法（反相離子對色譜，用七氟丁酸作反離子；陽離子交換色譜，用ｐＨ為３的吡啶甲酸鹽淋洗）分離植物提取液中的物質，ＩＣＰ－ＭＳ法檢測，用電噴霧四極時間飛行質譜對合成的標準物質和根部提取物中的硒甲基硒蛋氨酸進行定性。分析結果認為硒甲基硒蛋氨酸為其重要的硒化合物，也可能含有少量的二甲基硒丙酸鹽。

２．４其他聯用技術

原子熒光分光光度法和原子吸收分光光度法比較成熟、簡單易行、使用普遍，所以在很多聯用技術中多有使用。Ａｍｉｔ等［３０］用直接氫化物發生原子吸收方法檢測人尿中的硒蛋氨酸，檢測限是１．０８ μｇ／Ｌ，校準曲線在０～３０ μｇ／Ｌ范圍內呈線性相關。

３展望

從目前的研究情況可以看出，色譜分離法與光譜類分析法如ＩＣＰ－ＭＳ、ＡＥＳ、ＡＡＳ及ＡＦＳ等的聯用是今后硒形態分析的主要方法。從檢測結果來看，為了了解有機硒的形態，需要分析科學和其他學科的交叉滲透、各種分離方法和檢測技術的有機結合。從目前的研究情況可以看出，以色譜分離法為主體的分離技術，以其高效的分離能力將在硒形態分析方面成為主流；光譜類的檢測技術，如ＡＦＳ、ＡＡＳ、ＡＥＳ以其檢測限比較低、成本比較小等優點，將在硒的檢測領域得到更加廣泛的應用。在檢測結果方面，無機硒的形態分析方法較為成熟，已經能夠有效地分離各種無機硒；但是有機硒化合物的檢測結果相差比較大，這是因為有機硒具有多種形態，有些已經確認種類，但是也有一部分由于缺乏標準物質而無法確認。要進一步準確地定性、定量測定多種硒化合物，有賴于多種分析技術的聯合使用。這方面的工作還大有可為。可以預期，硒的形態分析將隨著科學技術的發展取得更大的進展，從而為功能性食品的檢測和人類的健康做出更大的貢獻。

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［６］ ＳＴＥＦＡ′ＮＫＡ Ｚ， ＩＰＯＬＹＩ Ｉ， ＤＥＲＮＯＶＩＣＳ Ｍ，ｅｔ ａｌ． Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｓａｍｐｌｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｆｏｒ Ｓｅ－ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｄｉｂｌｅ ｍｕｓｈｒｏｏｍ ｓａｍｐｌｅｓ［Ｊ］． Ｔａｌａｎｔａ，２００１，５５：４３７-４４７．

［７］ ＥＭＥＳＥ Ｋ， ＭＯＮＩＫＡ Ｓ， ＪＯＳＥＰＨ Ａ． Ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｓｅ－ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｃｈｉｖｅｓ （Ａｌｌｉｕｍ ｓｃｈｏｅｎｏｐｒａｓｕｍ） ｂｙ ＨＰＬＣ－ＩＣＰ-ＭＳ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２００７，９３：１３９８-１４０６．

［８］ Ｇ?魷ＭＥＺ－ＡＲＩＺＡ Ｊ Ｌ， ＣＡＲＯ Ｍ Ａ，ｄｅ ｌａ ＴＯＲＲＥ，ｅｔ ａｌ． ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｉｎ ｙｅａｓｔｓ ｕｓｉｎｇ ｐｒｅｓｓｕｒｉｚｅｄ ｌｉｑｕｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｍｉｃｒｏｗａｖｅ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｈｙｄｒｉｄｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｔｏｍｉｃ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］． Ａｎａｌｙｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ， ２００４，４５：３０５–３１４．

［９］ BUENO Ｍ，ＭARTINE Ｐ Ｇ． Ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｐｒｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ ｉｎｏｒｇａｎｉｃ ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｉｎ ｎａｔｕｒａｌ ｗａｔｅｒｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ，２００２， ３９：１８５–１９３．

［１０］ 張玲金，陳德勛，劉曉端． 植物中硒的分離和微波消解－原子熒光測定法［Ｊ］． 環境與健康雜志，２００４，２１（３）：３５－４０．

［１１］ ＢＥＲＩＬ?魱ＳＣＩ?魸ＧＬＵ，ＥＭ?譈Ｒ Ｈ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｌｅｎｏａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｂｙ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ-ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ， ２００４，９８：１０１–１０６．

［１２］ ＫＡＴＡＲＺＹＮＡ Ｗ， ＫＡＺＩＭＩＥＲＺ Ｗ， ＳＡＳＩ Ｓ， ｅｔ ａｌ． ＨＰＬＣ–ＩＣＰ－ＭＳ ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｉｎ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｏｎｉｏｎ ｌｅａｖｅｓ-ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｄｉｅｔａｒｙ ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ Ｓｅ－ｍｅｔｈｙｌｓｅｌｅｎｏｃｙｓｔｅｉｎｅ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ，２００４，３２６：６１７–６２３．

［１３］ ＭＯＲＥＮＯ Ｐ．Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｉｓｓｕｅｓ ｂｙ ｓｉｚｅ ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｃｈｒｏｍａｔａｇｒａｐｈｙ ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｐｌａｓｍａ–ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２００４，３５２：３１５–３２７．

［１４］ ＬＩ Ｆ Ｓ， ＷＡＬＴＥＲ Ｇ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ ｓｅｌｅｎｏｎｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ ，ＳｅＭｅｔ， ｓｅｌｅｎｉｏｕｓ ａｃｉｄ， ａｎｄ ｓｅｌｅｎｉｃ ａｃｉｄ ｕｓｉｎｇ ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ｏｎ－ｌｉｎｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｐｌａｓｍａ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｏｒ ｆｌａｍｅ ａｔｏｍｉｃ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ， １９９９，４７３：３３７–３４４．

［１５］ ＺＨＥＮＧ Ｊ， ＭＡＳＡＫＩ Ｏ．Ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ｏｆｓｅｌｅｎｉｕｍ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｗｉｔｈ ｉｏｎ－ｐａｉｒ ｒｅｖｅｒｓｅｄ－ｐｈａｓｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｕｓｉｎｇ ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｐｌａｓｍａ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ａｓ ｅｌｅｍｅｎｔ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ， ２０００，８７４：５５–６４．

［１６］ ＺＨＡＮＧ Ｙ Ｑ．Ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｂｙ ｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｈｙｄｒｉｄｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｔｏｍｉｃ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］． Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｏｔａｌ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，２００１，１６４：３９－４７．

［１７］ ＬＩＮ Ｔ Ｓ． Ｉｎｏｒｇａｎｉｃ ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｇｒｏｕｎｄｗａｔｅｒｓ ｂｙ ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｎ Ｄｏｗｅｘ １Ｘ２［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈａｚａｒｄｏｕｓ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，２００７，９４：８０–８５．

［１８］ ＧＯＳＥＴＴＩ Ｆ， ＦＲＡＳＣＡＲＯＬＯ Ｐ．Ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｉｎ ｄｉｅｔ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ ｂｙ ＨＰＬＣ-ＭＳ／ＭＳ ｍｅｔｈｏｄｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ，２００７，４６２：１７３８–１７４７．

［１９］ ＮＩＥＤＺＩＥＬＳＫＩ Ｐ．Ｔｈｅ ｎｅｗ ｃｏｎｃｅｐｔ ｏｆ ｈｙｐｈｅｎａｔｅｄ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｓｙｓｔｅｍ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｏｒｇａｎｉｃ ａｒｓｅｎｉｃ（Ⅲ），ａｒｓｅｎｉｃ（Ⅴ）， ｓｅｌｅｎｉｕｍ（Ⅳ） ａｎｄ ｓｅｌｅｎｉｕｍ（Ⅵ） ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ-ｈｙｄｒｉｄｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ-（ｆａｓｔ ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ） ａｔｏｍｉｃ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｄｕｒｉｎｇ ｓｉｎｇｌｅ ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ， ２００５， １４８：１９９–２０６．

［２０］ 王振華，何濱，史建波，等． 液相色譜－雙通道原子熒光檢測聯用法同時測定砷和硒的形態［Ｊ］．色譜，２００９，２７（５）：７１１－７１６．

［２１］ 韋昌金，劉霽欣，裴曉華． 離子交換色譜－氫化物發生雙道原子熒光法同時測定砷和硒形態［Ｊ］． 分析化學研究報告，２００８，

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［２２］ ＩＰＯＬＹＩ Ｉ， ＳＴＥＦ?魣ＮＫＡ Ｚ．Ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｅ（Ⅳ） ａｎｄ ｔｈｅ ｓｅｌｅｎｏａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｂｙ ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ–ｄｉｒｅｃｔ ｈｙｄｒｉｄｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ-ａｔｏｍｉｃ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２００１，５３８：３６７-３７５．

［２３］ 彭嵐，談明光，李玉蘭，等． 微波輔助萃取－液質聯用技術測底泥砷、硒的化學形態［Ｊ］． 分析試驗室，２００６，２５（５）：２２８－２３５．

［２４］ 張濤，高愈希，李柏，等． 高效液相色譜－等離子體質譜聯用方法研究富硒大米中硒的形態［Ｊ］． 分析化學研究報告，２００８，３６（２）：２０６－２１０．

［２５］ ＺＨＥＮＧ Ｊ， ＹＡＳＵＹＵＫＩ Ｓ． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｌｅｎｏａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｕｓｉｎｇ ｔｗｏ ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｉｏｎ ｐａｉｒ ｒｅｖｅｒｓｅｄ ｐｈａｓｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ｏｎ－ｌｉｎｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ＩＣＰ－ＭＳ［Ｊ］．Ｔａｌａｎｔａ，２００３，６５：２７－３６．

［２６］ ＷＡＮＧ Ｒ Ｙ， ＨＳＵ Ｙ Ｌ． Ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｒｓｅｎｉｃ ａｎｄ ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｉｎ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓａｍｐｌｅｓ ｂｙ ｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｐｌａｓｍａ ｄｙｎａｍｉｃ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｃｅｌｌ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ ，２００７，１０５：２３９–２４４．

［２７］ ＳＭＲＫＯＬ Ｊ Ｐ， ＳＴＩＢＩＬ Ｊ Ｖ， ＫＲＥＦＴ Ｉ．．Ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ｂｕｃｋｗｈｅａｔ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆｏｌｉａｒ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｅ（Ⅵ） ａｎｄ ｖａｒｉｏｕｓ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＵＶ－Ｂ［Ｊ］． Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２００６，２６：６７５–６８１．

［２８］ ＺＯＹＮＥ Ｐ， ＤＡＮＩＥＬ Ｅ， ＣＡＲＭＥＮ Ｃ， ｅｔ ａｌ． Ｓｅｌｅｎｉｕｍ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｉｅｓ ｄｕｒｉｎｇ Ｂｒｏｃｃｏｌｉ ｇｒｏｗｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ ｂｙ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ-ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｐｌａｓｍａ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］． Ａｎａｌｙｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２００７，１３５：２５１-２５６．

［２９］ ＴＹＲＥ Ｄ Ｇ ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｅ－ｍｅｔｈｙｌ ｓｅｌｅｎｏｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ ｉｎ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ ｒｏｏｔｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ， ２００４，１５９–１６６．

［３０］ ＡＭＩＴ Ｃ， ＳＨＩＢＡＴＡ Ｙ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ＳｅＭｅｔ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｄｉｒｅｃｔ ｈｙｄｒｉｄｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｔｏｍｉｃ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］． Ｍｉｃｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，２００１，５１０：１７９－１８７．